Maternal mikrokimerism i lymfkörtlar hos spädbarn med gallatresi vid tidpunkten för Kasais operation (K-LNMC)

Vid operation av spädbarn med icke-syndromatisk biliär atresi (BA, vanligaste formen), noterar kirurger nästan undantagslöst det framträdande fyndet av flera svullna lymfkörtlar på upp till 2 cm i storlek i porta hepatis och tunntarmens mesenterium där de kan utgöra druva som komplex. Spädbarn i samma ålder som laparotomerats för annan patologi uppvisar vanligtvis inte sådana noder.

Biliär atresi är en sjukdom hos nyfödda som är dödlig när den inte behandlas. Histologiskt motsvarar det en degeneration av intra- och extra levergallgångar inom ett delvis specifikt inflammatoriskt infiltrat och progressiv cirros.

Etiologin för denna sällsynta men konstanta sjukdom (1:8-1:15 000) är okänd. För närvarande i BA etiologiforskning eftersträvas två huvudvägar:

1. Viralt inducerade perinatala (auto)immuna processer misstänks. En experimentell form av BA kan provoceras genom att infektera murina mödrar med dsRNA-virus, t.ex. Rhesus-rotavirus eller Reo-virus i möss har vaccination av mödrar förhindrat experimentell BA . Vikten av γ/δ-T-cell- och IL17/IL 23-vägen för BA undersöks för närvarande. I grupper av syngena djur som behandlats av samma parti virus tenderar dock BA att vara inkonstant och det är begränsat till extrahepatiska gallgångar, såsom om djurmodellens giltighet är ett problem.
2. Den andra forskningsriktningen förlitar sig inte i första hand på experiment som involverar nyfödda djur: Det finns indikationer på att placentabarriären under graviditeten kan bli permeabel för moderns lymfocyter (t.ex. genom en felaktig tystnad av T-cellsattraherande kemokiner i decidualstromaceller) och redan i 2008 moderns lymfocyter har påvisats i lever hos BA-barn. Därefter har fenomenet materno-foster mikrokimerism hamnat i fokus för BA etiologisk forskning: i samband med blandade materno-foster immunreaktioner kan celler av moderns ursprung missrikta det omogna immunsystemet hos spädbarnet till autoimmunitet eller fungera direkt som effektorer i en graft kontra värd som mode.

Betydelsen av mesenteriska och portala lymfkörtlar för mognad av immunsystemet under graviditet har rapporterats nyligen. Dessutom har det visats att flödet mellan levern och portallymfkörtlarna är dubbelriktat. Hos möss visade sig frekvensen av CD4+ och FoxP3+ reglerande T-celler vara kopplad till moderns immunstatus. Vi antog därför att de framträdande svullna lymfkörtlarna hos BA-spädbarn som kirurger ständigt stöter på under Kasais operation kan ha en nyckel till bättre förståelse av patofysiologiskt viktiga lymfocythandelsmekanismer.

I standardoperationen, Kasai-operationen som i ett lopp med ökande levercirrhos är meningsfull upp till en ålder av 4 månader, avlägsnas de nedbrutna resterna av de stora gallgångarna i leverhilus (den så kallade "hilarplattan"). , En Roux y-loop sys på resektionsstället. Den ska dränera eventuellt betingat gallflöde från kvarvarande gallgångar. Den långsiktiga framgångsfrekvensen för detta trevande kirurgiska botemedel som är av måttlig teknisk komplexitet och invasivitet uppskattas till ca. 15-20%. I de återstående kan en delvis framgång skjuta upp nödvändigheten av levertransplantation. Vi undersökte hos sju på varandra följande patienter med histologiskt bevisad biliär atresi om det i periportala lymfkörtlar fanns bevis för moderns genetiskt material.

Metoder:

7 på varandra följande patienter med den preoperativa diagnosen BA inkluderades i studien. Andra orsaker till icterus prolongatus (α1 antitrypsinbrist, Alagilles syndrom, PFIC etc.) hade uteslutits bland metoderna tekniskt framgångsrik ERCP (5/7 patienter) som visade frånvaro av intrahepatiska gallgångar.

Efter att ha erhållit förälderns informerade samtycke samlades 2 ml EDTA-helblod från mor och spädbarn. Under Kasais operation togs prov från en portal och en mesenterial lymfnod (Hannover Medical Schools etiska kommitté omröstning nr 1650/11.12.2012. Efter bipolär dissektion stängdes de mesenteriska luckorna med 4-0 Vicryl-suturer.

Lymfkörtlar bröts mekaniskt och DNA extraherades enzymatiskt (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Tyskland) som beskrivits tidigare och normaliserades till 30 ug/ml.

Kort tandemupprepningsanalys realiserades med multiplex PCR för markörerna LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 såsom beskrivits. I korthet utfördes fragmentlängdsanalys ett Abi Prism 310-system med GeneScan 3.11. programvara för jämförelse av mors och spädbarns blod med lymfkörtel-DNA.

Genetiska enkelnukleotidpolymorfier (SNP) spårades genom kvantitativa realtids-PCR-chimerismanalyser. Reaktioner utfördes på en iCycler iQ5 realtids-PCR-plattform (Bio-Rad) med hjälp av ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo scientific). Specialdesignade primers och prober tillhandahölls av Sigma-Aldrich. Kontrollreaktioner och normalisering av prov-DNA utfördes genom amplifiering av albumingenen.