Allogen benmargsavledet mesenkymal stamcelleterapi i tilfeller av hemofili

Hemofili A er en X-bundet blødningsforstyrrelse forårsaket av en mangel eller abnormitet av faktor VIII. Det er den vanligste arvelige koagulasjonsproteinmangelen med en forekomst på omtrent 1 av 10 000 menn. Mer enn 75 % av hemofile pasienter lider av den alvorlige typen sykdom.

Behandlinger for hemofili er lett tilgjengelig i utviklede land; Det er imidlertid anslått at 70 % av mennesker med denne sykdommen over hele verden er udiagnostisert eller underbehandlet. Videre utvikler ca. 20 % av hemofili A-pasienter inhibitorer til behandling og er følgelig vanskelige å behandle.

Eksogen faktor 8-erstatning for hemofilipasienter utgjør en stor økonomisk og medisinsk utfordring. Det optimale terapeutiske alternativet for disse pasientene er å gi endogen sekresjon av faktoren. Dette ble foreslått gjennom levertransplantasjon. Levertransplantasjon ved hemofili A hos mennesker og hunder resulterer i en økning i faktor VIII-nivåer til det normale og kurerer dermed den blødende diatesen. Gitt problemene med donortilgjengelighet, store operasjonsprosedyrer og behovet for livslang immunsuppresjon, har cellebasert terapi ved bruk av isolerte hepatocytter blitt foreslått som et lovende alternativ for å behandle koagulasjonsforstyrrelser. Den terapeutiske effektiviteten til humane hepatocytter transplantert under nyrekapslene til mus har blitt demonstrert. Transplantasjon av villtype rotter med mangelfull bilirubinkonjugering etter iskemi/reperfusjonsskade resulterte i 30 % reduksjon i serumbilirubin, forekomsten av bilirubinkonjugater i gallen og uttrykket av normalt glukuronyltransferaseenzym, noe som indikerer at transplantasjon av et lite antall hepatocytter kan føre til delvis korrigering av funksjonsfeil.

Selv om cellulær transplantasjon av hepatocytter løser den operative risikoen, har den ulempen med vanskelig forplantning av hepatocytter in vitro.

Et alternativ til hepatocytttransplantasjon er bruken av in vitro transdifferensierte benmargsavledede stamceller.

I løpet av de siste årene har et nytt alternativ for å regenerere skadet lever fra benmargsavledede celler blitt foreslått av mange etterforskere. Studier viste at benmargsceller ikke bare differensierte til lever- og leversinusformede endotelceller, men de uttrykte også det intakte genet til FVIII A3-domenet.

Mesenkymale stamceller har mange fordeler som kandidater for cellulær terapi. De kan formeres in vitro, fremkaller ikke immunreaksjoner da de bare uttrykker humant leukocyttantigen (HLA)-G, og har vist seg å adoptere hepatocyttfenotype in vitro.

Hos hemofili A-pasienter er mor bærer, far er helt normal, og kvinnelige søsken har 50 % sjanse for å være normal eller bærer. Dermed er muligheten for å finne en HLA-matchet donor med normal FVIII-aktivitet i familien tilstede. Bruken av mesenkymale stamceller (BM-MSCs) har følgende fordeler fremfor BM-HSCs:

1. MSC-er kan differensiere til både hepatiske og endoteliale fenotyper
2. MSC-er uttrykker ikke HLA-antigener bortsett fra HLA-G som forårsaket immunsuppresjon, og matching for MSC-transplantasjon kan derfor være lettere.

Hypotesen for denne studien er å bruke allogene benmargsavledede mesenkymale stamceller indusert til å adoptere hepatocyttfenotype in vitro som et cellulært terapiprodukt hos hemofilipasienter.

Givere vil bli utsatt for:

1. Benmargsaspirasjon under lokal eller kort generell anestesi, 40-60ml BM samles på hepariniserte sprøyter.
2. Mononukleær cellefraksjon vil bli separert ved hjelp av SEPAX-maskin (Biosafe)
3. MSC-er vil bli isolert ved bruk av plastisk adherens og utsatt for leverinduksjon ved bruk av sekvensiell fibroblastvekstfaktor og hepatocyttvekstfaktortilsetning under GMP-betingelser.
4. Verifikasjon av leverinduksjon vil bli gjort ved hjelp av morfologisk, molekylær og proteomisk screening.
5. Celler vil deretter bli høstet med 0,25 % trypsin, vasket og suspendert i sterilt saltvann i en dose på 2 millioner celler per kg kroppsvekt i et sluttvolum på 5 ml og injisert i leverparenkymet under sonografisk overvåking.