Identificatie van gastheerfactoren van Norovirus-infecties in Mini-Gut-model
Genoombred CRISPR-scherm voor gastheerfactoren geassocieerd met norovirusinfecties in stamcel-afgeleid humaan darmenteroïde model
Het primaire doel van deze studie is het opstellen van een lijst van cellulaire gastheereiwitten die norovirusinfectie mediëren.
Norovirus is een van de meest voorkomende ziekteverwekkers die worden toegeschreven aan diarreeziekten door onveilig voedsel. Het is ook de belangrijkste doodsoorzaak bij jonge kinderen en volwassenen bij voedselinfecties. Norovirus is niet alleen een door voedsel overgedragen last. In een recente meta-analyse is het norovirus verantwoordelijk voor bijna een vijfde van alle oorzaken van (inclusief overdracht van persoon op persoon) acute gastro-enteritis in zowel sporadische als uitbraaksituaties en treft het alle leeftijdsgroepen. Het norovirus is ongetwijfeld van het grootste belang voor de volksgezondheid in zowel ontwikkelde als ontwikkelingslanden. Onderzoeksinspanningen om de pathobiologie van norovirus beter te begrijpen, zullen nodig zijn voor gerichte interventie.
Van het coronavirus van het ademhalingssyndroom in het Midden-Oosten tot het zikavirus, inspanningen om gastheerfactoren te identificeren die belangrijk zijn voor het mediëren van virusinfecties, zijn altijd een onderzoeksprioriteit geweest. Dergelijke informatie zal licht werpen op mogelijke therapeutische doelen bij antivirale interventie. Norovirus-virus-gastheerinteractiestudies werden belemmerd door het ontbreken van een robuust celkweekmodel in de afgelopen 20 jaar. In 2016 is het norovirus eindelijk met succes gekweekt in een van stamcellen afgeleide driedimensionale menselijke darmachtige structuur die enteroïde of minidarm wordt genoemd.
In deze studie zullen darmstamcellen worden geïsoleerd uit duodenumbiopten van deelnemers, gevolgd door differentiatie in mini-darmen. Genoombrede genetische screening op gastheer-essentiële en beperkende factoren zal worden uitgevoerd op geïnfecteerde mini-darmen door respectievelijk knock-out CRISPR en gain-of-function CRISPR SAM. Kandidaten op de shortlist ondergaan voorlopige functionele validatie in cellijnen. Deze gegevens zullen inzicht geven in mogelijke therapeutische doelen tegen norovirusinfectie.
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Interventie / Behandeling
Gedetailleerde beschrijving
Onderzoeksopzet en overzicht - Dit is een laboratoriumonderzoek. De onderzoekers zijn van plan een lijst op te stellen van cellulaire gastheereiwitten die norovirusinfectie reguleren. Methoden omvatten het opzetten van patiëntspecifieke stamcel-afgeleide menselijke intestinale enteroïden als een infectiemodel en genoombrede CRISPR- en CRISPR SAM-genetische screenings bij infecties van twee norovirusgenotypes.
***Oprichting van een humaan intestinaal enteroïdemodel***
- Duodenale biopsieën en speekselverzameling - Na het verkrijgen van IRB-goedgekeurde geïnformeerde toestemming, zullen twee duodenale biopsiemonsters worden verkregen van elke deelnemer die endoscopie van het bovenste deel van het maagdarmkanaal ondergaat zonder contra-indicaties voor biopsiemonsters, zoals deelnemers die antistolling gebruiken of met andere oorzaken van bloedingsdiathese. Biopsiemonsters worden ondergedompeld in ijskoud 1xPBS en binnen 30 minuten onmiddellijk naar het laboratorium getransporteerd voor verdere verwerking. Bovendien wordt van elke deelnemer speeksel (1-2 ml) verzameld voor het testen van de secretorstatus door ELISA.
- Isolatie van cryptestamcellen en differentiatie - Bij aankomst worden biopsiemonsters eerst in kleinere stukjes gehakt. Intestinale cryptecellen zullen worden geïsoleerd door herhaald wassen en incubatie met 1x Complete Chelating-oplossing (1xCCS) en EDTA-buffer. Supernatant met cryptecellen zal vervolgens worden gekweekt in Matrigel dat volledig medium bevat met groeifactoren (CMGF+) (Wnt 3 en Rspo-1 geconditioneerde media, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-acetylcysteïne, gastrine, nicotinamide en SB202190) . Ontluikende crypten zullen vervolgens worden geïncubeerd in differentiatiemedium (CMGF+, met uitzondering van Wnt 3 geconditioneerd medium, SB202190 en nicotinamide en met een verminderde hoeveelheid Rspo-1 geconditioneerd medium en Noggin). De vorming van driedimensionale darmachtige enteroïden zal dagelijks worden gecontroleerd.
Studietype
Inschrijving (Verwacht)
Fase
- Niet toepasbaar
Contacten en locaties
Studie Locaties
-
-
-
Hong Kong, China
- Werving
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
-
Contact:
- Chi-Wai Chan, PhD
- Telefoonnummer: +852 35051523
- E-mail: martin.chan@cuhk.edu.hk
-
Hoofdonderzoeker:
- Chi-Wai Chan, PhD
-
Onderonderzoeker:
- Kay-Sheung Chan, MD
-
Onderonderzoeker:
- Hei Wong, MBChB; DPhil
-
-
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Beschrijving
Inclusiecriteria:
- Volwassenen van 18 jaar of ouder
- Toekomstige poliklinische patiënten die gastro-intestinale endoscopie ondergaan voor symptomen van dyspepsie in de endoscopie-eenheid van het Prince of Wales Hospital, Shatin, Hong Kong, China
- In staat en bereid om geïnformeerde schriftelijke toestemming te geven
Uitsluitingscriteria:
- Gebruik van antistollingsmiddelen en/of aspirine dat een verhoogd risico op bloedingen kan hebben
- Geschiedenis van bloedingsdiathese
- Contra-indicaties voor biopsiemonsters
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
- Primair doel: FUNDAMENTELE WETENSCHAP
- Toewijzing: NA
- Interventioneel model: SINGLE_GROUP
- Masker: GEEN
Wapens en interventies
Deelnemersgroep / Arm |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Experimenteel: Van darmstamcellen afgeleide enteroïden
Duodenale biopsiemonsters en speeksel zullen worden verzameld van deelnemers en vervolgens in het laboratorium worden verwerkt om darmstamcel-afgeleide enteroïden te genereren.
|
Van elke deelnemer worden twee duodenale biopsiemonsters genomen
Speeksel (1-2 ml) wordt verzameld van elke deelnemer voor het testen van de secretorstatus
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Oprichting van van menselijke darmstamcellen afgeleide enteroïden
Tijdsspanne: Gemiddeld drie maanden
|
Levensvatbaarheid van enteroïden zoals bepaald door microscopie
|
Gemiddeld drie maanden
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Onderzoekers
- Hoofdonderzoeker: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Werkelijk)
Primaire voltooiing (Verwacht)
Studie voltooiing (Verwacht)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Werkelijk)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Werkelijk)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
Plan Individuele Deelnemersgegevens (IPD)
Bent u van plan om gegevens van individuele deelnemers (IPD) te delen?
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .