ミニ腸モデルにおけるノロウイルス感染の宿主因子の同定
幹細胞由来ヒト腸腸モデルにおけるノロウイルス感染に関連する宿主因子のゲノムワイドなCRISPRスクリーニング
この研究の主な目的は、ノロウイルス感染を仲介する宿主細胞タンパク質のリストを確立することです。
ノロウイルスは、安全でない食品からの下痢性疾患に起因する最も一般的な病原体の 1 つです。 また、食品媒介感染症による幼児や成人の死亡の主な原因でもあります。 ノロウイルスは食中毒だけではありません。 最近のメタ分析では、ノロウイルスは、散発性および発生状況の両方で、（人から人への感染を含む）急性胃腸炎のすべての原因のほぼ 5 分の 1 を占め、すべての年齢層に影響を及ぼします。 間違いなく、ノロウイルスは先進国と発展途上国の両方で最大の公衆衛生上の懸念事項です. 標的を絞った介入には、ノロウイルスの病理生物学をよりよく理解するための研究努力が必要です。
中東呼吸器症候群コロナウイルスからジカウイルスまで、ウイルス感染の媒介に重要な宿主因子を特定する取り組みは、常に研究の優先事項でした。 このような情報は、抗ウイルス介入における潜在的な治療標的に光を当てるでしょう。 ノロウイルスのウイルスと宿主の相互作用に関する研究は、過去 20 年間に堅牢な細胞培養モデルがなかったため、妨げられてきました。 2016年、ノロウイルスは、エンテロイドまたはミニガットと呼ばれる幹細胞由来の三次元ヒト腸様構造でついに培養に成功しました。
この研究では、参加者から採取された十二指腸生検から腸幹細胞が分離され、続いてミニガットに分化します。 宿主の必須因子および制限因子のゲノムワイドな遺伝子スクリーニングは、それぞれノックアウト CRISPR および機能獲得型 CRISPR SAM によって、感染したミニガットに対して実行されます。 最終選考に残った候補は、細胞株で予備的な機能検証を受けます。 これらのデータは、ノロウイルス感染に対する潜在的な治療標的への洞察を提供します。
調査の概要
詳細な説明
研究のデザインと概要 - これは実験室ベースの研究です。 研究者らは、ノロウイルス感染を制御する宿主細胞タンパク質のリストを作成する予定です。 方法には、感染モデルとしての患者固有の幹細胞由来のヒト腸腸様体の確立、および2つのノロウイルス遺伝子型の感染時のゲノムワイドなCRISPRおよびCRISPR SAM遺伝子スクリーニングが含まれます。
***ヒト腸内エンテロイドモデルの確立***
- 十二指腸生検および唾液採取 - IRB 承認のインフォームド コンセントを得た後、2 つの十二指腸生検サンプルは、抗凝固療法の参加者や出血素因の他の原因を持つ参加者など、生検サンプリングの禁忌なしで、上部消化管内視鏡検査を受ける各参加者から取得されます。 生検サンプルを氷冷した 1xPBS に浸し、30 分以内にすぐに検査室に移送してさらに処理します。 さらに、各参加者から唾液 (1-2 mL) を採取して、ELISA による分泌状態の検査を行います。
- 陰窩幹細胞の分離と分化 - 到着すると、生検サンプルはまず小さな断片に切り刻まれます。 腸陰窩細胞は、1x 完全キレート溶液 (1xCCS) と EDTA バッファーで洗浄とインキュベーションを繰り返すことによって分離されます。 次に、陰窩細胞を含む上清を、増殖因子（CMGF+）を含む完全培地を含むマトリゲルで増殖させます（Wnt 3およびRspo-1馴化培地、ノギン、A83、B27、EGF、N2、n-アセチルシステイン、ガストリン、ニコチンアミド、およびSB202190）。 . 次いで、出芽陰窩を分化培地（ＣＭＧＦ＋、Ｗｎｔ３ならし培地、ＳＢ２０２１９０およびニコチンアミドを除く、ならびにＲｓｐｏ－１ならし培地およびノギンの量を減らしたもの）中でインキュベートする。 三次元の腸のようなエンテロイドの形成は、毎日監視されます。
研究の種類
入学 (予想される)
段階
- 適用できない
連絡先と場所
研究場所
-
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Hong Kong、中国
- 募集
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
-
コンタクト：
- Chi-Wai Chan, PhD
- 電話番号：+852 35051523
- メール：martin.chan@cuhk.edu.hk
-
主任研究者：
- Chi-Wai Chan, PhD
-
副調査官：
- Kay-Sheung Chan, MD
-
副調査官：
- Hei Wong, MBChB; DPhil
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
説明
包含基準:
- 18歳以上の成人
- プリンス オブ ウェールズ病院、シャティン、香港、中国の内視鏡検査ユニットで、消化不良の症状のために胃腸内視鏡検査を受ける予定の外来患者
- -書面によるインフォームドコンセントを提供することができ、喜んで提供する
除外基準:
- 出血のリスクを高める可能性のある抗凝固剤および/またはアスピリンの使用
- 出血素因の病歴
- 生検サンプリングの禁忌
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
- 主な目的：BASIC_SCIENCE
- 割り当て：NA
- 介入モデル：SINGLE_GROUP
- マスキング：なし
武器と介入
参加者グループ / アーム |
介入・治療 |
|---|---|
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実験的：腸管幹細胞由来エンテロイド
十二指腸生検サンプルと唾液は参加者から収集され、実験室で処理されて腸幹細胞由来のエンテロイドが生成されます。
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各参加者から2つの十二指腸生検サンプルが収集されます
唾液 (1-2 mL) は、分泌ステータス テストのために各参加者から収集されます。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
|---|---|---|
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ヒト腸管幹細胞由来エンテロイドの樹立
時間枠：平均3ヶ月
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顕微鏡で測定したエンテロイドの生存率
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平均3ヶ月
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協力者と研究者
捜査官
- 主任研究者：Chi-Wai Chan, PhD、Chinese University of Hong Kong
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (予想される)
研究の完了 (予想される)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
本研究に関する用語
キーワード
追加の関連 MeSH 用語
その他の研究ID番号
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
個々の参加者データ (IPD) の計画
個々の参加者データ (IPD) を共有する予定はありますか?
医薬品およびデバイス情報、研究文書
米国FDA規制医薬品の研究
米国FDA規制機器製品の研究
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