Allogeeninen luuytimestä johdettu mesenkymaalinen kantasoluterapia hemofiliatapauksissa

Hemofilia A on X:ään liittyvä verenvuotohäiriö, joka johtuu tekijä VIII:n puutteesta tai poikkeavuudesta. Se on yleisin perinnöllinen hyytymisproteiinin puutos, jonka ilmaantuvuus on noin yksi 10 000 miehestä. Yli 75 % hemofiliapotilaista kärsii taudin vakavasta tyypistä.

Hemofiliahoitoja on helposti saatavilla kehittyneissä maissa; On kuitenkin arvioitu, että 70 % ihmisistä, joilla on tämä sairaus maailmanlaajuisesti, jää diagnosoimatta tai alihoitoa. Lisäksi noin 20 % hemofilia A -potilaista kehittää hoidon inhibiittoreita, ja siksi niitä on vaikea hoitaa.

Eksogeenisen tekijän 8 korvaaminen hemofiliapotilaille on suuri taloudellinen ja lääketieteellinen haaste. Optimaalinen terapeuttinen vaihtoehto näille potilaille on aikaansaada tekijän endogeeninen eritys. Tätä ehdotettiin maksansiirrolla. Ihmisen ja koiran hemofilia A:n maksansiirto johtaa tekijä VIII -tasojen nousuun normaaliksi ja parantaa siten verenvuotodiateesia. Kun otetaan huomioon luovuttajien saatavuuteen liittyvät ongelmat, suuret leikkaustoimenpiteet ja elinikäisen immunosuppression tarve, solupohjaista hoitoa, jossa käytetään eristettyjä hepatosyyttejä, on ehdotettu lupaavaksi vaihtoehdoksi hyytymishäiriöiden hoitoon. Hiirten munuaiskapseleiden alle siirrettyjen ihmisen hepatosyyttien terapeuttinen tehokkuus on osoitettu. Villityypin rottien, joiden bilirubiinikonjugaatio oli puutteellinen iskemia-/reperfuusiovaurion jälkeen, transplantaatio johti seerumin bilirubiinin laskuun 30 %, bilirubiinikonjugaattien ilmaantumiseen sapessa ja normaalin glukuronyylitransferaasientsyymin ilmentymiseen, mikä tarkoittaa, että pienen hepatosyyttimäärän siirto voi johtaa toiminnallisten vikojen osittainen korjaus.

Vaikka hepatosyyttien solusiirto ratkaisee operatiivisen riskin, sen haittapuolena on hepatosyyttien vaikea lisääntyminen in vitro.

Vaihtoehto hepatosyyttisiirrolle on in vitro transdifferentioituneiden luuytimestä peräisin olevien kantasolujen käyttö.

Muutaman viime vuoden aikana monet tutkijat ovat ehdottaneet uutta vaihtoehtoa vaurioituneen maksan regeneroimiseksi luuytimestä peräisin olevista soluista. Tutkimukset osoittivat, että luuydinsolut eivät vain erilaistuneet maksan ja maksan sinimuotoisiksi endoteelisoluiksi, vaan ne ilmensivät myös FVIII A3 -domeenin koskematonta geeniä.

Mesenkymaalisilla kantasoluilla on monia etuja soluterapian ehdokkaina. Niitä voidaan lisätä in vitro, eivätkä ne aiheuta immuunireaktiota, koska ne ilmentävät vain ihmisen leukosyyttiantigeeniä (HLA)-G:tä, ja niiden on osoitettu omaksuvan hepatosyyttifenotyypin in vitro.

Hemofilia A -potilailla äiti on kantaja, isä täysin normaali ja naispuolisilla sisaruksilla on 50 %:n mahdollisuus olla normaali tai kantaja. Siten on olemassa mahdollisuus löytää perheestä HLA-yhteensopiva luovuttaja, jolla on normaali FVIII-aktiivisuus. Mesenkymaalisten kantasolujen (BM-MSC) käytöllä on seuraavat edut BM-HSC:ihin verrattuna:

1. MSC:t voivat erottua sekä maksan että endoteelin fenotyypeiksi
2. MSC:t eivät ilmennä HLA-antigeenejä paitsi HLA-G:tä, joka aiheutti immunosuppression, joten sovittaminen MSC-transplantaatioon voi olla helpompaa.

Tämän tutkimuksen hypoteesi on käyttää allogeenisia luuytimestä peräisin olevia mesenkymaalisia kantasoluja, jotka on indusoitu omaksumaan hepatosyyttifenotyyppiä in vitro soluhoitotuotteena hemofiliapotilailla.

Lahjoittajia kohdellaan:

1. Luuytimen aspiraatio paikallisessa tai lyhyessä yleisanestesiassa, 40-60 ml BM kerätään heparinisoituihin ruiskuihin.
2. Mononukleaarisolufraktio erotetaan SEPAX-koneella (Biosafe)
3. MSC:t eristetään käyttämällä plastista adherenssia ja altistetaan maksan induktiolle käyttämällä peräkkäistä fibroblastikasvutekijän ja hepatosyyttikasvutekijän lisäystä GMP-olosuhteissa.
4. Maksan induktio varmistetaan käyttämällä morfologista, molekyyli- ja proteomista seulontaa.
5. Solut kerätään sitten käyttämällä 0,25 % trypsiiniä, pestään ja suspendoidaan steriiliin suolaliuokseen annoksena 2 miljoonaa solua ruumiinpainokiloa kohden 5 ml:n lopullisessa tilavuudessa ja injektoidaan maksan parenkyymaan sonografisen seurannan alaisena.