Terapia alogénica con células madre mesenquimales derivadas de médula ósea en casos de hemofilia

La hemofilia A es un trastorno hemorrágico ligado al cromosoma X causado por una deficiencia o anomalía del factor VIII. Es la deficiencia de proteína de coagulación hereditaria más común con una incidencia de aproximadamente 1 en 10,000 hombres. Más del 75% de los pacientes hemofílicos padecen el tipo grave de la enfermedad.

Los tratamientos para la hemofilia están fácilmente disponibles en los países desarrollados; sin embargo, se estima que el 70% de las personas con esta enfermedad en todo el mundo no son diagnosticadas o reciben tratamiento insuficiente. Además, alrededor del 20 % de los pacientes con hemofilia A desarrollan inhibidores del tratamiento y, en consecuencia, son difíciles de tratar.

El reemplazo de factor 8 exógeno para pacientes con hemofilia presenta un gran desafío financiero y médico. La opción terapéutica óptima para estos pacientes es proporcionar secreción endógena del factor. Esto fue propuesto a través del trasplante de hígado. El trasplante de hígado en hemofilia A humana y canina da como resultado un aumento en los niveles de factor VIII a niveles normales y, por lo tanto, cura la diátesis hemorrágica. Dados los problemas de disponibilidad de donantes, procedimientos quirúrgicos importantes y la necesidad de inmunosupresión de por vida, la terapia basada en células que utiliza hepatocitos aislados se ha propuesto como una opción prometedora para tratar los trastornos de la coagulación. Se ha demostrado la eficacia terapéutica de hepatocitos humanos trasplantados bajo cápsulas renales de ratones. El trasplante de ratas de tipo salvaje con conjugación deficiente de bilirrubina después del daño por isquemia/reperfusión resultó en una disminución del 30 % en la bilirrubina sérica, la aparición de conjugados de bilirrubina en la bilis y la expresión de la enzima glucuroniltransferasa normal, lo que indica que el trasplante de una pequeña cantidad de hepatocitos puede resultar en corrección parcial de defectos funcionales.

Aunque el trasplante celular de hepatocitos resuelve el riesgo operatorio, tiene el inconveniente de dificultar la propagación de hepatocitos in vitro.

Una alternativa al trasplante de hepatocitos es el uso de células madre derivadas de médula ósea transdiferenciadas in vitro.

En los últimos años, muchos investigadores han propuesto una nueva opción para regenerar el hígado dañado a partir de células derivadas de la médula ósea. Los estudios demostraron que las células de la médula ósea no solo se diferenciaron en células endoteliales sinusoidales hepáticas y hepáticas, sino que también expresaron el gen intacto del dominio FVIII A3.

Las células madre mesenquimales tienen muchas ventajas como candidatas para la terapia celular. Se pueden propagar in vitro, no provocan una reacción inmunitaria ya que solo expresan antígeno leucocitario humano (HLA)-G y se ha demostrado que adoptan el fenotipo de hepatocito in vitro.

En los pacientes con hemofilia A, la madre es portadora, el padre es completamente normal y las hermanas tienen un 50% de posibilidades de ser normales o portadoras. Por lo tanto, existe la posibilidad de encontrar un donante compatible con HLA con actividad normal de FVIII en la familia. El uso de células madre mesenquimales (BM-MSC) tiene las siguientes ventajas sobre las BM-HSC:

1. Las MSC pueden diferenciarse en fenotipos hepáticos y endoteliales
2. Las MSC no expresan antígenos HLA excepto HLA-G que causó inmunosupresión, por lo que la compatibilidad para el trasplante de MSC puede ser más fácil.

La hipótesis del presente estudio es utilizar células madre mesenquimales alogénicas derivadas de médula ósea inducidas a adoptar el fenotipo de hepatocito in vitro como producto de terapia celular en pacientes con hemofilia.

Los donantes estarán sujetos a:

1. Aspiración de médula ósea bajo anestesia local o general breve, se recogerán 40-60 ml de MO en jeringas heparinizadas.
2. La fracción de células mononucleares se separará con una máquina SEPAX (Biosafe)
3. Las MSC se aislarán utilizando adherencia plástica y se someterán a inducción hepática mediante la adición de factor de crecimiento de fibroblastos secuencial y factor de crecimiento de hepatocitos en condiciones GMP.
4. La verificación de la inducción hepática se realizará mediante cribado morfológico, molecular y proteómico.
5. A continuación, se recolectarán las células utilizando tripsina al 0,25 %, se lavarán y suspenderán en solución salina estéril en una dosis de 2 millones de células por kg de peso corporal en un volumen final de 5 ml y se inyectarán en el parénquima hepático bajo control ecográfico.