혈우병 환자의 동종이계 골수유래 중간엽 줄기세포 치료

혈우병 A는 인자 VIII의 결핍 또는 이상으로 인해 발생하는 X-연관 출혈 장애입니다. 이는 남성 10,000명당 약 1명의 발병률을 갖는 가장 흔한 유전성 응고 단백질 결핍증입니다. 혈우병 환자의 75% 이상이 심각한 유형의 질병을 앓고 있습니다.

혈우병 치료제는 선진국에서 쉽게 구할 수 있습니다. 그러나 전 세계적으로 이 질병을 가진 사람들의 70%가 진단을 받지 못하거나 제대로 치료받지 못하는 것으로 추정됩니다. 더욱이 혈우병 A 환자의 약 20%는 치료에 대한 억제제를 개발하여 결과적으로 치료가 어렵습니다.

혈우병 환자를 위한 외인성 인자 8 대체는 큰 재정적 및 의학적 도전을 제시합니다. 이러한 환자를 위한 최적의 치료 옵션은 인자의 내인성 분비를 제공하는 것입니다. 이것은 간 이식을 통해 제안되었습니다. 인간과 송곳니 A형 혈우병의 간 이식은 인자 VIII 수치를 정상으로 증가시켜 출혈 체질을 치료합니다. 기증자 가용성 문제, 주요 수술 절차 및 평생 면역 억제의 필요성을 감안할 때 분리된 간세포를 사용하는 세포 기반 요법은 응고 장애를 치료하는 유망한 옵션으로 제안되었습니다. 생쥐의 신장 캡슐 아래에 이식된 인간 간세포의 치료 효과가 입증되었습니다. 허혈/재관류 손상 후 빌리루빈 포합체가 결핍된 야생형 쥐를 이식하면 혈청 빌리루빈이 30% 감소하고 담즙에서 빌리루빈 접합체가 나타나며 정상적인 글루쿠로닐트랜스퍼라제 효소의 발현이 나타나 소수의 간세포 이식이 다음을 유발할 수 있음을 나타냅니다. 기능적 결함의 부분 수정.

간세포의 세포이식은 수술적 위험을 해결하지만 in vitro에서 간세포의 증식이 어렵다는 단점이 있다.

간세포 이식의 대안은 시험관 내 전환분화 골수 유래 줄기 세포를 사용하는 것입니다.

지난 몇 년 동안 골수 유래 세포에서 손상된 간을 재생하는 새로운 옵션이 많은 조사자들에 의해 제안되었습니다. 연구에 따르면 골수 세포는 간 및 간 정현파 내피 세포로 분화되었을 뿐만 아니라 FVIII A3 도메인의 손상되지 않은 유전자도 발현했습니다.

중간엽 줄기 세포는 세포 치료의 후보로서 많은 이점을 가지고 있습니다. 그들은 체외에서 전파될 수 있고, 인간 백혈구 항원(HLA)-G만 발현하기 때문에 면역 반응을 일으키지 않으며, 체외에서 간세포 표현형을 채택하는 것으로 입증되었습니다.

A형 혈우병 환자의 경우 어머니가 보인자, 아버지가 완전히 정상이고 여자 형제가 정상이거나 보인자일 확률은 50%입니다. 따라서 가족 내에서 정상적인 FVIII 활성을 가진 HLA 일치 기증자를 찾을 가능성이 있습니다. 중간엽 줄기 세포(BM-MSC)를 사용하면 BM-HSC보다 다음과 같은 이점이 있습니다.

1. MSC는 간 및 내피 표현형으로 분화할 수 있습니다.
2. MSC는 면역 억제를 일으키는 HLA-G를 제외하고는 HLA 항원을 발현하지 않으므로 MSC 이식을 위한 매칭이 더 쉬울 수 있습니다.

본 연구의 가설은 in vitro에서 간세포 표현형을 채택하도록 유도된 동종이계 골수 유래 중간엽 줄기세포를 혈우병 환자의 세포 치료제로 사용하는 것이다.

기부자는 다음의 대상이 됩니다.

1. 국소 또는 단기 전신 마취 하의 골수 흡인, 40-60ml BM이 헤파린 처리된 주사기에 수집됩니다.
2. SEPAX 기계(Biosafe)를 사용하여 단핵 세포 분획을 분리합니다.
3. 중간엽 줄기세포는 가소성 부착을 사용하여 분리되고 GMP 조건 하에서 순차적인 섬유아세포 성장 인자 및 간세포 성장 인자 추가를 사용하여 간 유도를 받게 됩니다.
4. 간 유도의 확인은 형태학, 분자 및 단백질 스크리닝을 사용하여 수행됩니다.
5. 그런 다음 세포를 0.25% 트립신을 사용하여 수확하고, 최종 부피 5ml로 체중 kg당 2백만 세포의 용량으로 멸균 식염수에 세척 및 현탁하고 초음파 모니터링 하에 간 실질에 주입합니다.