葛西手術時の胆道閉鎖症乳児のリンパ節における母体のマイクロキメリズム (K-LNMC)

非症候性胆道閉鎖症 (BA、最も一般的な形態) の乳児の手術時に、外科医はほぼ常に、肝門部および小腸腸間膜に最大 2 cm のサイズの複数の腫れたリンパ節の顕著な所見を指摘します。コンプレックスのような。 他の病状のために開腹された同年齢の乳児は、一般にそのような結節を示さない。

胆道閉鎖症は新生児の病気で、治療しないと致命的です。 組織学的に、それは、部分的に特異的な炎症性浸潤および進行性肝硬変内の肝内および肝外胆管の変性に対応する。

このまれではあるが一定の疾患 (1:8-1:15.000) の病因は不明です。 現在、学士号の病因研究では、2 つの主要な手段が追求されています。

1. ウイルス誘発性の周産期 (自己) 免疫プロセスが疑われます。 BA の実験的な形態は、マウスの母親に dsRNA ウイルスを感染させることによって誘発することができます。 アカゲザル-ロタウイルスまたはレオ-ウイルスは、マウスでは、母親のワクチン接種が実験的なBA . BAに対するγ/δ-T細胞およびIL17/IL23経路の重要性は、現在調査されている。 ただし、ウイルスの同じバッチで処理された同系動物のグループでは、BA は一定ではない傾向があり、動物モデルの妥当性についてなど、肝外胆管に限定されます。
2. 研究のもう 1 つの方向性は、主に新生動物を含む実験に依存していません。妊娠中に、胎盤関門が母体のリンパ球に対して透過性になる可能性があるという兆候があります (例えば、脱落膜間質細胞の T 細胞誘引ケモカインの不完全なサイレンシングによる)。 2008 年の母体リンパ球は、BA 乳児の肝臓で実証されています。 その後、母体と胎児のマイクロキメリズムの現象が BA の病因学研究の焦点になりました。母体由来の母体と胎児の混合免疫反応の文脈では、母体由来の細胞が乳児の未熟な免疫システムを誤って自己免疫に誘導したり、エフェクターとして直接作用したりする可能性があります。グラフト対ホストのようなファッション。

妊娠中の免疫系の成熟のための腸間膜および門脈リンパ節の重要性が最近報告されています。 さらに、肝臓と門脈リンパ節の間の流れは双方向であることが実証されています。 In マウスでは、CD4+ および FoxP3+ 制御性 T 細胞の頻度が母親の免疫状態に関連していることがわかりました。 したがって、外科医が葛西の手術中に常に遭遇するBA乳児の顕著に腫れたリンパ節は、病態生理学的に重要なリンパ球輸送メカニズムをよりよく理解するための鍵を握っている可能性があるという仮説を立てました。

標準的な手術である葛西手術は、肝硬変が進行しているレースでは生後4か月まで意味があり、肝門部の主要な胆管の劣化した残りの部分（いわゆる「肺門板」）が切除されます。 、Roux yループが切除部位に縫合されます。 それは、残りの胆管から偶発的な胆汁の流れを排出するものとします。 技術的複雑性と侵襲性が中程度であるこの暫定的な外科的治療の長期的な成功率は、約 100% と推定されています。 15-20%。 残りの部分的な成功では、肝移植の必要性が延期される可能性があります。 組織学的に証明された胆道閉鎖症の7人の連続した患者で、門脈周囲リンパ節に母体の遺伝物質の証拠があるかどうかを調べました。

方法 :

BAの術前診断を受けた7人の連続した患者が研究に含まれました。 延長黄疸の他の原因 (α1 抗トリプシン欠乏症、アラジール症候群、PFIC など) は、肝内胆管の欠如を示した技術的に成功した ERCP (患者 5/7) の中で除外されていました。

親のインフォームド コンセントを得た後、母親と乳児から 2 ml の EDTA 全血を採取しました。 葛西の手術中に、1 つのポータルと 1 つの腸間膜リンパ節がサンプリングされました (ハノーバー医科大学倫理委員会投票 No.1650/11.12.2012. 双極切開後、腸間膜の隙間を 4-0 Vicryl 縫合糸で閉じました。

リンパ節を機械的に破壊し、ＤＮＡを酵素的に抽出し（ＱＩＡｍｐ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ、ヒルデン／ドイツ）、前述のように３０ｕｇ／ｍｌに正規化した。

短いタンデム リピート解析は、マーカー LIPOL、VWA、TH01、D19S253、CSF、PLA2A のマルチプレックス PCR で実現されました。 FGA、D21S11、D18S51 説明どおり。 簡単に言えば、GeneScan 3.11を備えたAbi Prism 310システムでフラグメント長分析を実施しました。 母親と乳児の血液とリンパ節 DNA を比較するためのソフトウェア。

遺伝的一塩基多型 (SNPs) は、定量的リアルタイム PCR キメラ分析によって追跡されました。 反応は、ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo Scientific) を使用して、iCycler iQ5 リアルタイム PCR プラットフォーム (Bio-Rad) で実行されました。 カスタム設計のプライマーとプローブは、Sigma-Aldrich から提供されました。 アルブミン遺伝子を増幅することにより、サンプルDNAの対照反応および標準化を行った。