Mütterlicher Mikrochimärismus in Lymphknoten von Säuglingen mit Gallengangsatresie zum Zeitpunkt der Operation von Kasai (K-LNMC)

Bei der Operation von Säuglingen mit nicht-syndromatischer Gallengangsatresie (BA, häufigste Form) bemerken Chirurgen fast immer den auffälligen Befund mehrerer geschwollener Lymphknoten von bis zu 2 cm Größe in der Leberpforte und im Dünndarmgekröse, wo sie eine Traube darstellen können wie Komplexe. Gleichaltrige Säuglinge, die wegen anderer Pathologien laparotomiert wurden, weisen üblicherweise keine solchen Knoten auf.

Die Gallengangsatresie ist eine Erkrankung des Neugeborenen, die unbehandelt tödlich verläuft. Histologisch entspricht es einer Degeneration der intra- und extrahepatischen Gallengänge innerhalb eines zum Teil spezifischen entzündlichen Infiltrats und einer progredienten Zirrhose.

Die Ätiologie dieser seltenen, aber konstanten Erkrankung (1:8-1:15.000) ist unbekannt. Derzeit werden in der BA-Ätiologieforschung zwei Hauptrichtungen verfolgt:

1. Viral induzierte perinatale (Auto-)Immunprozesse werden vermutet. Eine experimentelle Form von BA kann durch Infektion von Mäusemüttern mit dsRNA-Viren, z. Rhesus-Rotaviren oder Reo-Viren, während bei Mäusen die Impfung von Müttern experimentelle BA verhindert hat. Die Bedeutung des γ/δ-T-Zell- und IL17/IL23-Signalwegs für BA wird derzeit untersucht. In Gruppen von syngenen Tieren, die mit der gleichen Viruscharge behandelt wurden, neigt BA jedoch dazu, inkonstant zu sein, und es ist auf extrahepatische Gallenwege beschränkt, so dass die Gültigkeit des Tiermodells ein Problem darstellt.
2. Die andere Forschungsrichtung setzt nicht primär auf Experimente mit neugeborenen Tieren: Es gibt Hinweise darauf, dass die Plazentaschranke während der Schwangerschaft für mütterliche Lymphozyten durchlässig werden kann (z 2008 wurden mütterliche Lymphozyten in der Leber von BA-Säuglingen nachgewiesen. In der Folge ist das Phänomen des materno-fetalen Mikrochimärismus in den Fokus der ethologischen Forschung der BA gerückt: Im Zusammenhang mit gemischten materno-fetalen Immunreaktionen könnten Zellen mütterlichen Ursprungs das unreife Immunsystem des Säuglings in eine Autoimmunität umleiten oder direkt als Effektoren wirken eine Transplantat-gegen-Wirt-ähnliche Mode.

Kürzlich wurde über die Bedeutung der mesenterialen und portalen Lymphknoten für die Reifung des Immunsystems während der Schwangerschaft berichtet. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass der Fluss zwischen Leber und Pfortaderlymphknoten bidirektional ist. Bei Mäusen wurde festgestellt, dass die Häufigkeit von CD4+- und FoxP3+-regulatorischen T-Zellen mit dem Immunstatus der Mutter zusammenhängt. Wir stellten daher die Hypothese auf, dass die auffällig geschwollenen Lymphknoten von BA-Säuglingen, auf die Chirurgen während Kasais Operation ständig stoßen, einen Schlüssel zum besseren Verständnis der pathophysiologisch wichtigen Mechanismen des Lymphozytentransports darstellen könnten.

Bei der Standardoperation, der Kasai-Operation, die bei einem Rennen mit zunehmender Leberzirrhose bis zu einem Alter von 4 Monaten sinnvoll ist, werden die degradierten Reste der großen Gallengänge im Leberhilus (die sogenannte „Hilarplatte“) reseziert , An der Resektionsstelle wird eine Roux-Y-Schleife angenäht. Es soll eventuellen Gallenfluss aus verbleibenden Gallengängen ableiten. Die langfristige Erfolgsrate dieses vorläufigen chirurgischen Heilverfahrens, das von moderater technischer Komplexität und Invasivität ist, wird auf ca. 15-20%. Im übrigen kann ein teilweiser Erfolg die Notwendigkeit einer Lebertransplantation hinausschieben. Wir untersuchten bei sieben konsekutiven Patienten mit histologisch nachgewiesener Gallengangsatresie, ob in periportalen Lymphknoten Hinweise auf mütterliches Genmaterial vorlagen.

Methoden :

7 konsekutive Patienten mit der präoperativen Diagnose BA wurden in die Studie eingeschlossen. Andere Ursachen des Ikterus prolongatus (α1-Anti-Trypsin-Mangel, Alagille-Syndrom, PFIC etc.) wurden bei der methodentechnisch erfolgreichen ERCP (5/7 Patienten) ausgeschlossen, die das Fehlen intrahepatischer Gallenwege zeigte.

Nach Einholung der Einverständniserklärung der Eltern wurden Mutter und Kind 2 ml EDTA-Vollblut entnommen. Während der Operation von Kasai wurden ein Portal und ein mesenterialer Lymphknoten entnommen (Ethikkommission der Medizinischen Hochschule Hannover, Votum Nr. 1650/11.12.2012). Nach bipolarer Dissektion wurden die Mesenteriallücken mit 4-0 Vicryl-Nähten verschlossen.

Lymphknoten wurden mechanisch aufgebrochen und DNA wurde enzymatisch (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Deutschland) wie zuvor beschrieben extrahiert und auf 30 &mgr;g/ml normalisiert.

Die Short-Tandem-Repeat-Analyse wurde mit Multiplex-PCR für die Marker LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A durchgeführt. FGA, D21S11, D18S51 wie beschrieben. Kurz gesagt wurde die Fragmentlängenanalyse auf einem Abi Prism 310-System mit GeneScan 3.11 durchgeführt. Software zum Vergleich von Blut von Mutter und Kind mit Lymphknoten-DNA.

Genetische Einzelnukleotidpolymorphismen (SNPs) wurden durch quantitative Echtzeit-PCR-Chimärismusanalysen verfolgt. Die Reaktionen wurden auf einer iCycler iQ5-Echtzeit-PCR-Plattform (Bio-Rad) unter Verwendung des ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo Scientific) durchgeführt. Maßgeschneiderte Primer und Sonden wurden von Sigma-Aldrich bereitgestellt. Kontrollreaktionen und Normalisierung der Proben-DNA wurden durch Amplifikation des Albumin-Gens durchgeführt.