Maternale microchimerie in lymfeklieren van baby's met galgangatresie ten tijde van Kasai's operatie (K-LNMC)

Bij operaties van zuigelingen met niet-syndromatische galgangatresie (BA, meest voorkomende vorm), constateren chirurgen bijna altijd de prominente vondst van meerdere gezwollen lymfeklieren van maximaal 2 cm groot in de porta hepatis en het mesenterium van de dunne darm, waar ze druif kunnen vormen. zoals complexen. Baby's van dezelfde leeftijd die laparotomie hebben ondergaan voor andere pathologie, vertonen gewoonlijk dergelijke knooppunten niet.

Biliaire atresie is een ziekte van de pasgeborene die dodelijk is als ze niet wordt behandeld. Histologisch komt het overeen met een degeneratie van intra- en extrahepatische galwegen binnen een deels specifiek ontstekingsinfiltraat en progressieve cirrose.

De etiologie van deze zeldzame maar constante ziekte (1:8-1:15.000) is onbekend. Momenteel worden in het BA-etiologieonderzoek twee hoofdrichtingen nagestreefd:

1. Viraal geïnduceerde perinatale (auto)immuunprocessen worden vermoed. Een experimentele vorm van BA kan worden uitgelokt door muriene moeders te infecteren met dsRNA-virussen, b.v. Rhesus-rotavirussen of Reo-virussen terwijl bij muizen vaccinatie van moeders experimentele BA heeft voorkomen. Het belang van de γ / δ-T-cel en IL17 / IL 23-route voor BA wordt momenteel onderzocht. In groepen van syngene dieren die door dezelfde partij virussen worden behandeld, heeft BA echter de neiging om wisselvallig te zijn en is het beperkt tot extrahepatische galwegen, zodat de validiteit van het diermodel een probleem is.
2. De andere onderzoeksrichting steunt niet primair op experimenten met pasgeboren dieren: er zijn aanwijzingen dat tijdens de zwangerschap de placentabarrière doorlaatbaar kan worden voor maternale lymfocyten (bijvoorbeeld door een foutieve uitschakeling van T-cel-aantrekkende chemokinen in deciduale stromacellen) en reeds in 2008 Maternale lymfocyten zijn aangetoond in levers van BA-baby's. Vervolgens is het fenomeen van materno-foetaal microchimerisme onder de aandacht gekomen van BA-etiologieonderzoek: in de context van gemengde materno-foetale immuunreacties zouden cellen van maternale oorsprong het onvolgroeide immuunsysteem van het kind kunnen misleiden tot auto-immuniteit of direct als effectoren kunnen optreden in een graft vs. host-achtige mode.

Het belang van de mesenteriale en portale lymfeklieren voor de rijping van het immuunsysteem tijdens de zwangerschap is onlangs gemeld. Bovendien is aangetoond dat de stroming tussen de lever en de portale lymfeklieren bidirectioneel is. Bij muizen bleek de frequentie van CD4+ en FoxP3+ regulerende T-cellen verband te houden met de immuunstatus van de moeder. Onze hypothese was dus dat de opvallend gezwollen lymfeklieren van BA-baby's die chirurgen constant tegenkomen tijdens de operatie van Kasai, een sleutel kunnen zijn tot een beter begrip van pathofysiologisch belangrijke mechanismen voor de handel in lymfocyten.

Bij de standaardoperatie, de Kasai-operatie die bij een ras met toenemende levercirrose zinvol is tot een leeftijd van 4 maanden, worden de aangetaste resten van de grote galwegen in de leverhilus (de zogenaamde "hilaire plaat") weggesneden , Een Roux-y-lus wordt op de resectieplaats gehecht. Het zal elke eventuele galstroom uit de resterende galkanalen afvoeren. Het slagingspercentage op lange termijn van deze voorlopige chirurgische genezing, die van matige technische complexiteit en invasiviteit is, wordt geschat op ca. 15-20%. Bij de overige kan een gedeeltelijk succes de noodzaak van levertransplantatie uitstellen. We onderzochten bij zeven opeenvolgende patiënten met histologisch bewezen galgangatresie of er in de periportale lymfeklieren aanwijzingen waren voor erfelijk materiaal van de moeder.

Methoden:

7 opeenvolgende patiënten met de preoperatieve diagnose BA werden in de studie opgenomen. Andere oorzaken van icterus prolongatus (α1-antitrypsinedeficiëntie, Alagilles-syndroom, PFIC enz.) waren uitgesloten van de technisch succesvolle ERCP-methoden (5/7 patiënten) die afwezigheid van intrahepatische galwegen vertoonden.

Na het verkrijgen van de geïnformeerde toestemming van de ouder werd 2 ml EDTA volbloed afgenomen bij moeder en kind. Tijdens de operatie van Kasai werden monsters genomen van één portaal en één mesenteriale lymfeklier (stemming van de ethische commissie van de Hannover Medical School nr. 1650/11.12.2012). Na bipolaire dissectie werden de mesenteriale openingen gesloten met 4-0 Vicryl-hechtingen.

Lymfeklieren werden mechanisch opengebroken en DNA werd enzymatisch geëxtraheerd (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Duitsland) zoals eerder beschreven en genormaliseerd tot 30 µg/ml.

Short tandem repeat analyse werd gerealiseerd met multiplex PCR voor markers LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 zoals beschreven. In het kort werd fragmentlengte-analyse uitgevoerd met een Abi Prism 310-systeem met GeneScan 3.11. software voor vergelijking van het bloed van moeder en kind met DNA van de lymfeklieren.

Genetische enkelvoudige nucleotide polymorfismen (SNP's) werden getraceerd door kwantitatieve real-time PCR-chimerisme-analyses. Reacties werden uitgevoerd op een iCycler iQ5 real-time PCR-platform (Bio-Rad) met behulp van de ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo Scientific). Op maat ontworpen primers en probes werden geleverd door Sigma-Aldrich. Controlereacties en normalisatie van monster-DNA werden uitgevoerd door het albumine-gen te amplificeren.