Аллогенная терапия мезенхимальными стволовыми клетками костного мозга в случаях гемофилии

Гемофилия А представляет собой сцепленное с Х-хромосомой нарушение свертываемости крови, вызванное дефицитом или аномалией фактора VIII. Это наиболее распространенный наследственный дефицит белка свертывания крови, встречающийся примерно у 1 из 10 000 мужчин. Более 75% больных гемофилией страдают тяжелой формой заболевания.

Лечение гемофилии легко доступно в развитых странах; однако, по оценкам, 70% людей с этим заболеванием во всем мире не диагностированы или недостаточно лечатся. Более того, примерно у 20% пациентов с гемофилией А развиваются ингибиторы лечения, и, следовательно, их трудно лечить.

Замена экзогенного фактора 8 у пациентов с гемофилией представляет собой большую финансовую и медицинскую проблему. Оптимальным терапевтическим вариантом для этих больных является обеспечение эндогенной секреции фактора. Это было предложено через трансплантацию печени. Трансплантация печени при гемофилии А человека и собак приводит к повышению уровня фактора VIII до нормы и, таким образом, излечивает геморрагический диатез. Учитывая проблемы с доступностью доноров, обширные оперативные вмешательства и необходимость пожизненной иммуносупрессии, клеточная терапия с использованием изолированных гепатоцитов была предложена в качестве многообещающего варианта лечения нарушений свертывания крови. Показана терапевтическая эффективность гепатоцитов человека, трансплантированных под капсулы почек мышей. Трансплантация крыс дикого типа с дефицитом конъюгации билирубина после ишемии/реперфузии приводила к снижению уровня билирубина в сыворотке на 30%, появлению конъюгатов билирубина в желчи и нормальной экспрессии фермента глюкуронилтрансферазы, что свидетельствует о том, что трансплантация небольшого числа гепатоцитов может привести к частичная коррекция функциональных дефектов.

Хотя клеточная трансплантация гепатоцитов снижает операционный риск, она имеет недостаток, заключающийся в сложности размножения гепатоцитов in vitro.

Альтернативой трансплантации гепатоцитов является использование трансдифференцированных in vitro стволовых клеток костного мозга.

За последние несколько лет многие исследователи предложили новый вариант регенерации поврежденной печени из клеток, полученных из костного мозга. Исследования показали, что клетки костного мозга не только дифференцировались в печеночные и синусоидальные эндотелиальные клетки, но также экспрессировали интактный ген домена FVIII A3.

Мезенхимальные стволовые клетки имеют много преимуществ в качестве кандидатов для клеточной терапии. Их можно размножать in vitro, они не вызывают иммунную реакцию, поскольку экспрессируют только человеческий лейкоцитарный антиген (HLA)-G, и было доказано, что они принимают фенотип гепатоцитов in vitro.

У пациентов с гемофилией А мать является носителем, отец полностью нормален, а вероятность того, что братья и сестры женского пола будут нормальными или носителями, составляет 50%. Таким образом, возможность найти в семье HLA-совместимого донора с нормальной активностью FVIII присутствует. Использование мезенхимальных стволовых клеток (ВМ-МСК) имеет следующие преимущества перед ВМ-ГСК:

1. МСК могут дифференцироваться как в печеночный, так и в эндотелиальный фенотип.
2. МСК не экспрессируют антигены HLA, за исключением HLA-G, который вызывает иммуносупрессию, поэтому подбор для трансплантации МСК может быть проще.

Гипотеза настоящего исследования заключается в использовании аллогенных мезенхимальных стволовых клеток, полученных из костного мозга, индуцированных in vitro для принятия фенотипа гепатоцитов, в качестве продукта клеточной терапии у пациентов с гемофилией.

Доноры будут подвергаться:

1. Аспирация костного мозга под местной или короткой общей анестезией, 40-60 мл БМ будет собрана с помощью гепаринизированных шприцев.
2. Фракция мононуклеарных клеток будет выделена на машине SEPAX (Biosafe).
3. МСК будут выделены с использованием адгезии к пластику и подвергнуты индукции в печени с использованием последовательного добавления фактора роста фибробластов и фактора роста гепатоцитов в условиях GMP.
4. Проверка индукции печени будет проводиться с использованием морфологического, молекулярного и протеомного скрининга.
5. Затем клетки собирают с использованием 0,25% трипсина, промывают и суспендируют в стерильном физиологическом растворе в дозе 2 миллиона клеток на кг массы тела в конечном объеме 5 мл и вводят в паренхиму печени под контролем УЗИ.