Norovirusinfektioiden isäntätekijöiden tunnistaminen mini-gut-mallissa
Genominlaajuinen CRISPR-näyttö isäntätekijöille, jotka liittyvät norovirusinfektioihin kantasoluperäisessä ihmisen suoliston enteroidimallissa
Tämän tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena on luoda luettelo isäntäsoluproteiineista, jotka välittävät norovirusinfektiota.
Norovirus on yksi yleisimmistä taudinaiheuttajista, jotka johtuvat epäturvallisesta ruoasta johtuvista ripulista. Se on myös pienten lasten ja aikuisten ensisijainen kuolleisuus ruokaperäisiin infektioihin. Norovirus ei ole vain ruokavälitteinen taakka. Äskettäisen meta-analyysin mukaan norovirus aiheuttaa lähes viidenneksen kaikista akuutin gastroenteriitin syistä (mukaan lukien ihmisestä toiseen leviäminen) sekä satunnaisissa että taudinpurkaustilanteissa, ja se vaikuttaa kaikkiin ikäryhmiin. Epäilemättä norovirus on erittäin tärkeä kansanterveyshuolenaihe sekä kehittyneissä että kehitysmaissa. Kohdennettua interventiota varten tarvitaan tutkimusponnisteluja noroviruspatobiologian ymmärtämiseksi paremmin.
Lähi-idän hengitystieoireyhtymän koronaviruksesta Zika-virukseen virustartunnan välittämisen kannalta tärkeiden isäntätekijöiden tunnistaminen on aina ollut tutkimuksen prioriteetti. Tällaiset tiedot valaisevat mahdollisia terapeuttisia kohteita antiviraalisessa interventiossa. Norovirusvirus-isäntävuorovaikutustutkimuksia on haitannut vankan soluviljelymallin puute viimeisen 20 vuoden aikana. Vuonna 2016 norovirusta on vihdoinkin viljelty onnistuneesti kantasoluperäisessä kolmiulotteisessa ihmisen suolen kaltaisessa rakenteessa, jota kutsutaan enteroidiksi tai minigutiksi.
Tässä tutkimuksessa suoliston kantasolut eristetään osallistujilta kerätyistä pohjukaissuolen biopsioista, minkä jälkeen erilaistetaan minisuoliksi. Genominlaajuinen geneettinen seulonta isännän olennaisten ja rajoittavien tekijöiden varalta suoritetaan tartunnan saaneille minisuoleille Knockout CRISPR:llä ja toiminnan vahvistuksella CRISPR SAM, vastaavasti. Listalle valitut ehdokkaat käyvät läpi alustavan toiminnallisen validoinnin solulinjoissa. Nämä tiedot antavat käsityksen mahdollisista terapeuttisista kohteista norovirusinfektiota vastaan.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Tutkimuksen suunnittelu ja yleiskatsaus - Tämä on laboratoriopohjainen tutkimus. Tutkijat aikovat laatia luettelon isäntäsoluproteiineista, jotka säätelevät norovirusinfektiota. Menetelmiin kuuluu potilaskohtaisten kantasoluperäisten ihmisen suoliston enteroidien määrittäminen infektiomalliksi ja genominlaajuiset CRISPR- ja CRISPR SAM -geeniseulonnat kahden norovirusgenotyypin infektioiden yhteydessä.
***Ihmisen suoliston enteroidimallin luominen***
- Pohjukaissuolen biopsiat ja syljen kerääminen - IRB-hyväksyttyjen tietoisen suostumuksen saatuaan jokaiselta osallistujalta, jolle tehdään ylemmän maha-suolikanavan endoskopia, otetaan kaksi pohjukaissuolen biopsianäytettä ilman vasta-aiheita biopsianäytteen ottamiseen, kuten osallistujilta, jotka käyttävät antikoagulaatiota tai muita verenvuotodiateesin syitä. Biopsianäytteet upotetaan jääkylmään 1xPBS:ään ja kuljetetaan välittömästi laboratorioon 30 minuutin kuluessa jatkokäsittelyä varten. Lisäksi jokaiselta osallistujalta kerätään sylkeä (1-2 ml) erittymistilan testausta varten ELISA-menetelmällä.
- Kryptakantasolujen eristäminen ja erilaistuminen - Saapuessaan biopsianäytteet leikataan ensin pienemmiksi paloiksi. Suolen kryptasolut eristetään pesemällä toistuvasti ja inkuboimalla 1x Complete Chelating -liuoksen (1xCCS) ja EDTA-puskurin kanssa. Kryptussoluja sisältävää supernatanttia kasvatetaan sitten Matrigelissa, joka sisältää täydellistä kasvutekijää (CMGF+) sisältävää alustaa (Wnt 3- ja Rspo-1-käsitelty elatusaine, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-asetyylikysteiini, gastriini, nikotiiniamidi ja SB202190). . Orastuvia kryptejä inkuboidaan sitten erilaistumiselatusaineessa (CMGF+, lukuun ottamatta Wnt 3 -käsiteltyä alustaa, SB202190:tä ja nikotiiniamidia sekä jossa on pienempi määrä Rspo-1-käsiteltyä alustaa ja Noggin). Kolmiulotteisten suolen kaltaisten enteroidien muodostumista seurataan päivittäin.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Odotettu)
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Hong Kong, Kiina
- Rekrytointi
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
-
Ottaa yhteyttä:
- Chi-Wai Chan, PhD
- Puhelinnumero: +852 35051523
- Sähköposti: martin.chan@cuhk.edu.hk
-
Päätutkija:
- Chi-Wai Chan, PhD
-
Alatutkija:
- Kay-Sheung Chan, MD
-
Alatutkija:
- Hei Wong, MBChB; DPhil
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- 18 vuotta täyttäneet aikuiset
- Mahdolliset avopotilaat, joille tehdään maha-suolikanavan endoskopia dyspepsian oireiden vuoksi Prince of Walesin sairaalan endoskopiayksikössä, Shatin, Hong Kong, Kiina
- Pystyy ja haluaa antaa tietoon perustuvan kirjallisen suostumuksen
Poissulkemiskriteerit:
- Antikoagulanttien ja/tai aspiriinin käyttö, mikä saattaa lisätä verenvuotoriskiä
- Verenvuotodiateesi historia
- Vasta-aiheet biopsianäytteen ottamiseen
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: BASIC_SCIENCE
- Jako: NA
- Inventiomalli: SINGLE_GROUP
- Naamiointi: EI MITÄÄN
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: Suoliston kantasoluista peräisin olevat enteroidit
Pohjukaissuolen biopsianäytteet ja sylki otetaan osallistujilta ja käsitellään sitten laboratoriossa suoliston kantasoluista peräisin olevien enteroidien tuottamiseksi.
|
Jokaiselta osallistujalta otetaan kaksi pohjukaissuolen biopsianäytettä
Jokaiselta osallistujalta kerätään sylkeä (1-2 ml) erittymistilan testausta varten
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Ihmisen suoliston kantasoluista peräisin olevien enteroidien perustaminen
Aikaikkuna: Keskimäärin kolme kuukautta
|
Enteroidien elinkelpoisuus määritettynä mikroskoopilla
|
Keskimäärin kolme kuukautta
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Tutkijat
- Päätutkija: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Odotettu)
Opintojen valmistuminen (Odotettu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .