Allogeniczna terapia mezenchymalnymi komórkami macierzystymi pochodzącymi ze szpiku kostnego w przypadkach hemofilii

Hemofilia A jest sprzężoną z chromosomem X skazą krwotoczną spowodowaną niedoborem lub nieprawidłowością czynnika VIII. Jest to najczęstszy dziedziczny niedobór białek krzepnięcia, występujący u około 1 na 10 000 mężczyzn. Ponad 75% pacjentów z hemofilią cierpi na ciężki typ choroby.

Leczenie hemofilii jest łatwo dostępne w krajach rozwiniętych; jednak szacuje się, że 70% osób z tą chorobą na całym świecie jest niezdiagnozowanych lub nieleczonych. Co więcej, u około 20% pacjentów z hemofilią typu A rozwijają się inhibitory leczenia, przez co ich leczenie jest trudne.

Zastąpienie egzogennego czynnika 8 u pacjentów z hemofilią stanowi wielkie wyzwanie finansowe i medyczne. Optymalną opcją terapeutyczną dla tych pacjentów jest zapewnienie endogennego wydzielania czynnika. Zostało to zaproponowane poprzez przeszczep wątroby. Przeszczep wątroby u ludzi i psów z hemofilią A powoduje wzrost poziomu czynnika VIII do normy, a tym samym wyleczenie skazy krwotocznej. Biorąc pod uwagę problemy z dostępnością dawców, poważną procedurę operacyjną i konieczność stosowania immunosupresji przez całe życie, zaproponowano terapię komórkową z wykorzystaniem izolowanych hepatocytów jako obiecującą opcję leczenia zaburzeń krzepnięcia. Wykazano skuteczność terapeutyczną ludzkich hepatocytów przeszczepionych pod torebki nerkowe myszy. Przeszczep szczurów typu dzikiego z niedoborem koniugacji bilirubiny po uszkodzeniu spowodowanym niedokrwieniem/reperfuzją spowodował 30% spadek stężenia bilirubiny w surowicy, pojawienie się koniugatów bilirubiny w żółci oraz ekspresję prawidłowego enzymu glukuronylotransferazy, co oznacza, że ​​przeszczep niewielkiej liczby hepatocytów może spowodować częściowa korekta wad funkcjonalnych.

Chociaż przeszczep komórek hepatocytów rozwiązuje ryzyko operacyjne, ma tę wadę, że utrudnia namnażanie się hepatocytów in vitro.

Alternatywą dla przeszczepu hepatocytów jest wykorzystanie in vitro transdyferencjalnych komórek macierzystych pochodzących ze szpiku kostnego.

W ciągu ostatnich kilku lat wielu badaczy zaproponowało nową opcję regeneracji uszkodzonej wątroby z komórek pochodzących ze szpiku kostnego. Badania wykazały, że komórki szpiku kostnego nie tylko różnicowały się w wątrobowe i wątrobowe komórki śródbłonka sinusoidalnego, ale także wyrażały nienaruszony gen domeny FVIII A3.

Mezenchymalne komórki macierzyste mają wiele zalet jako kandydaci do terapii komórkowej. Mogą być rozmnażane in vitro, nie wywołują reakcji immunologicznej, ponieważ wykazują ekspresję wyłącznie ludzkiego antygenu leukocytarnego (HLA)-G i udowodniono, że przyjmują fenotyp hepatocytów in vitro.

U pacjentów z hemofilią A matka jest nosicielem, ojciec jest całkowicie zdrowy, a rodzeństwo płci żeńskiej ma 50% szans na bycie normalnym lub nosicielem. Zatem istnieje możliwość znalezienia dawcy dopasowanego pod względem HLA z normalną aktywnością FVIII w rodzinie. Zastosowanie mezenchymalnych komórek macierzystych (BM-MSC) ma następujące zalety w stosunku do BM-HSC:

1. MSC mogą różnicować się zarówno w fenotypy wątrobowe, jak i śródbłonkowe
2. MSC nie wykazują ekspresji antygenów HLA z wyjątkiem HLA-G, który powodował immunosupresję, dlatego dopasowanie do przeszczepu MSC może być łatwiejsze.

Hipotezą niniejszej pracy jest wykorzystanie allogenicznych mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących ze szpiku kostnego indukowanych do adopcji fenotypu hepatocytów in vitro jako produktu terapii komórkowej u pacjentów z hemofilią.

Darczyńcy zostaną poddani:

1. Aspiracja szpiku kostnego w znieczuleniu miejscowym lub krótkim ogólnym, 40-60ml BM zostanie pobrana na heparynizowane strzykawki.
2. Frakcja komórek jednojądrzastych zostanie oddzielona za pomocą urządzenia SEPAX (Biosafe)
3. MSC zostaną wyizolowane przy użyciu przylegania do plastiku i poddane indukcji wątrobowej przy użyciu sekwencyjnego czynnika wzrostu fibroblastów i czynnika wzrostu hepatocytów w warunkach GMP.
4. Weryfikacja indukcji czynności wątroby zostanie przeprowadzona za pomocą badań przesiewowych morfologicznych, molekularnych i proteomicznych.
5. Następnie komórki zostaną zebrane przy użyciu 0,25% trypsyny, przemyte i zawieszone w sterylnej soli fizjologicznej w dawce 2 milionów komórek na kg masy ciała w końcowej objętości 5 ml i wstrzyknięte do miąższu wątroby pod kontrolą ultrasonograficzną.