Allogen knoglemarvs-afledt mesenkymal stamcelleterapi i tilfælde af hæmofili

Hæmofili A er en X-bundet blødningssygdom forårsaget af en mangel eller abnormitet af faktor VIII. Det er den mest almindelige arvelige koagulationsproteinmangel med en forekomst på cirka 1 ud af 10.000 mænd. Mere end 75% af hæmofile patienter lider af den alvorlige type sygdommen.

Hæmofili behandlinger er let tilgængelige i udviklede lande; dog anslås det, at 70 % af mennesker med denne sygdom på verdensplan er udiagnosticerede eller underbehandlede. Desuden udvikler omkring 20 % af hæmofili A-patienter inhibitorer til behandling og er derfor vanskelige at behandle.

Eksogen faktor 8-erstatning for hæmofilipatienter udgør en stor økonomisk og medicinsk udfordring. Den optimale terapeutiske mulighed for disse patienter er at tilvejebringe endogen sekretion af faktoren. Dette blev foreslået gennem levertransplantation. Levertransplantation ved hæmofili A hos mennesker og hunde resulterer i en stigning i faktor VIII-niveauer til det normale og helbreder således den blødende diatese. I betragtning af problemerne med donortilgængelighed, større operationelle procedurer og behovet for livslang immunsuppression, er cellebaseret terapi ved hjælp af isolerede hepatocytter blevet foreslået som en lovende mulighed for at behandle koagulationsforstyrrelser. Den terapeutiske effektivitet af humane hepatocytter transplanteret under nyrekapslerne fra mus er blevet påvist. Transplantation af vildtyperotter med mangelfuld bilirubinkonjugation efter iskæmi/reperfusionsskade resulterede i 30 % fald i serumbilirubin, forekomsten af ​​bilirubinkonjugater i galden og ekspression af normalt glucuronyltransferaseenzym, hvilket angiver, at transplantation af et lille antal hepatocytter kan resultere i delvis korrektion af funktionsfejl.

Selvom cellulær transplantation af hepatocytter løser den operative risiko, har det den ulempe, at det er vanskeligt at formere hepatocytter in vitro.

Et alternativ til hepatocyttransplantation er brugen af ​​in vitro transdifferentierede knoglemarvs-afledte stamceller.

I de sidste par år er en ny mulighed for at regenerere beskadiget lever fra knoglemarvs-afledte celler blevet foreslået af mange efterforskere. Undersøgelser viste, at knoglemarvsceller ikke kun differentierede til lever- og leversinusformede endotelceller, men de udtrykte også det intakte gen af ​​FVIII A3-domænet.

Mesenkymale stamceller har mange fordele som kandidater til cellulær terapi. De kan formeres in vitro, fremkalder ikke immunreaktioner, da de kun udtrykker humant leukocytantigen (HLA)-G og har vist sig at adoptere hepatocytfænotype in vitro.

Hos hæmofili A-patienter er moderen bærer, faderen er helt normal, og de kvindelige søskende har 50 % chance for at være normal eller bærer. Der er således mulighed for at finde en HLA-matchet donor med normal FVIII-aktivitet i familien. Brugen af ​​mesenkymale stamceller (BM-MSC'er) har følgende fordele i forhold til BM-HSC'er:

1. MSC'er kan differentiere til både hepatiske og endoteliale fænotyper
2. MSC'er udtrykker ikke HLA-antigener undtagen HLA-G, som forårsagede immunsuppression, så matchning til MSC-transplantation kan være lettere.

Hypotesen for denne undersøgelse er at anvende allogene knoglemarvs-afledte mesenkymale stamceller induceret til at adoptere hepatocyt-fænotype in vitro som et cellulært terapiprodukt hos hæmofilipatienter.

Donorer vil blive udsat for:

1. Knoglemarvsaspiration under lokal eller kort generel anæstesi, 40-60 ml BM vil blive opsamlet på hepariniserede sprøjter.
2. Mononukleær cellefraktion vil blive adskilt ved hjælp af SEPAX-maskine (Biosafe)
3. MSC'er vil blive isoleret ved hjælp af plastisk adhærens og udsat for hepatisk induktion ved anvendelse af sekventiel fibroblastvækstfaktor og hepatocytvækstfaktortilsætning under GMP-betingelser.
4. Verifikation af leverinduktion vil blive udført ved hjælp af morfologisk, molekylær og proteomisk screening.
5. Celler vil derefter blive høstet under anvendelse af 0,25 % trypsin, vasket og suspenderet i sterilt saltvand i en dosis på 2 millioner celler pr. kg legemsvægt i et slutvolumen på 5 ml og injiceret i leverparenkymet under sonografisk overvågning.