Microchimérisme maternel dans les ganglions lymphatiques des nourrissons atteints d'atrésie biliaire au moment de l'opération de Kasai (K-LNMC)

Lors de l'opération de nourrissons atteints d'atrésie biliaire non syndromatique (BA, forme la plus courante), les chirurgiens notent presque invariablement la découverte importante de multiples ganglions lymphatiques enflés d'une taille pouvant atteindre 2 cm dans la porte hépatique et le mésentère de l'intestin grêle où ils peuvent constituer le raisin. comme des complexes. Les nourrissons du même âge laparotomisés pour une autre pathologie ne présentent généralement pas de tels ganglions.

L'atrésie biliaire est une maladie du nouveau-né qui est mortelle si elle n'est pas traitée. Histologiquement, il correspond à une dégénérescence des voies biliaires intra et extra hépatiques au sein d'un infiltrat inflammatoire en partie spécifique et d'une cirrhose évolutive.

L'étiologie de cette maladie rare mais constante (1:8-1:15.000) est inconnue. Actuellement, dans la recherche en étiologie du BA, deux principales pistes sont poursuivies :

1. Des processus (auto)immuns périnataux d'origine virale sont suspectés. Une forme expérimentale de BA peut être provoquée en infectant des mères murines avec des virus à ARNdb, par ex. Rhésus-rotavirus ou Reo-virus tandis que chez la souris, la vaccination des mères a empêché BA expérimental. L'importance de la voie γ/δ-T-cell et IL17/IL 23 , pour BA est actuellement sondée. Cependant, dans les groupes d'animaux syngéniques traités par le même lot de virus, la BA a tendance à être inconstante et se limite aux voies biliaires extrahépatiques, car la validité du modèle animal est un problème.
2. L'autre direction de la recherche ne repose pas principalement sur des expériences impliquant des animaux nouveau-nés : il y a des indications que pendant la grossesse, la barrière placentaire peut devenir perméable aux lymphocytes maternels (par exemple par un silence défectueux des chimiokines attirant les lymphocytes T dans les cellules déciduales du stroma) et déjà dans 2008 lymphocytes maternels ont été mis en évidence dans le foie de nourrissons BA. Par la suite, le phénomène de microchimérisme materno-fœtal est devenu l'objet de recherches en étiologie BA : dans le contexte de réactions immunitaires mixtes materno-fœtales, des cellules d'origine maternelle pourraient détourner le système immunitaire immature du nourrisson vers l'auto-immunité ou agir directement comme effecteurs dans une greffe contre l'hôte comme la mode.

L'importance des ganglions lymphatiques mésentériques et portes pour la maturation du système immunitaire pendant la grossesse a été rapportée récemment. De plus, il a été démontré que le flux entre le foie et les ganglions lymphatiques portes est bidirectionnel. Chez la souris In, la fréquence des lymphocytes T régulateurs CD4+ et FoxP3+ s'est avérée être liée au statut immunitaire de la mère. Nous avons donc émis l'hypothèse que les ganglions lymphatiques fortement gonflés des nourrissons BA que les chirurgiens rencontrent constamment au cours de l'opération de Kasai pourraient être la clé d'une meilleure compréhension des mécanismes pathophysiologiques importants du trafic lymphocytaire.

Dans l'opération standard, l'opération de Kasai qui, dans une race avec une cirrhose du foie croissante, a du sens jusqu'à l'âge de 4 mois, les restes dégradés des principales voies biliaires dans le hile du foie (la soi-disant "plaque hilaire") sont réséqués , Une boucle en Y de Roux est suturée sur le site de résection. Il doit drainer tout flux de bile éventuel des voies biliaires restantes. Le taux de réussite à long terme de cette tentative de traitement chirurgical qui est d'une complexité technique et d'un caractère invasif modérés est estimé à environ. 15-20 %. Dans le reste, un succès partiel peut retarder la nécessité d'une transplantation hépatique. Nous avons examiné chez sept patients consécutifs présentant une atrésie des voies biliaires prouvée histologiquement si, dans les ganglions lymphatiques périportaux, il y avait des preuves de matériel génétique maternel.

Méthodes :

7 patients consécutifs avec le diagnostic préopératoire de BA ont été inclus dans l'étude. Les autres causes d'ictère prolongé (déficit en α1 anti-trypsine, syndrome d'Alagilles, PFIC etc.) avaient été exclues parmi les méthodes techniques de CPRE réussies (5/7 patients) qui montraient l'absence de voies biliaires intrahépatiques.

Après avoir obtenu le consentement éclairé des parents, 2 ml de sang total EDTA ont été prélevés sur la mère et le nourrisson. Au cours de l'opération de Kasai, un portail et un ganglion lymphatique mésentérique ont été prélevés (vote du comité d'éthique de la faculté de médecine de Hanovre n° 1650/11.12.2012. Après dissection bipolaire, les espaces mésentériques ont été fermés avec des sutures Vicryl 4-0.

Les ganglions lymphatiques ont été rompus mécaniquement et l'ADN a été extrait par voie enzymatique (kit QIAmp, Qiagen, Hilden/Allemagne) comme décrit précédemment et normalisé à 30 ug/ml.

Une courte analyse répétée en tandem a été réalisée avec une PCR multiplex pour les marqueurs LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 comme décrit. En bref, l'analyse de la longueur des fragments a été effectuée sur un système Abi Prism 310 avec GeneScan 3.11. logiciel de comparaison du sang de la mère et du nourrisson avec l'ADN des ganglions lymphatiques.

Les polymorphismes génétiques d'un seul nucléotide (SNP) ont été tracés par des analyses quantitatives de chimérisme par PCR en temps réel. Les réactions ont été exécutées sur une plate-forme de PCR en temps réel iCycler iQ5 (Bio-Rad) en utilisant le ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo scientific). Des amorces et des sondes conçues sur mesure ont été fournies par Sigma-Aldrich. Les réactions de contrôle et la normalisation de l'échantillon d'ADN ont été réalisées en amplifiant le gène de l'albumine.