Microquimerismo materno en ganglios linfáticos de bebés con atresia biliar en el momento de la operación de Kasai (K-LNMC)

Al operar a bebés con atresia biliar no sindromática (BA, forma más común), los cirujanos notan casi invariablemente el hallazgo prominente de múltiples ganglios linfáticos inflamados de hasta 2 cm de tamaño en la porta hepática y el mesenterio del intestino delgado donde pueden constituir uva. como complejos. Los lactantes de la misma edad laparotomizados por otra patología comúnmente no presentan tales ganglios.

La atresia biliar es una enfermedad del recién nacido que es mortal si no se trata. Histológicamente corresponde a una degeneración de las vías biliares intra y extrahepáticas dentro de un infiltrado inflamatorio en parte específico y cirrosis progresiva.

Se desconoce la etiología de esta rara pero constante enfermedad (1:8-1:15.000). Actualmente, en la investigación etiológica de BA se persiguen dos vías principales:

1. Se sospechan procesos perinatales (auto)inmunes inducidos por virus. Se puede provocar una forma experimental de BA infectando madres murinas con virus dsRNA, p. Rhesus-rotavirus o Reo-virus mientras que en ratones, la vacunación de las madres ha impedido la BA experimental. La importancia de la vía de las células γ/δ-T y de IL17/IL 23 para BA está actualmente investigada. Sin embargo, en grupos de animales singénicos tratados con el mismo lote de virus, BA tiende a ser inconstante y se limita a los conductos biliares extrahepáticos, por lo que la validez del modelo animal es un problema.
2. La otra dirección de la investigación no se basa principalmente en experimentos con animales recién nacidos: hay indicios de que durante el embarazo la barrera placentaria puede volverse permeable para los linfocitos maternos (p. Se han demostrado linfocitos maternos de 2008 en hígados de bebés BA. Posteriormente, el fenómeno del microquimerismo materno-fetal se convirtió en el centro de atención de la investigación etiológica de BA: en el contexto de reacciones inmunitarias mixtas materno-fetales, las células de origen materno podrían desviar el sistema inmunitario inmaduro del bebé hacia la autoinmunidad o actuar directamente como efectores en una moda de injerto contra huésped.

Recientemente se ha informado sobre la importancia de los ganglios linfáticos mesentéricos y portales para la maduración del sistema inmunitario durante el embarazo. Además se ha demostrado que el flujo entre el hígado y los ganglios portales es bidireccional. En ratones, se encontró que la frecuencia de células T reguladoras CD4+ y FoxP3+ estaba relacionada con el estado inmunitario de la madre. Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que los ganglios linfáticos prominentemente inflamados de los bebés BA que los cirujanos encuentran constantemente durante la operación de Kasai pueden ser una clave para una mejor comprensión de los importantes mecanismos fisiopatológicos del tráfico de linfocitos.

En la operación estándar, la operación de Kasai, que en una carrera con cirrosis hepática progresiva tiene sentido hasta los 4 meses de edad, se resecan los restos degradados de los principales conductos biliares en el hilio hepático (la llamada "placa hiliar"). , Se sutura un asa en Y de Roux en el sitio de la resección. Drenará cualquier flujo de bilis contingente de los conductos biliares restantes. La tasa de éxito a largo plazo de esta tentativa de cura quirúrgica que es de moderada complejidad técnica e invasividad se estima en aprox. 15-20%. En el resto, un éxito parcial puede posponer la necesidad de un trasplante de hígado. Examinamos en siete pacientes consecutivos con atresia biliar comprobada histológicamente si en los ganglios linfáticos periportales había evidencia de material genético materno.

Métodos :

Se incluyeron en el estudio 7 pacientes consecutivos con diagnóstico preoperatorio de AB. Otras causas de ictericia prolongada (deficiencia de antitripsina α1, síndrome de Alagilles, PFIC, etc.) se habían excluido entre los métodos de CPRE técnicamente exitosa (5/7 pacientes) que mostraban ausencia de vías biliares intrahepáticas.

Después de obtener el consentimiento informado de los padres, se recogieron 2 ml de sangre entera con EDTA de la madre y el niño. Durante la operación de Kasai, se tomaron muestras de un portal y un ganglio linfático mesentérico (voto del comité de ética de la Escuela de Medicina de Hannover No. 1650/11.12.2012. Después de la disección bipolar, los espacios mesentéricos se cerraron con suturas de Vicryl 4-0.

Los ganglios linfáticos se rompieron mecánicamente y el ADN se extrajo enzimáticamente (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Alemania) como se describió anteriormente y se normalizó a 30 ug/ml.

Se realizó un análisis repetido en tándem corto con PCR multiplex para los marcadores LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 como se describe. Brevemente, el análisis de longitud de fragmentos se realizó en un sistema Abi Prism 310 con GeneScan 3.11. software para la comparación de la sangre de la madre y del bebé con el ADN de los ganglios linfáticos.

Los polimorfismos genéticos de un solo nucleótido (SNP) se rastrearon mediante análisis cuantitativos de quimerismo de PCR en tiempo real. Las reacciones se ejecutaron en una plataforma de PCR en tiempo real iCycler iQ5 (Bio-Rad) utilizando ABsolute QPCR Rox Mix (Thermo Scientific). Sigma-Aldrich proporcionó cebadores y sondas diseñados a medida. Las reacciones de control y la normalización del ADN de la muestra se realizaron amplificando el gen de la albúmina.