Allogene beenmerg afgeleide mesenchymale stamceltherapie in gevallen van hemofilie

Hemofilie A is een X-gebonden bloedingsstoornis die wordt veroorzaakt door een tekort aan of afwijking van factor VIII. Het is de meest voorkomende erfelijke stollingseiwitdeficiëntie met een incidentie van ongeveer 1 op de 10.000 mannen. Meer dan 75% van de hemofiliepatiënten lijdt aan het ernstige type van de ziekte.

Hemofiliebehandelingen zijn direct beschikbaar in ontwikkelde landen; er wordt echter geschat dat 70% van de mensen met deze ziekte wereldwijd niet gediagnosticeerd of onderbehandeld is. Bovendien ontwikkelt ongeveer 20% van de hemofilie A-patiënten remmers voor behandeling en zijn bijgevolg moeilijk te behandelen.

Exogene factor 8-vervanging voor hemofiliepatiënten vormt een grote financiële en medische uitdaging. De optimale therapeutische optie voor deze patiënten is endogene secretie van de factor. Dit werd voorgesteld door middel van levertransplantatie. Levertransplantatie bij hemofilie A bij mens en hond resulteert in een verhoging van de factor VIII-spiegels tot normaal en geneest zo de bloedingsdiathese. Gezien de problemen met de beschikbaarheid van donoren, de grote operatieprocedure en de noodzaak van levenslange immunosuppressie, is op cellen gebaseerde therapie met behulp van geïsoleerde hepatocyten voorgesteld als een veelbelovende optie om stollingsstoornissen te behandelen. De therapeutische effectiviteit van menselijke hepatocyten die onder de niercapsules van muizen zijn getransplanteerd, is aangetoond. Transplantatie van wildtype ratten met deficiënte bilirubineconjugatie na ischemie/reperfusieschade resulteerde in 30% afname van serumbilirubine, het verschijnen van bilirubineconjugaten in gal en de expressie van normaal glucuronyltransferase-enzym, wat aangeeft dat transplantatie van een klein aantal hepatocyten kan resulteren in gedeeltelijke correctie van functionele defecten.

Hoewel cellulaire transplantatie van hepatocyten het operatieve risico oplost, heeft het het nadeel dat de vermeerdering van hepatocyten in vitro moeilijk is.

Een alternatief voor hepatocytentransplantatie is het gebruik van in vitro getransdifferentieerde beenmergstamcellen.

In de afgelopen paar jaar is door veel onderzoekers een nieuwe optie voorgesteld om beschadigde lever te regenereren uit van beenmerg afgeleide cellen. Studies toonden aan dat beenmergcellen niet alleen differentieerden in lever- en leversinusoïdale endotheelcellen, maar dat ze ook het intacte gen van het FVIII A3-domein tot expressie brachten.

Mesenchymale stamcellen hebben veel voordelen als kandidaten voor cellulaire therapie. Ze kunnen in vitro worden vermeerderd, wekken geen immuunreactie op omdat ze alleen humaan leukocytenantigeen (HLA)-G tot expressie brengen, en het is bewezen dat ze in vitro het hepatocytenfenotype aannemen.

Bij hemofilie A-patiënten is de moeder drager, de vader volkomen normaal en hebben de vrouwelijke broers en zussen 50% kans om normaal of drager te zijn. De mogelijkheid om een ​​HLA-gematchte donor met normale FVIII-activiteit in de familie te vinden is dus aanwezig. Het gebruik van mesenchymale stamcellen (BM-MSC's) heeft de volgende voordelen ten opzichte van BM-HSC's:

1. MSC's kunnen differentiëren in zowel hepatische als endotheliale fenotypes
2. MSC's brengen geen HLA-antigenen tot expressie, behalve HLA-G, dat immunosuppressie veroorzaakte, waardoor matchen voor MSC-transplantatie gemakkelijker kan zijn.

De hypothese van de huidige studie is om allogene uit beenmerg afgeleide mesenchymale stamcellen te gebruiken die zijn geïnduceerd om hepatocytenfenotype in vitro aan te nemen als een cellulair therapieproduct bij hemofiliepatiënten.

Donateurs zullen worden onderworpen aan:

1. Beenmergaspiratie onder lokale of korte algemene anesthesie, 40-60 ml BM zal worden verzameld op gehepariniseerde injectiespuiten.
2. Mononucleaire celfractie wordt gescheiden met behulp van SEPAX-machine (Biosafe)
3. MSC's zullen worden geïsoleerd met behulp van plastic hechting en worden onderworpen aan hepatische inductie met behulp van sequentiële toevoeging van fibroblastgroeifactor en hepatocytengroeifactor onder GMP-omstandigheden.
4. Verificatie van hepatische inductie zal gebeuren met behulp van morfologische, moleculaire en proteomische screening.
5. Cellen worden vervolgens geoogst met behulp van 0,25% trypsine, gewassen en gesuspendeerd in steriele zoutoplossing in een dosis van 2 miljoen cellen per kg lichaamsgewicht in een eindvolume van 5 ml en geïnjecteerd in het leverparenchym onder echografische controle.