Thérapie allogénique par cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse dans les cas d'hémophilie

L'hémophilie A est un trouble hémorragique lié à l'X causé par une déficience ou une anomalie du facteur VIII. Il s'agit du déficit héréditaire en protéines de coagulation le plus courant avec une incidence d'environ 1 homme sur 10 000. Plus de 75 % des patients hémophiles souffrent du type grave de la maladie.

Les traitements de l'hémophilie sont facilement disponibles dans les pays développés ; cependant, on estime que 70 % des personnes atteintes de cette maladie dans le monde ne sont pas diagnostiquées ou sous-traitées. De plus, environ 20 % des patients atteints d'hémophilie A développent des inhibiteurs au traitement et sont par conséquent difficiles à traiter.

Le remplacement du facteur 8 exogène pour les patients hémophiles présente un grand défi financier et médical. L'option thérapeutique optimale pour ces patients est de fournir une sécrétion endogène du facteur. Cela a été proposé par la transplantation hépatique. La transplantation hépatique dans l'hémophilie A humaine et canine entraîne une augmentation des taux de facteur VIII à la normale et guérit ainsi la diathèse hémorragique. Compte tenu des problèmes de disponibilité des donneurs, des procédures opératoires majeures et de la nécessité d'une immunosuppression à vie, la thérapie cellulaire utilisant des hépatocytes isolés a été proposée comme une option prometteuse pour traiter les troubles de la coagulation. L'efficacité thérapeutique des hépatocytes humains transplantés sous les capsules rénales de souris a été démontrée. La transplantation de rats de type sauvage avec une conjugaison déficiente en bilirubine après une ischémie/reperfusion a entraîné une diminution de 30 % de la bilirubine sérique, l'apparition de conjugués de bilirubine dans la bile et l'expression de l'enzyme glucuronyltransférase normale indiquant que la transplantation d'un petit nombre d'hépatocytes peut entraîner une correction partielle des défauts fonctionnels.

Bien que la transplantation cellulaire d'hépatocytes résolve le risque opératoire, elle présente l'inconvénient d'une propagation difficile des hépatocytes in vitro.

Une alternative à la greffe d'hépatocytes est l'utilisation de cellules souches dérivées de moelle osseuse transdifférenciées in vitro.

Au cours des dernières années, une nouvelle option pour régénérer le foie endommagé à partir de cellules dérivées de la moelle osseuse a été proposée par de nombreux chercheurs. Des études ont montré que les cellules de la moelle osseuse se différenciaient non seulement en cellules endothéliales sinusoïdales hépatiques et hépatiques, mais qu'elles exprimaient également le gène intact du domaine FVIII A3.

Les cellules souches mésenchymateuses présentent de nombreux avantages en tant que candidates à la thérapie cellulaire. Ils peuvent être propagés in vitro, n'évoquent pas de réaction immunitaire car ils n'expriment que l'antigène leucocytaire humain (HLA)-G et il a été prouvé qu'ils adoptent le phénotype hépatocytaire in vitro.

Chez les patients atteints d'hémophilie A, la mère est porteuse, le père est tout à fait normal et la fratrie a 50 % de chances d'être normale ou porteuse. Ainsi, la possibilité de trouver un donneur compatible HLA avec une activité FVIII normale dans la famille est présente. L'utilisation de cellules souches mésenchymateuses (BM-MSC) présente les avantages suivants par rapport aux BM-HSC :

1. Les CSM peuvent se différencier en phénotypes hépatiques et endothéliaux
2. Les MSC n'expriment pas d'antigènes HLA à l'exception de HLA-G qui a provoqué une immunosuppression, ce qui facilite l'appariement pour la transplantation de MSC.

L'hypothèse de la présente étude est d'utiliser des cellules souches mésenchymateuses allogéniques dérivées de la moelle osseuse induites pour adopter le phénotype hépatocytaire in vitro comme produit de thérapie cellulaire chez les patients hémophiles.

Les donateurs seront soumis à :

1. Aspiration de la moelle osseuse sous anesthésie locale ou générale courte, 40-60 ml de BM seront prélevés sur des seringues héparinées.
2. La fraction de cellules mononucléaires sera séparée à l'aide de la machine SEPAX (Biosafe)
3. Les CSM seront isolées à l'aide d'une adhérence plastique et soumises à une induction hépatique à l'aide d'un facteur de croissance séquentiel des fibroblastes et d'un facteur de croissance des hépatocytes dans des conditions GMP.
4. La vérification de l'induction hépatique se fera par criblage morphologique, moléculaire et protéomique.
5. Les cellules seront ensuite récoltées à l'aide de trypsine à 0,25 %, lavées et mises en suspension dans une solution saline stérile à une dose de 2 millions de cellules par kg de poids corporel dans un volume final de 5 ml et injectées dans le parenchyme hépatique sous contrôle échographique.