Идентификация факторов-хозяев норовирусных инфекций в модели мини-кишки
Полногеномный скрининг CRISPR на факторы хозяина, связанные с норовирусными инфекциями, в модели кишечных энтероидов человека, полученных из стволовых клеток
Основная цель этого исследования — составить список клеточных белков хозяина, которые опосредуют норовирусную инфекцию.
Норовирус является одним из наиболее распространенных возбудителей диарейных заболеваний, вызываемых небезопасными пищевыми продуктами. Он также является основной причиной смертности детей младшего возраста и взрослых от инфекций пищевого происхождения. Норовирус — это не просто бремя пищевого происхождения. Согласно недавнему метаанализу, норовирус является причиной почти одной пятой всех причин (включая передачу от человека к человеку) острого гастроэнтерита как в спорадических, так и во вспышках, и поражает все возрастные группы. Несомненно, норовирус представляет первостепенную проблему для общественного здравоохранения как в развитых, так и в развивающихся странах. Для целенаправленного вмешательства потребуются исследовательские усилия для лучшего понимания патобиологии норовируса.
От коронавируса ближневосточного респираторного синдрома до вируса Зика усилия по выявлению факторов хозяина, важных для распространения вирусной инфекции, всегда были приоритетом исследований. Такая информация прольет свет на потенциальные терапевтические мишени противовирусного вмешательства. Исследования взаимодействия вируса-хозяина норовируса были затруднены из-за отсутствия надежной модели клеточной культуры за последние 20 лет. В 2016 году норовирус, наконец, был успешно культивирован в трехмерной структуре, похожей на кишечник человека, полученной из стволовых клеток, называемой энтероидом или мини-кишкой.
В этом исследовании стволовые клетки кишечника будут выделены из биоптатов двенадцатиперстной кишки, взятых у участников, с последующей дифференцировкой в мини-кишки. Полногеномный генетический скрининг основных и рестриктивных факторов хозяина будет проводиться на инфицированных мини-кишках с помощью нокаутного CRISPR и CRISPR SAM с усилением функции соответственно. Отобранные кандидаты пройдут предварительную функциональную проверку в клеточных линиях. Эти данные дадут представление о потенциальных терапевтических мишенях против норовирусной инфекции.
Обзор исследования
Статус
Условия
Вмешательство/лечение
Подробное описание
Дизайн и обзор исследования. Это лабораторное исследование. Исследователи планируют составить список клеточных белков хозяина, регулирующих норовирусную инфекцию. Методы будут включать создание специфичных для пациента кишечных энтероидов человека, полученных из стволовых клеток, в качестве модели инфекции и полногеномный генетический скрининг CRISPR и CRISPR SAM при инфекциях двух генотипов норовируса.
***Создание модели кишечных энтероидов человека***
- Биопсия двенадцатиперстной кишки и сбор слюны. После получения информированного согласия, одобренного IRB, два образца биопсии двенадцатиперстной кишки будут получены от каждого участника, проходящего эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта без противопоказаний для взятия биопсии, например, у участников, принимающих антикоагулянты или имеющих другие причины геморрагического диатеза. Образцы биопсии будут погружены в ледяной 1xPBS и немедленно доставлены в лабораторию в течение 30 минут для дальнейшей обработки. Кроме того, у каждого участника будет собрана слюна (1-2 мл) для тестирования секреторного статуса с помощью ELISA.
- Выделение стволовых клеток крипт и их дифференцировка. По прибытии образцы биопсии сначала будут измельчаться на более мелкие кусочки. Клетки кишечных крипт будут выделены повторным промыванием и инкубацией с 1x полным хелатирующим раствором (1xCCS) и буфером EDTA. Затем надосадочную жидкость, содержащую клетки крипт, выращивают в матригеле, содержащем полную среду с факторами роста (CMGF+) (среда, кондиционированная Wnt 3 и Rspo-1, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-ацетилцистеин, гастрин, никотинамид и SB202190). . Затем почкующиеся крипты инкубируют в среде для дифференциации (CMGF+, за исключением кондиционированной среды Wnt 3, SB202190 и никотинамида, а также с уменьшенным количеством кондиционированной среды Rspo-1 и Noggin). Ежедневно контролируют формирование трехмерных кишечноподобных энтероидов.
Тип исследования
Регистрация (Ожидаемый)
Фаза
- Непригодный
Контакты и местонахождение
Места учебы
-
-
-
Hong Kong, Китай
- Рекрутинг
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
-
Контакт:
- Chi-Wai Chan, PhD
- Номер телефона: +852 35051523
- Электронная почта: martin.chan@cuhk.edu.hk
-
Главный следователь:
- Chi-Wai Chan, PhD
-
Младший исследователь:
- Kay-Sheung Chan, MD
-
Младший исследователь:
- Hei Wong, MBChB; DPhil
-
-
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Полы, имеющие право на обучение
Описание
Критерии включения:
- Взрослые в возрасте 18 лет и старше
- Потенциальные амбулаторные пациенты, которым предстоит эндоскопия желудочно-кишечного тракта по поводу симптомов диспепсии в отделении эндоскопии больницы принца Уэльского, Шатин, Гонконг, Китай
- Способны и готовы предоставить информированное письменное согласие
Критерий исключения:
- Использование антикоагулянтов и/или аспирина, которые могут увеличить риск кровотечения.
- Геморрагический диатез в анамнезе
- Противопоказания к взятию биопсии
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
- Основная цель: БАЗОВАЯ_НАУКА
- Распределение: Нет данных
- Интервенционная модель: SINGLE_GROUP
- Маскировка: НИКТО
Оружие и интервенции
Группа участников / Армия |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Экспериментальный: Энтероиды, полученные из стволовых клеток кишечника
Образцы биопсии двенадцатиперстной кишки и слюна будут взяты у участников, а затем обработаны в лаборатории для получения энтероидов, полученных из стволовых клеток кишечника.
|
У каждого участника будут взяты два образца биопсии двенадцатиперстной кишки.
Слюна (1-2 мл) будет собрана у каждого участника для тестирования секреторного статуса.
|
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Создание энтероидов, полученных из стволовых клеток кишечника человека
Временное ограничение: В среднем три месяца
|
Жизнеспособность энтероидов при микроскопии
|
В среднем три месяца
|
Соавторы и исследователи
Спонсор
Следователи
- Главный следователь: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
Первичное завершение (Ожидаемый)
Завершение исследования (Ожидаемый)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Действительный)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Дополнительные соответствующие термины MeSH
Другие идентификационные номера исследования
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
Планирование данных отдельных участников (IPD)
Планируете делиться данными об отдельных участниках (IPD)?
Информация о лекарствах и устройствах, исследовательские документы
Изучает лекарственный продукт, регулируемый FDA США.
Изучает продукт устройства, регулируемый Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .