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Identificazione dei fattori ospiti delle infezioni da Norovirus nel modello Mini-Gut

19 settembre 2018 aggiornato da: CHAN CHI WAI, Chinese University of Hong Kong

Schermata CRISPR dell'intero genoma per fattori dell'ospite associati a infezioni da norovirus nel modello enteroide intestinale umano derivato da cellule staminali

L'obiettivo principale di questo studio è stabilire un elenco di proteine ​​​​cellulari ospiti che mediano l'infezione da norovirus.

Il norovirus è uno dei patogeni più comuni attribuiti a malattie diarroiche da alimenti non sicuri. È anche la principale causa di mortalità tra i bambini piccoli e gli adulti nelle infezioni di origine alimentare. Il norovirus non è solo un peso di origine alimentare. In una recente meta-analisi, il norovirus rappresenta quasi un quinto di tutte le cause di gastroenterite acuta (inclusa la trasmissione da persona a persona) sia in contesti sporadici che epidemici e colpisce tutte le fasce di età. Indubbiamente, il norovirus è di primaria importanza per la salute pubblica sia nei paesi sviluppati che in quelli in via di sviluppo. Gli sforzi di ricerca per comprendere meglio la patobiologia del norovirus saranno necessari per un intervento mirato.

Dal coronavirus della sindrome respiratoria del Medio Oriente al virus Zika, gli sforzi per identificare i fattori dell'ospite importanti per la mediazione dell'infezione virale sono sempre stati una priorità della ricerca. Tali informazioni faranno luce sui potenziali bersagli terapeutici nell'intervento antivirale. Gli studi sull'interazione virus-ospite Norovirus sono stati ostacolati dalla mancanza di un robusto modello di coltura cellulare negli ultimi 20 anni. Nel 2016, il norovirus è stato finalmente coltivato con successo in una struttura tridimensionale simile all'intestino umano derivata da cellule staminali chiamata enteroide o mini-intestino.

In questo studio, le cellule staminali intestinali saranno isolate dalle biopsie duodenali raccolte dai partecipanti, seguite dalla differenziazione in mini-intestino. Lo screening genetico dell'intero genoma per i fattori essenziali e restrittivi dell'ospite sarà eseguito su mini-intestino infetto mediante CRISPR knockout e CRISPR SAM con guadagno di funzione, rispettivamente. I candidati selezionati saranno sottoposti a validazione funzionale preliminare nelle linee cellulari. Questi dati forniranno approfondimenti sui potenziali bersagli terapeutici contro l'infezione da norovirus.

Panoramica dello studio

Stato

Sconosciuto

Condizioni

Intervento / Trattamento

Descrizione dettagliata

Disegno e panoramica dello studio - Si tratta di uno studio di laboratorio. I ricercatori intendono stabilire un elenco di proteine ​​cellulari ospiti che regolano l'infezione da norovirus. I metodi includeranno la creazione di enteroidi intestinali umani derivati ​​da cellule staminali specifici del paziente come modello di infezione e screening genetici CRISPR e CRISPR SAM a livello di genoma su infezioni di due genotipi di norovirus.

***Istituzione del modello enteroide intestinale umano***

  1. Biopsie duodenali e raccolta della saliva - Dopo aver ottenuto il consenso informato approvato dall'IRB, verranno prelevati due campioni di biopsia duodenale da ciascun partecipante sottoposto a endoscopia del tratto gastrointestinale superiore senza controindicazioni per il prelievo bioptico, come i partecipanti con anticoagulanti o con altre cause di diatesi emorragica. I campioni bioptici saranno immersi in 1xPBS ghiacciato e trasportati immediatamente al laboratorio entro 30 minuti per l'ulteriore elaborazione. Inoltre, la saliva (1-2 ml) verrà raccolta da ciascun partecipante per il test dello stato dei secretori mediante ELISA.
  2. Isolamento delle cellule staminali della cripta e differenziazione - All'arrivo, i campioni bioptici verranno prima tagliati in pezzi più piccoli. Le cellule della cripta intestinale saranno isolate mediante ripetuti lavaggi e incubazioni con 1x Complete Chelating solution (1xCCS) e EDTA buffer. Il supernatante contenente cellule criptate verrà quindi coltivato in Matrigel contenente terreno completo con fattori di crescita (CMGF+) (terreno condizionato Wnt 3 e Rspo-1, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-acetilcisteina, gastrina, nicotinamide e SB202190) . Le cripte gemmanti saranno quindi incubate in terreno di differenziamento (CMGF+, escluso terreno condizionato Wnt 3, SB202190 e nicotinamide, oltre ad avere una quantità ridotta di terreno condizionato Rspo-1 e Noggin). La formazione di enteroidi intestinali tridimensionali sarà monitorata giornalmente.

