血友病症例における同種骨髄由来間葉系幹細胞療法

血友病 A は、第 VIII 因子の欠乏または異常によって引き起こされる X 関連の出血性疾患です。 これは、男性の約 10,000 人に 1 人の割合で発生する、最も一般的な遺伝性の凝固タンパク質欠乏症です。 血友病患者の 75% 以上が重症型の疾患に苦しんでいます。

先進国では血友病の治療が容易に利用できます。しかし、世界中でこの病気にかかっている人の 70% が診断されていないか、十分に治療されていないと推定されています。 さらに、血友病 A 患者の約 20% が治療阻害物質を発症し、その結果、治療が困難になります。

血友病患者の外因性第 8 因子置換は、経済的および医学的に大きな課題をもたらします。 これらの患者に対する最適な治療オプションは、因子の内因性分泌を提供することです。 これは、肝移植を通じて提案されました。 ヒトおよびイヌの血友病 A における肝移植は、第 VIII 因子レベルを正常値まで増加させ、出血素因を治癒します。 ドナーの利用可能性、主要な手術手順、および生涯にわたる免疫抑制の必要性の問題を考えると、単離された肝細胞を使用した細胞ベースの治療は、凝固障害を治療するための有望な選択肢として提案されています。 マウスの腎被膜下に移植されたヒト肝細胞の治療効果が実証されています。 虚血/再灌流損傷後にビリルビン抱合が欠損した野生型ラットを移植すると、血清ビリルビンが 30% 減少し、胆汁中にビリルビン抱合体が出現し、正常なグルクロニルトランスフェラーゼ酵素が発現したことから、少数の肝細胞を移植すると、機能的欠陥の部分的な修正。

肝細胞の細胞移植は、手術のリスクを解決しますが、in vitroでの肝細胞の増殖が困難であるという欠点があります。

肝細胞移植に代わる方法は、インビトロ分化転換骨髄由来幹細胞の使用です。

ここ数年、骨髄由来細胞から損傷した肝臓を再生する新しい選択肢が、多くの研究者によって提案されてきました。 研究は、骨髄細胞が肝臓および肝臓類洞内皮細胞に分化するだけでなく、FVIII A3 ドメインの完全な遺伝子も発現することを示しました。

間葉系幹細胞には、細胞療法の候補として多くの利点があります。 それらはインビトロで増殖でき、ヒト白血球抗原（HLA）-Gのみを発現するため免疫反応を誘発せず、インビトロで肝細胞表現型を採用することが証明されています。

血友病 A 患者では、母親が保因者であり、父親が完全に正常であり、女性の兄弟姉妹が正常または保因者である可能性は 50% です。 したがって、家系内で FVIII 活性が正常な HLA 適合ドナーを見つける可能性があります。 間葉系幹細胞 (BM-MSC) の使用には、BM-HSC よりも次の利点があります。

1. MSC は、肝臓と内皮の両方の表現型に区別できます
2. MSC は、免疫抑制を引き起こした HLA-G 以外の HLA 抗原を発現しないため、MSC 移植とのマッチングが容易になります。

本研究の仮説は、血友病患者の細胞療法製品として in vitro で肝細胞表現型を採用するように誘導された同種骨髄由来間葉系幹細胞を使用することです。

寄付者は以下の対象となります：

1. 局所または短時間の全身麻酔下で骨髄を吸引し、40～60mlのBMをヘパリン注射器で採取します。
2. 単核細胞画分は、SEPAX マシン (Biosafe) を使用して分離されます。
3. ＭＳＣは、プラスチック接着を使用して単離され、ＧＭＰ条件下で連続的な線維芽細胞増殖因子および肝細胞増殖因子の添加を使用して肝臓誘導を受ける。
4. 肝誘導の検証は、形態学的、分子的およびプロテオミクススクリーニングを使用して行われます。
5. 次いで、細胞を０．２５％トリプシンを使用して回収し、洗浄し、最終容量５ｍｌで体重１ｋｇあたり２００万個の細胞の用量で無菌生理食塩水に懸濁し、超音波モニタリング下で肝実質に注射する。