Äidin mikrokimerismi vauvojen imusolmukkeissa, joilla on sapen atresia Kasain leikkauksen aikana (K-LNMC)

Leikkattaessa pikkulapsia, joilla on ei-syndromaattinen sappitiehyetresia (BA, yleisin muoto), kirurgit havaitsevat lähes poikkeuksetta huomattavan havainnon useista jopa 2 cm:n kokoisista turvonneista imusolmukkeista porta hepatiksessa ja ohutsuolen suoliliepeessä, jossa ne voivat muodostaa rypäleen. kuin komplekseja. Samanikäisillä vauvoilla, jotka on laparotomioitu muun patologian vuoksi, ei yleensä ole tällaisia ​​solmuja.

Biliaarinen atresia on vastasyntyneen sairaus, joka on tappava, jos sitä ei hoideta. Histologisesti se vastaa maksan sisäisten ja ulkopuolisten sappitiehyiden rappeutumista osittain spesifisessä tulehduksellisessa infiltraatissa ja etenevässä kirroosissa.

Tämän harvinaisen mutta jatkuvan sairauden (1:8-1:15.000) etiologiaa ei tunneta. Tällä hetkellä BA-etiologian tutkimuksessa haetaan kahta pääsuuntaa:

1. Viruksen aiheuttamia perinataalisia (auto)immuuniprosesseja epäillään. BA:n kokeellinen muoto voidaan provosoida infektoimalla hiiren äitejä dsRNA-viruksilla esim. Rhesus-rotavirukset tai Reo-virukset, kun taas hiirillä emojen rokottaminen on estänyt kokeellisen BA:n. γ/δ-T-solu- ja IL17/IL23-reitin merkitystä BA:lle tutkitaan tällä hetkellä. Kuitenkin syngeenisten eläinten ryhmissä, joita on hoidettu samalla viruserällä, BA:lla on taipumus olla epävakaa ja se rajoittuu maksan ulkopuolisiin sappitiehyisiin, esimerkiksi eläinmallin pätevyys on ongelma.
2. Toinen tutkimussuunta ei ensisijaisesti nojaa vastasyntyneillä eläimillä tehtyihin kokeisiin: On viitteitä siitä, että raskauden aikana istukan este voi muuttua läpäiseväksi äidin lymfosyyteille (esim. T-soluja houkuttelevien kemokiinien virheellinen vaimentaminen desiduaalisissa stroomasoluissa) ja jo 2008 äidin lymfosyyttejä on osoitettu BA-lasten maksassa. Myöhemmin äidin ja sikiön mikrokimerismi on noussut BA:n etiologian tutkimuksen keskipisteeseen: äidin ja sikiön seka-immuunireaktioiden yhteydessä äidin ja sikiön immuunireaktioiden yhteydessä äidin ja sikiön solut voivat ohjata lapsen epäkypsää immuunijärjestelmää väärin autoimmuniteettiin tai toimia suoraan vaikuttajina graft vs. isäntä kuin muoti.

Äskettäin on raportoitu suoliliepeen ja portaaliimusolmukkeiden merkityksestä immuunijärjestelmän kypsymiselle raskauden aikana. Lisäksi on osoitettu, että maksan ja portaaliimusolmukkeiden välinen virtaus on kaksisuuntaista. Hiirillä CD4+- ja FoxP3+-säätely-T-solujen esiintyvyyden havaittiin liittyvän emon immuunitilaan. Näin ollen oletimme, että BA-vauvojen näkyvästi turvonneet imusolmukkeet, joita kirurgit kohtaavat jatkuvasti Kasain leikkauksen aikana, voivat olla avain patofysiologisesti tärkeiden lymfosyyttikaupan mekanismien ymmärtämiseen.

Normaalissa leikkauksessa, Kasai-leikkauksessa, joka rodussa, jossa maksakirroosi on lisääntymässä, on järkevää 4 kuukauden ikään asti, maksan hiluksen tärkeimpien sappitiehyiden (ns. "hilar-levy") hajoaneet paikat leikataan. , Roux y -silmukka ommellaan resektiokohtaan. Sen tulee tyhjentää mahdollinen sappivirta jäljellä olevista sappikanavista. Tämän teknisesti kohtalaisen monimutkaisen ja invasiivisen kirurgisen parannuskeinon pitkän aikavälin onnistumisasteen arvioidaan olevan noin. 15-20 %. Muussa tapauksessa osittainen onnistuminen voi lykätä maksansiirron tarvetta. Tutkimme seitsemällä peräkkäisellä potilaalla, joilla oli histologisesti todettu sapen atresia, oliko periportaalisissa imusolmukkeissa todisteita äidin geenimateriaalista.

Menetelmät:

Tutkimukseen osallistui 7 peräkkäistä potilasta, joilla oli ennen leikkausta BA-diagnoosi. Muut icterus prolongatuksen syyt (α1-antitrypsiinin puutos, Alagillesin oireyhtymä, PFIC jne.) oli jätetty pois teknisesti onnistuneista ERCP-menetelmistä (5/7 potilasta), jotka osoittivat intrahepaattisten sappiteiden puuttumisen.

Vanhemman tietoisen suostumuksen saamisen jälkeen 2 ml EDTA-kokoverta kerättiin äidiltä ja lapselta. Kasain leikkauksen aikana otettiin näytteitä yhdestä portaalista ja yhdestä suoliliepeen imusolmukkeesta (Hannover Medical Schoolin eettisen komitean äänestys nro 1650/11.12.2012. Bipolaarisen dissektion jälkeen suoliliepeen aukot suljettiin 4-0 Vicryl-ompeleilla.

Imusolmukkeet hajotettiin mekaanisesti ja DNA uutettiin entsymaattisesti (QIAmp Kit, Qiagen, Hilden/Saksa) edellä kuvatulla tavalla ja normalisoitiin pitoisuuteen 30 ug/ml.

Lyhyt tandem-toistoanalyysi toteutettiin moninkertaisella PCR:llä markkereille LIPOL, VWA, TH01, D19S253, CSF, PLA2A. FGA, D21S11, D18S51 kuvatulla tavalla. Lyhyesti sanottuna fragmentin pituusanalyysi suoritettiin Abi Prism 310 System -järjestelmällä, jossa oli GeneScan 3.11. ohjelmisto äidin ja vauvan veren vertaamiseen imusolmukkeiden DNA:han.

Geneettiset yhden nukleotidin polymorfismit (SNP:t) jäljitettiin kvantitatiivisilla reaaliaikaisilla PCR-kimeerismianalyyseillä. Reaktiot suoritettiin iCycler iQ5 reaaliaikaisella PCR-alustalla (Bio-Rad) käyttämällä ABsolute QPCR Rox Mixiä (Thermo science). Räätälöidyt alukkeet ja koettimet toimitti Sigma-Aldrich. Kontrollireaktiot ja näyte-DNA:n normalisointi suoritettiin monistamalla albumiinigeeniä.