Identifikasjon av vertsfaktorer for Norovirusinfeksjoner i Mini-Gut Model
Genomomfattende CRISPR-skjerm for vertsfaktorer assosiert med norovirusinfeksjoner i stamcelle-avledet human intestinal enteroidmodell
Hovedmålet i denne studien er å etablere en liste over vertscellulære proteiner som medierer norovirusinfeksjon.
Norovirus er en av de vanligste patogenene som tilskrives diarésykdommer fra usikker mat. Det er også den primære årsaken til dødelighet blant små barn og voksne i matbårne infeksjoner. Norovirus er ikke bare en matbåren byrde. I en fersk metaanalyse står norovirus for nesten en femtedel av alle årsaker til (inkludert person-til-person overføring) akutt gastroenteritt i både sporadiske og utbruddsmiljøer og påvirker alle aldersgrupper. Utvilsomt er norovirus av største betydning for folkehelsen i både utviklede land og utviklingsland. Forskningsinnsats for å bedre forstå norovirus patobiologi vil være nødvendig for målrettet intervensjon.
Fra Midtøsten respiratorisk syndrom koronavirus til Zika-virus, har forsøk på å identifisere vertsfaktorer som er viktige for å formidle virusinfeksjon alltid vært en forskningsprioritet. Slik informasjon vil kaste lys over potensielle terapeutiske mål ved antiviral intervensjon. Norovirus-virus-vert-interaksjonsstudier har blitt hemmet av mangelen på en robust cellekulturmodell de siste 20 årene. I 2016 har norovirus endelig blitt vellykket dyrket i en stamcelle-avledet tredimensjonal menneskelig tarmlignende struktur kalt enteroid eller mini-gut.
I denne studien vil intestinale stamceller bli isolert fra duodenale biopsier samlet inn fra deltakerne, etterfulgt av differensiering til mini-tarm. Genomomfattende genetisk screening for vertens essensielle og restriktive faktorer vil bli utført på infiserte mini-tarm ved henholdsvis knockout CRISPR og gain-of-function CRISPR SAM. Kortlistede kandidater vil gjennomgå foreløpig funksjonell validering i cellelinjer. Disse dataene vil gi innsikt i potensielle terapeutiske mål mot norovirusinfeksjon.
Studieoversikt
Status
Forhold
Intervensjon / Behandling
Detaljert beskrivelse
Studiedesign og oversikt – Dette er en laboratoriebasert studie. Etterforskerne planlegger å etablere en liste over vertscellulære proteiner som regulerer norovirusinfeksjon. Metoder vil inkludere etablering av pasientspesifikke stamcelle-avledede humane intestinale enteroider som en infeksjonsmodell og genomomfattende CRISPR og CRISPR SAM genetiske screeninger etter infeksjoner av to norovirusgenotyper.
***Etablering av human intestinal enteroid modell***
- Duodenale biopsier og spyttinnsamling - Etter å ha innhentet IRB-godkjent informert samtykke, vil det innhentes to duodenale biopsiprøver fra hver deltaker som gjennomgår øvre gastrointestinal endoskopi uten kontraindikasjoner for biopsiprøvetaking, som deltakere på antikoagulasjon eller med andre årsaker til blødningsdiatese. Biopsiprøver vil bli nedsenket i iskald 1xPBS og transportert umiddelbart til laboratoriet innen 30 minutter for videre behandling. I tillegg vil spytt (1-2 ml) samles inn fra hver deltaker for testing av sekretorstatus ved hjelp av ELISA.
- Isolering av kryptstamceller og differensiering - Ved ankomst vil biopsiprøver først kuttes i mindre biter. Intestinale kryptceller vil bli isolert ved gjentatt vask og inkubering med 1x komplett chelateringsløsning (1xCCS) og EDTA-buffer. Supernatant som inneholder kryptceller vil deretter dyrkes i Matrigel som inneholder komplett medium med vekstfaktorer (CMGF+) (Wnt 3 og Rspo-1 kondisjonerte medier, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-acetylcystein, gastrin, nikotinamid og SB202190) . Spirende krypter vil deretter bli inkubert i differensieringsmedium (CMGF+, unntatt Wnt 3-kondisjonert medium, SB202190 og nikotinamid, samt ha redusert mengde Rspo-1-kondisjonert medium og Noggin). Dannelse av tredimensjonale tarmlignende enteroider vil bli overvåket daglig.
Studietype
Registrering (Forventet)
Fase
- Ikke aktuelt
Kontakter og plasseringer
Studiesteder
-
-
-
Hong Kong, Kina
- Rekruttering
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
-
Ta kontakt med:
- Chi-Wai Chan, PhD
- Telefonnummer: +852 35051523
- E-post: martin.chan@cuhk.edu.hk
-
Hovedetterforsker:
- Chi-Wai Chan, PhD
-
Underetterforsker:
- Kay-Sheung Chan, MD
-
Underetterforsker:
- Hei Wong, MBChB; DPhil
-
-
Deltakelseskriterier
Kvalifikasjonskriterier
Alder som er kvalifisert for studier
Tar imot friske frivillige
Kjønn som er kvalifisert for studier
Beskrivelse
Inklusjonskriterier:
- Voksne i alderen 18 år eller eldre
- Potensielle polikliniske pasienter som gjennomgår gastrointestinal endoskopi for symptomer på dyspepsi i endoskopienheten ved Prince of Wales Hospital, Shatin, Hong Kong, Kina
- Kan og er villig til å gi informert skriftlig samtykke
Ekskluderingskriterier:
- Bruk av antikoagulantia og/eller aspirin som kan ha økt risiko for blødning
- Historie med blødende diatese
- Kontraindikasjoner for biopsiprøvetaking
Studieplan
Hvordan er studiet utformet?
Designdetaljer
- Primært formål: BASIC_SCIENCE
- Tildeling: NA
- Intervensjonsmodell: SINGLE_GROUP
- Masking: INGEN
Våpen og intervensjoner
Deltakergruppe / Arm |
Intervensjon / Behandling |
|---|---|
|
Eksperimentell: Intestinale stamcelle-avledede enteroider
Duodenale biopsiprøver og spytt vil bli samlet inn fra deltakerne og deretter behandlet i laboratoriet for å generere tarmstamcelle-avledede enteroider.
|
To duodenale biopsiprøver vil bli samlet inn fra hver deltaker
Spytt (1-2 ml) vil bli samlet inn fra hver deltaker for testing av sekretorstatus
|
Hva måler studien?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
Etablering av humane intestinale stamcelle-avledede enteroider
Tidsramme: I gjennomsnitt tre måneder
|
Levedyktigheten til enteroider som bestemt ved mikroskopi
|
I gjennomsnitt tre måneder
|
Samarbeidspartnere og etterforskere
Sponsor
Etterforskere
- Hovedetterforsker: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong
Studierekorddatoer
Studer hoveddatoer
Studiestart (Faktiske)
Primær fullføring (Forventet)
Studiet fullført (Forventet)
Datoer for studieregistrering
Først innsendt
Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene
Først lagt ut (Faktiske)
Oppdateringer av studieposter
Sist oppdatering lagt ut (Faktiske)
Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene
Sist bekreftet
Mer informasjon
Begreper knyttet til denne studien
Nøkkelord
Ytterligere relevante MeSH-vilkår
Andre studie-ID-numre
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
Plan for individuelle deltakerdata (IPD)
Planlegger du å dele individuelle deltakerdata (IPD)?
Legemiddel- og utstyrsinformasjon, studiedokumenter
Studerer et amerikansk FDA-regulert medikamentprodukt
Studerer et amerikansk FDA-regulert enhetsprodukt
Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .