Terapia alogênica com células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea em casos de hemofilia

A hemofilia A é um distúrbio hemorrágico ligado ao cromossomo X causado por uma deficiência ou anormalidade do fator VIII. É a deficiência de proteína de coagulação hereditária mais comum, com incidência de aproximadamente 1 em 10.000 homens. Mais de 75% dos pacientes hemofílicos sofrem do tipo grave da doença.

Os tratamentos para hemofilia estão prontamente disponíveis em países desenvolvidos; no entanto, estima-se que 70% das pessoas com essa doença em todo o mundo não sejam diagnosticadas ou sejam subtratadas. Além disso, cerca de 20% dos pacientes com hemofilia A desenvolvem inibidores do tratamento e, consequentemente, são de difícil tratamento.

A reposição exógena do fator 8 para pacientes hemofílicos apresenta um grande desafio financeiro e médico. A opção terapêutica ideal para esses pacientes é fornecer secreção endógena do fator. Isso foi proposto por meio de transplante de fígado. O transplante de fígado na hemofilia A humana e canina resulta em um aumento dos níveis de fator VIII para o normal e, portanto, cura a diátese hemorrágica. Dados os problemas de disponibilidade de doadores, procedimentos cirúrgicos importantes e a necessidade de imunossupressão vitalícia, a terapia baseada em células usando hepatócitos isolados foi proposta como uma opção promissora para tratar distúrbios de coagulação. A eficácia terapêutica de hepatócitos humanos transplantados sob as cápsulas renais de camundongos foi demonstrada. O transplante de ratos selvagens com conjugação deficiente de bilirrubina após dano de isquemia/reperfusão resultou em diminuição de 30% na bilirrubina sérica, o aparecimento de conjugados de bilirrubina na bile e a expressão da enzima glucuroniltransferase normal denotando que o transplante de um pequeno número de hepatócitos pode resultar em correção parcial de defeitos funcionais.

Embora o transplante celular de hepatócitos resolva o risco operatório, tem a desvantagem de dificultar a propagação dos hepatócitos in vitro.

Uma alternativa ao transplante de hepatócitos é o uso de células-tronco derivadas da medula óssea transdiferenciadas in vitro.

Nos últimos anos, uma nova opção para regenerar o fígado danificado a partir de células derivadas da medula óssea foi proposta por muitos investigadores. Estudos mostraram que as células da medula óssea não apenas se diferenciaram em células endoteliais hepáticas e sinusoidais, mas também expressaram o gene intacto do domínio FVIII A3.

As células-tronco mesenquimais têm muitas vantagens como candidatas à terapia celular. Eles podem ser propagados in vitro, não evocam reação imune, pois expressam apenas o antígeno leucocitário humano (HLA)-G e foi comprovado que adotam o fenótipo de hepatócito in vitro.

Nos pacientes com hemofilia A, a mãe é portadora, o pai é completamente normal e as irmãs têm 50% de chance de serem normais ou portadoras. Assim, existe a possibilidade de encontrar um doador HLA compatível com atividade normal de FVIII na família. O uso de células-tronco mesenquimais (BM-MSCs) tem as seguintes vantagens sobre BM-HSCs:

1. MSCs podem se diferenciar em fenótipos hepáticos e endoteliais
2. MSCs não expressam antígenos HLA, exceto HLA-G, que causou imunossupressão, portanto, a correspondência para transplante de MSC pode ser mais fácil.

A hipótese do presente estudo é utilizar células-tronco mesenquimais alogênicas derivadas da medula óssea induzidas a adotar o fenótipo hepatócito in vitro como um produto de terapia celular em pacientes hemofílicos.

Os doadores estarão sujeitos a:

1. Aspiração de medula óssea sob anestesia local ou geral curta, 40-60ml BM serão coletados em seringas heparinizadas.
2. Fração de células mononucleares será separada usando máquina SEPAX (Biosafe)
3. As MSCs serão isoladas por adesão plástica e submetidas à indução hepática utilizando fator de crescimento de fibroblastos sequencial e adição de fator de crescimento de hepatócitos em condições GMP.
4. A verificação da indução hepática será feita por triagem morfológica, molecular e proteômica.
5. As células serão então colhidas com tripsina 0,25%, lavadas e suspensas em soro fisiológico estéril na dose de 2 milhões de células por kg de peso corporal em um volume final de 5ml e injetadas no parênquima hepático sob monitoramento ultrassonográfico.