Identificação de fatores hospedeiros de infecções por norovírus no modelo mini-intestino
Triagem CRISPR em todo o genoma para fatores do hospedeiro associados a infecções por norovírus em modelo de enteroide intestinal humano derivado de células-tronco
O objetivo principal neste estudo é estabelecer uma lista de proteínas celulares hospedeiras que medeiam a infecção por norovírus.
O norovírus é um dos patógenos mais comuns atribuídos a doenças diarreicas de alimentos inseguros. É também a principal causa de mortalidade entre crianças e adultos em infecções transmitidas por alimentos. O norovírus não é apenas um fardo transmitido por alimentos. Em uma meta-análise recente, o norovírus é responsável por quase um quinto de todas as causas de gastroenterite aguda (incluindo transmissão de pessoa para pessoa) em cenários esporádicos e de surto e afeta todas as faixas etárias. Sem dúvida, o norovírus é uma preocupação primordial de saúde pública em países desenvolvidos e em desenvolvimento. Esforços de pesquisa para entender melhor a patobiologia do norovírus serão necessários para uma intervenção direcionada.
Do coronavírus da síndrome respiratória do Oriente Médio ao vírus Zika, os esforços para identificar fatores do hospedeiro importantes para mediar a infecção por vírus sempre foram uma prioridade de pesquisa. Tal informação lançará luz sobre potenciais alvos terapêuticos na intervenção antiviral. Os estudos de interação vírus-hospedeiro norovírus foram dificultados pela falta de um modelo robusto de cultura de células nos últimos 20 anos. Em 2016, o norovírus foi finalmente cultivado com sucesso em uma estrutura semelhante ao intestino humano tridimensional derivada de células-tronco chamada enteroide ou mini-intestino.
Neste estudo, células-tronco intestinais serão isoladas de biópsias duodenais coletadas dos participantes, seguidas de diferenciação em mini-intestino. A triagem genética de todo o genoma para fatores essenciais e restritivos do hospedeiro será realizada em mini-intestino infectados por CRISPR nocaute e CRISPR SAM de ganho de função, respectivamente. Os candidatos pré-selecionados passarão por validação funcional preliminar em linhagens celulares. Esses dados fornecerão informações sobre possíveis alvos terapêuticos contra a infecção por norovírus.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Projeto e visão geral do estudo - Este é um estudo baseado em laboratório. Os investigadores planejam estabelecer uma lista de proteínas celulares hospedeiras que regulam a infecção por norovírus. Os métodos incluirão o estabelecimento de enteroides intestinais humanos derivados de células-tronco específicas do paciente como um modelo de infecção e telas genéticas CRISPR e CRISPR SAM em todo o genoma após infecções de dois genótipos de norovírus.
***Estabelecimento do modelo enteroide intestinal humano***
- Biópsias duodenais e coleta de saliva - Após a obtenção do consentimento informado aprovado pelo IRB, duas amostras de biópsia duodenal serão obtidas de cada participante submetido à endoscopia digestiva alta sem contraindicações para amostragem de biópsia, como participantes em anticoagulação ou com outras causas de diátese hemorrágica. As amostras de biópsia serão imersas em 1xPBS gelado e transportadas imediatamente para o laboratório em 30 minutos para posterior processamento. Além disso, a saliva (1-2 mL) será coletada de cada participante para teste do status secretor por ELISA.
- Isolamento de células-tronco da cripta e diferenciação - Na chegada, as amostras de biópsia serão primeiro cortadas em pedaços menores. Células de criptas intestinais serão isoladas por lavagens repetidas e incubação com solução quelante completa 1x (1xCCS) e tampão EDTA. As células da cripta contendo sobrenadante serão então cultivadas em meio completo contendo Matrigel com fatores de crescimento (CMGF+) (meios condicionados Wnt 3 e Rspo-1, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-acetilcisteína, gastrina, nicotinamida e SB202190) . As criptas em brotamento serão então incubadas em meio de diferenciação (CMGF+, excluindo meio condicionado Wnt 3, SB202190 e nicotinamida, bem como com quantidade reduzida de meio condicionado Rspo-1 e Noggin). A formação de enteroides tridimensionais em forma de intestino será monitorada diariamente.
Tipo de estudo
Inscrição (Antecipado)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Hong Kong, China
- Recrutamento
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
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Contato:
- Chi-Wai Chan, PhD
- Número de telefone: +852 35051523
- E-mail: martin.chan@cuhk.edu.hk
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Investigador principal:
- Chi-Wai Chan, PhD
-
Subinvestigador:
- Kay-Sheung Chan, MD
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Subinvestigador:
- Hei Wong, MBChB; DPhil
-
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Adultos com idade igual ou superior a 18 anos
- Pacientes ambulatoriais em potencial submetidos à endoscopia gastrointestinal para sintomas de dispepsia na Unidade de Endoscopia do Hospital Prince of Wales, Shatin, Hong Kong, China
- Capaz e disposto a fornecer consentimento informado por escrito
Critério de exclusão:
- Uso de anticoagulantes e/ou aspirina que podem aumentar o risco de sangramento
- História de diátese hemorrágica
- Contra-indicações para amostragem de biópsia
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: CIÊNCIA BÁSICA
- Alocação: N / D
- Modelo Intervencional: SINGLE_GROUP
- Mascaramento: NENHUM
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
|---|---|
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Experimental: Enteroides derivados de células-tronco intestinais
Amostras de biópsia duodenal e saliva serão coletadas dos participantes e depois processadas em laboratório para gerar enteroides derivados de células-tronco intestinais.
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Duas amostras de biópsia duodenal serão coletadas de cada participante
A saliva (1-2 mL) será coletada de cada participante para teste do status secretor
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Estabelecimento de enteroides derivados de células-tronco intestinais humanas
Prazo: Em média três meses
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Viabilidade de enteroides conforme determinado por microscopia
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Em média três meses
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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