Tipo di studio

Interventistico

Iscrizione (Anticipato)

20

Fase

  • Non applicabile

Contatti e Sedi

Questa sezione fornisce i recapiti di coloro che conducono lo studio e informazioni su dove viene condotto lo studio.

Luoghi di studio

  • Cina
      • Hong Kong, Cina
        • Reclutamento
        • Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
        • Contatto:
        • Investigatore principale:
          • Chi-Wai Chan, PhD
        • Sub-investigatore:
          • Kay-Sheung Chan, MD
        • Sub-investigatore:
          • Hei Wong, MBChB; DPhil

Criteri di partecipazione

I ricercatori cercano persone che corrispondano a una certa descrizione, chiamata criteri di ammissibilità. Alcuni esempi di questi criteri sono le condizioni generali di salute di una persona o trattamenti precedenti.

Criteri di ammissibilità

Età idonea allo studio

18 anni e precedenti (ADULTO, ANZIANO_ADULTO)

Accetta volontari sani

Sì

Sessi ammissibili allo studio

Tutto

Descrizione

Criterio di inclusione:

  • Adulti di età pari o superiore a 18 anni
  • Potenziali pazienti ambulatoriali sottoposti a endoscopia gastrointestinale per sintomi di dispepsia nell'unità di endoscopia del Prince of Wales Hospital, Shatin, Hong Kong, Cina
  • In grado e disposto a fornire il consenso scritto informato

Criteri di esclusione:

  • Uso di anticoagulanti e/o aspirina che possono aumentare il rischio di sanguinamento
  • Storia di diatesi emorragica
  • Controindicazioni per il prelievo bioptico

Piano di studio

Questa sezione fornisce i dettagli del piano di studio, compreso il modo in cui lo studio è progettato e ciò che lo studio sta misurando.

Come è strutturato lo studio?

Dettagli di progettazione

  • Scopo principale: SCIENZA BASILARE
  • Assegnazione: N / A
  • Modello interventistico: SINGOLO_GRUPPO
  • Mascheramento: NESSUNO

Armi e interventi

Gruppo di partecipanti / Arm
Intervento / Trattamento
Sperimentale: Enteroidi derivati ​​da cellule staminali intestinali
I campioni di biopsia duodenale e la saliva saranno raccolti dai partecipanti e quindi elaborati in laboratorio per generare enteroidi derivati ​​​​da cellule staminali intestinali.
Procedura: Biopsia duodenale
Verranno raccolti due campioni di biopsia duodenale da ciascun partecipante
Procedura: Saliva
La saliva (1-2 ml) verrà raccolta da ciascun partecipante per il test dello stato del secretore

Cosa sta misurando lo studio?

Misure di risultato primarie

Misura del risultato
Misura Descrizione
Lasso di tempo
Istituzione di enteroidi derivati ​​da cellule staminali intestinali umane
Lasso di tempo: Una media di tre mesi
Vitalità degli enteroidi determinata mediante microscopia
Una media di tre mesi

Collaboratori e investigatori

Qui è dove troverai le persone e le organizzazioni coinvolte in questo studio.

Sponsor

Chinese University of Hong Kong

Investigatori

  • Investigatore principale: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong

Studiare le date dei record

Queste date tengono traccia dell'avanzamento della registrazione dello studio e dell'invio dei risultati di sintesi a ClinicalTrials.gov. I record degli studi e i risultati riportati vengono esaminati dalla National Library of Medicine (NLM) per assicurarsi che soddisfino specifici standard di controllo della qualità prima di essere pubblicati sul sito Web pubblico.

Studia le date principali

Inizio studio (Effettivo)

18 aprile 2018

Completamento primario (Anticipato)

31 dicembre 2020

Completamento dello studio (Anticipato)

31 dicembre 2020

Date di iscrizione allo studio

Primo inviato

9 novembre 2017

Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità

13 novembre 2017

Primo Inserito (Effettivo)

17 novembre 2017

Aggiornamenti dei record di studio

Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)

20 settembre 2018

Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC

19 settembre 2018

Ultimo verificato

1 settembre 2018

Maggiori informazioni

Termini relativi a questo studio

Parole chiave

Termini MeSH pertinenti aggiuntivi

Altri numeri di identificazione dello studio

  • MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930

Piano per i dati dei singoli partecipanti (IPD)

Hai intenzione di condividere i dati dei singoli partecipanti (IPD)?

INDECISO

Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio

Studia un prodotto farmaceutico regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti

No

Studia un dispositivo regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti

No

Queste informazioni sono state recuperate direttamente dal sito web clinicaltrials.gov senza alcuna modifica. In caso di richieste di modifica, rimozione o aggiornamento dei dettagli dello studio, contattare register@clinicaltrials.gov. Non appena verrà implementata una modifica su clinicaltrials.gov, questa verrà aggiornata automaticamente anche sul nostro sito web .

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