Terapia con cellule staminali mesenchimali derivate dal midollo osseo allogenico nei casi di emofilia

L'emofilia A è una malattia emorragica legata all'X causata da una carenza o da un'anomalia del fattore VIII. È il più comune deficit ereditario di proteine ​​della coagulazione con un'incidenza di circa 1 su 10.000 maschi. Più del 75% dei pazienti emofilici soffre del tipo grave della malattia.

I trattamenti per l'emofilia sono prontamente disponibili nei paesi sviluppati; tuttavia, si stima che il 70% delle persone affette da questa malattia in tutto il mondo non sia diagnosticata o sottotrattata. Inoltre, circa il 20% dei pazienti con emofilia A sviluppa inibitori al trattamento e di conseguenza sono difficili da trattare.

La sostituzione del fattore 8 esogeno per i pazienti affetti da emofilia rappresenta una grande sfida finanziaria e medica. L'opzione terapeutica ottimale per questi pazienti è fornire la secrezione endogena del fattore. Questo è stato proposto attraverso il trapianto di fegato. Il trapianto di fegato nell'emofilia A umana e canina determina un aumento dei livelli di fattore VIII alla normalità e quindi cura la diatesi emorragica. Dati i problemi di disponibilità del donatore, la principale procedura operativa e la necessità di immunosoppressione per tutta la vita, la terapia cellulare utilizzando epatociti isolati è stata proposta come un'opzione promettente per il trattamento dei disturbi della coagulazione. È stata dimostrata l'efficacia terapeutica degli epatociti umani trapiantati sotto le capsule renali dei topi. Il trapianto di ratti wild-type con deficienza di coniugazione della bilirubina dopo danno da ischemia/riperfusione ha comportato una diminuzione del 30% della bilirubina sierica, la comparsa di coniugati di bilirubina nella bile e l'espressione dell'enzima glucuroniltransferasi normale, il che denota che il trapianto di un piccolo numero di epatociti può provocare correzione parziale dei difetti funzionali.

Sebbene il trapianto cellulare di epatociti risolva il rischio operatorio, presenta lo svantaggio di una difficile propagazione degli epatociti in vitro.

Un'alternativa al trapianto di epatociti è l'uso di cellule staminali derivate dal midollo osseo transdifferenziate in vitro.

Negli ultimi anni, molti ricercatori hanno proposto una nuova opzione per rigenerare il fegato danneggiato dalle cellule derivate dal midollo osseo. Gli studi hanno dimostrato che le cellule del midollo osseo non solo si differenziano in cellule epatiche ed endoteliali sinusoidali del fegato, ma esprimono anche il gene intatto del dominio FVIII A3.

Le cellule staminali mesenchimali hanno molti vantaggi come candidati per la terapia cellulare. Possono essere propagati in vitro, non evocano reazioni immunitarie in quanto esprimono solo l'antigene leucocitario umano (HLA)-G e hanno dimostrato di adottare il fenotipo degli epatociti in vitro.

Nei pazienti con emofilia A, la madre è portatrice, il padre è completamente normale e le sorelle hanno una probabilità del 50% di essere normali o portatrici. Pertanto, esiste la possibilità di trovare in famiglia un donatore HLA compatibile con normale attività di FVIII. L'uso di cellule staminali mesenchimali (BM-MSC) presenta i seguenti vantaggi rispetto alle BM-HSC:

1. Le MSC possono differenziarsi in fenotipi sia epatici che endoteliali
2. Le MSC non esprimono antigeni HLA eccetto l'HLA-G che ha causato l'immunosoppressione, quindi l'abbinamento per il trapianto di MSC può essere più facile.

L'ipotesi del presente studio è di utilizzare cellule staminali mesenchimali derivate da midollo osseo allogenico indotte ad adottare il fenotipo epatocitario in vitro come prodotto di terapia cellulare in pazienti affetti da emofilia.

I donatori saranno sottoposti a:

1. Aspirazione del midollo osseo in anestesia locale o breve generale, 40-60 ml di midollo osseo saranno raccolti su siringhe eparinizzate.
2. La frazione di cellule mononucleate sarà separata utilizzando la macchina SEPAX (Biosafe)
3. Le MSC saranno isolate mediante aderenza plastica e sottoposte ad induzione epatica mediante addizione sequenziale del fattore di crescita dei fibroblasti e del fattore di crescita degli epatociti in condizioni GMP.
4. La verifica dell'induzione epatica sarà effettuata mediante screening morfologico, molecolare e proteomico.
5. Le cellule saranno quindi raccolte utilizzando tripsina allo 0,25%, lavate e sospese in soluzione fisiologica sterile in una dose di 2 milioni di cellule per kg di peso corporeo in un volume finale di 5 ml e iniettate nel parenchima epatico sotto monitoraggio ecografico.