Maternal mikrokimerisme i lymfeknuter hos spedbarn med biliær atresi på tidspunktet for Kasais operasjon (K-LNMC)

Ved operasjon av spedbarn med ikke-syndromatisk biliær atresi (BA, vanligste form), legger kirurger seg nesten alltid merke til det fremtredende funnet av flere hovne lymfeknuter på opptil 2 cm store i porta hepatis og tynntarmens mesenterium der de kan utgjøre en drue som komplekser. Spedbarn av samme alder laparotomisert for annen patologi har vanligvis ikke slike noder.

Biliær atresi er en sykdom hos nyfødte som er dødelig når den ikke behandles. Histologisk tilsvarer det en degenerasjon av intra- og ekstra hepatiske galleveier innenfor et delvis spesifikt inflammatorisk infiltrat og progressiv skrumplever.

Etiologien til denne sjeldne, men konstante sykdommen (1:8-1:15.000) er ukjent. For tiden i BA etiologiforskning forfølges to hovedveier:

1. Viralt induserte perinatale (auto)immune prosesser er mistenkt. En eksperimentell form for BA kan provoseres ved å infisere murine mødre med dsRNA-virus, f.eks. Rhesus-rotavirus eller Reo-virus i mus har vaksinasjon av mødre forhindret eksperimentell BA . Betydningen av γ/δ-T-celle- og IL17/IL 23-veien for BA er for tiden undersøkt. Men i grupper av syngene dyr behandlet av samme gruppe virus har BA en tendens til å være inkonstant, og det er begrenset til ekstrahepatiske galleganger, for eksempel om gyldigheten av dyremodellen er et problem.
2. Den andre forskningsretningen er ikke først og fremst avhengig av eksperimenter som involverer nyfødte dyr: Det er indikasjoner på at placentabarrieren under graviditet kan bli permeabel for maternelle lymfocytter (f.eks. ved en feil demping av T-celletiltrekkende kjemokiner i decidualstromaceller) og allerede i 2008 maternelle lymfocytter er påvist i leveren til BA-spedbarn. Senere har fenomenet materno-føtal mikrokimerisme kommet i fokus for BA etiologisk forskning: i sammenheng med blandede mor-føtale immunreaksjoner kan celler av mors opprinnelse feildirigere det umodne immunsystemet til spedbarnet til autoimmunitet eller fungere direkte som effektorer i en graft vs. vert som mote.

Betydningen av mesenteriske og portallymfeknuter for modning av immunsystemet under graviditet har nylig blitt rapportert. Dessuten har det blitt påvist at flyten mellom leveren og portallymfeknutene er toveis. Hos mus ble frekvensen av CD4+ og FoxP3+ regulatoriske T-celler funnet å være knyttet til morens immunstatus. Vi antok derfor at de fremtredende hovne lymfeknutene til BA-spedbarn som kirurger stadig møter under Kasais operasjon kan ha en nøkkel til bedre forståelse av patofysiologiske viktige lymfocytthandelsmekanismer.

I standardoperasjonen, Kasai-operasjonen som i et løp med økende levercirrhose gir mening opp til 4 måneders alder, blir de nedbrytede restene av de store gallegangene i leverhilus (den såkalte "hilarplaten") resekert , En Roux y-løkke sutureres på reseksjonsstedet. Den skal drenere eventuell betinget gallestrøm fra gjenværende galleganger. Den langsiktige suksessraten for denne tentative av kirurgisk kur, som er av moderat teknisk kompleksitet og invasivitet, er estimert til ca. 15-20 %. I de resterende kan en delvis suksess utsette nødvendigheten av levertransplantasjon. Vi undersøkte hos syv påfølgende pasienter med histologisk påvist biliær atresi om det i periportale lymfeknuter var bevis for mors genetiske materiale.

Metoder:

7 påfølgende pasienter med preoperativ diagnose BA ble inkludert i studien. Andre årsaker til icterus prolongatus (α1 anti-trypsin-mangel, Alagilles syndrom, PFIC etc.) ble ekskludert blant metodene teknisk vellykket ERCP (5/7 pasienter) som viste fravær av intrahepatiske galleganger.

Etter å ha innhentet foreldrenes informerte samtykke ble 2 ml EDTA fullblod samlet inn fra mor og spedbarn. Under Kasais operasjon ble det tatt prøver av én portal og én mesenterial lymfeknute (stemme nr. 1650/11.12.2012 i Hannover Medical Schools etiske komité. Etter bipolar disseksjon ble de mesenteriske gapene lukket med 4-0 Vicryl-suturer.

Lymfeknuter ble forstyrret mekanisk og DNA ble ekstrahert enzymatisk (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Tyskland) som beskrevet tidligere og normalisert til 30 ug/ml.

Kort tandem repetisjonsanalyse ble realisert med multipleks PCR for markører LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 som beskrevet. Kort fortalt ble fragmentlengdeanalyse utført et Abi Prism 310 System med GeneScan 3.11. programvare for sammenligning av mors og spedbarns blod med lymfeknute-DNA.

Genetiske enkeltnukleotidpolymorfismer (SNP-er) ble sporet ved kvantitative sanntids PCR-kimerismeanalyser. Reaksjoner ble utført på en iCycler iQ5 sanntids PCR-plattform (Bio-Rad) ved bruk av ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo scientific). Spesialdesignede primere og prober ble levert av Sigma-Aldrich. Kontrollreaksjoner og normalisering av prøve-DNA ble utført ved å amplifisere albumingenet.