Материнский микрохимеризм в лимфатических узлах новорожденных с атрезией желчевыводящих путей во время операции Касаи (K-LNMC)

При операции у детей раннего возраста с несиндромальной атрезией желчевыводящих путей (БА, наиболее частая форма) хирурги почти всегда отмечают отчетливое обнаружение множественных увеличенных лимфатических узлов размером до 2 см в воротах печени и брыжейке тонкой кишки, где они могут представлять собой виноградные пузыри. как комплексы. У младенцев того же возраста, подвергшихся лапаротомии по поводу другой патологии, такие узлы обычно не обнаруживаются.

Билиарная атрезия — заболевание новорожденных, которое при отсутствии лечения приводит к летальному исходу. Гистологически это соответствует дегенерации внутри- и внепеченочных желчных протоков в пределах частично специфического воспалительного инфильтрата и прогрессирующего цирроза печени.

Этиология этого редкого, но постоянного заболевания (1:8-1:15.000) неизвестна. В настоящее время в исследованиях этиологии БА используются два основных направления:

1. Подозреваются вирусиндуцированные перинатальные (ауто)иммунные процессы. Экспериментальную форму БА можно спровоцировать путем инфицирования самок мышей дцРНК-вирусами, т.е. Резус-ротавирусы или Рео-вирусы в то время как у мышей вакцинация матерей предотвратила экспериментальную БА. В настоящее время исследуется важность путей γ/δ-T-клеток и IL17/IL 23 для БА. Однако в группах сингенных животных, получавших одну и ту же партию вирусов, БА имеет тенденцию быть непостоянной и ограничивается внепеченочными желчными протоками, поэтому валидность модели на животных является проблемой.
2. Другое направление исследований в первую очередь не опирается на эксперименты с участием новорожденных животных: есть признаки того, что во время беременности плацентарный барьер может стать проницаемым для материнских лимфоцитов (например, из-за неправильного молчания Т-клеток, привлекающих хемокины в клетках децидуальной стромы) и уже в 2008 материнских лимфоцитов были продемонстрированы в печени новорожденных с БА. Впоследствии феномен материнско-фетального микрохимеризма оказался в центре внимания исследований этиологии БА: в контексте смешанных материнско-фетальных иммунных реакций клетки материнского происхождения могли неправильно направлять незрелую иммунную систему младенца в аутоиммунный режим или действовать непосредственно как эффекторы в трансплантат против хозяина, как мода.

Недавно сообщалось о важности брыжеечных и портальных лимфатических узлов для созревания иммунной системы во время беременности. Кроме того, было продемонстрировано, что поток между печенью и портальными лимфатическими узлами является двунаправленным. Было обнаружено, что у мышей частота регуляторных Т-клеток CD4+ и FoxP3+ связана с иммунным статусом матери. Таким образом, мы предположили, что заметно увеличенные лимфатические узлы у детей с БА, с которыми хирурги постоянно сталкиваются во время операции Касаи, могут быть ключом к лучшему пониманию патофизиологически важных механизмов транспорта лимфоцитов.

При стандартной операции, операции Касаи, которая в гонке с нарастающим циррозом печени имеет смысл до 4-месячного возраста, резецируются деградировавшие остатки крупных желчных протоков в воротах печени (так называемая «прикорневая пластинка»). На место резекции накладывают Y-образную петлю Ру. Он должен дренировать любой условный поток желчи из оставшихся желчных протоков. Долгосрочный показатель успеха этого предварительного хирургического лечения, которое имеет умеренную техническую сложность и инвазивность, оценивается примерно в 15-20%. В остальных частичный успех может отсрочить необходимость трансплантации печени. Мы исследовали у семи последовательных пациентов с гистологически подтвержденной атрезией желчевыводящих путей, были ли в перипортальных лимфатических узлах признаки материнского генитального материала.

Методы:

В исследование были включены 7 последовательных пациентов с дооперационным диагнозом БА. Другие причины пролонгированной желтухи (дефицит α1-антитрипсина, синдром Алажиля, ПСВХ и др.) были исключены среди технически успешных методов ЭРХПГ (5/7 пациентов), которые показали отсутствие внутрипеченочных желчных протоков.

После получения информированного согласия родителей у матери и ребенка было взято 2 мл цельной крови с ЭДТА. Во время операции Касаи были взяты образцы одного портального и одного мезентериального лимфатического узла (голосование этического комитета Ганноверской медицинской школы № 1650 от 11.12.2012. После биполярной диссекции мезентериальные промежутки были закрыты швами Vicryl 4-0.

Лимфатические узлы разрушали механически и ДНК экстрагировали ферментативно (набор QIAmp, Qiagen, Hilden/Германия), как описано ранее, и нормализовали до 30 мкг/мл.

Анализ коротких тандемных повторов проводили с помощью мультиплексной ПЦР на маркеры LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51, как описано. Вкратце, анализ длины фрагмента выполняли с помощью системы Abi Prism 310 с GeneScan 3.11. программа для сравнения крови матери и ребенка с ДНК лимфатических узлов.

Генетические однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) отслеживали с помощью количественного анализа химеризма ПЦР в реальном времени. Реакции проводили на платформе ПЦР в реальном времени iCycler iQ5 (Bio-Rad) с использованием смеси ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo Scientific). Специально разработанные праймеры и зонды были предоставлены Sigma-Aldrich. Контрольные реакции и нормализацию ДНК образцов проводили путем амплификации гена альбумина.