Mini-Gut 모델에서 노로바이러스 감염의 숙주인자 규명
줄기세포 유래 인간 장 엔테로이드 모델에서 노로바이러스 감염과 관련된 숙주 인자에 대한 게놈 차원의 CRISPR 스크리닝
이 연구의 주요 목적은 노로바이러스 감염을 매개하는 숙주 세포 단백질 목록을 확립하는 것입니다.
노로바이러스는 안전하지 않은 식품으로 인한 설사병을 일으키는 가장 흔한 병원균 중 하나입니다. 또한 식중독으로 인한 어린이와 성인의 주요 사망 원인이기도 합니다. 노로바이러스는 단순한 식중독이 아닙니다. 최근 메타 분석에서 노로바이러스는 산발적 및 발병 환경 모두에서 급성 위장염(사람 간 전염 포함)의 모든 원인의 거의 1/5을 차지하며 모든 연령대에 영향을 미칩니다. 의심할 여지 없이 노로바이러스는 선진국과 개발도상국 모두에서 가장 중요한 공중 보건 문제입니다. 표적 개입을 위해서는 노로바이러스 병리생물학을 더 잘 이해하기 위한 연구 노력이 필요할 것입니다.
중동 호흡기 증후군 코로나바이러스에서 지카 바이러스에 이르기까지 바이러스 감염을 매개하는 중요한 숙주 요인을 식별하려는 노력은 항상 연구 우선 순위였습니다. 이러한 정보는 항바이러스 개입에서 잠재적인 치료 목표를 밝힐 것입니다. 노로바이러스 바이러스-숙주 상호작용 연구는 지난 20년 동안 견고한 세포 배양 모델의 부족으로 인해 방해를 받았습니다. 2016년 드디어 노로바이러스가 줄기세포 유래 3차원 인간 장과 같은 구조인 엔테로이드 또는 미니거트에서 배양에 성공했습니다.
본 연구에서는 참가자로부터 수집한 십이지장 생검에서 장 줄기세포를 분리한 후 미니장으로 분화할 예정입니다. 호스트 필수 및 제한 요인에 대한 게놈 차원의 유전자 스크리닝은 각각 녹아웃 CRISPR 및 기능 획득 CRISPR SAM에 의해 감염된 미니 내장에서 수행됩니다. 최종 후보자는 세포주에서 예비 기능 검증을 받게 됩니다. 이 데이터는 노로바이러스 감염에 대한 잠재적인 치료 목표에 대한 통찰력을 제공할 것입니다.
연구 개요
상세 설명
연구 설계 및 개요 - 이것은 실험실 기반 연구입니다. 연구자들은 노로바이러스 감염을 조절하는 숙주 세포 단백질 목록을 만들 계획입니다. 방법에는 두 가지 노로바이러스 유전자형의 감염에 대한 감염 모델 및 게놈 차원의 CRISPR 및 CRISPR SAM 유전자 스크리닝으로서 환자별 줄기 세포 유래 인간 장 엔테로이드의 확립이 포함됩니다.
***인간 장내장 모델의 확립***
- 십이지장 생검 및 타액 수집 - IRB 승인 사전 동의를 얻은 후, 항응고 또는 출혈 체질의 다른 원인이 있는 참가자와 같이 생검 샘플링에 대한 금기 사항 없이 상부 위장관 내시경 검사를 받는 각 참가자로부터 두 개의 십이지장 생검 샘플을 얻습니다. 생검 샘플은 얼음처럼 차가운 1xPBS에 담그고 추가 처리를 위해 30분 이내에 실험실로 즉시 이송됩니다. 또한 ELISA에 의한 분비자 상태 테스트를 위해 각 참가자로부터 타액(1-2mL)을 수집합니다.
- 소낭 줄기 세포의 분리 및 분화 - 도착 시 생검 샘플은 먼저 더 작은 조각으로 잘게 잘립니다. 장 음낭 세포는 1x 완전 킬레이트 용액(1xCCS) 및 EDTA 버퍼로 반복 세척 및 배양하여 분리됩니다. 선와 세포를 포함하는 상청액은 성장 인자(CMGF+)가 포함된 완전 배지(Wnt 3 및 Rspo-1 조정 배지, Noggin, A83, B27, EGF, N2, n-아세틸시스테인, 가스트린, 니코틴아미드 및 SB202190)를 포함하는 Matrigel에서 성장합니다. . 신진 선와는 분화 배지(CMGF+, Wnt 3 조건 배지, SB202190 및 니코틴아미드를 제외하고 감소된 양의 Rspo-1 조건 배지 및 Noggin을 가짐)에서 배양될 것입니다. 3차원 소화관과 같은 엔테로이드의 형성을 매일 모니터링합니다.
연구 유형
등록 (예상)
단계
- 해당 없음
연락처 및 위치
연구 장소
-
-
-
Hong Kong, 중국
- 모병
- Endoscopy Centre, Prince of Wales Hospital
-
연락하다:
- Chi-Wai Chan, PhD
- 전화번호: +852 35051523
- 이메일: martin.chan@cuhk.edu.hk
-
수석 연구원:
- Chi-Wai Chan, PhD
-
부수사관:
- Kay-Sheung Chan, MD
-
부수사관:
- Hei Wong, MBChB; DPhil
-
-
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
설명
포함 기준:
- 만 18세 이상 성인
- 중국 홍콩 샤틴 프린스 오브 웨일스 병원 내시경실에서 소화불량 증상으로 위장관 내시경을 받는 외래 환자
- 정보에 입각한 서면 동의를 제공할 수 있고 제공할 의향이 있습니다.
제외 기준:
- 출혈 위험이 증가할 수 있는 항응고제 및/또는 아스피린 사용
- 출혈 체질의 역사
- 생검 샘플링에 대한 금기 사항
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
- 주 목적: 기초_과학
- 할당: NA
- 중재 모델: 단일_그룹
- 마스킹: 없음
무기와 개입
참가자 그룹 / 팔 |
개입 / 치료 |
|---|---|
|
실험적: 장 줄기세포 유래 엔테로이드
십이지장 생검 샘플과 타액은 참가자로부터 수집한 다음 실험실에서 처리하여 장 줄기 세포 유래 엔테로이드를 생성합니다.
|
두 개의 십이지장 생검 샘플이 각 참가자로부터 수집됩니다.
분비 상태 테스트를 위해 각 참가자로부터 타액(1-2mL)을 수집합니다.
|
연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
|---|---|---|
|
인간 장 줄기세포 유래 엔테로이드의 확립
기간: 평균 3개월
|
현미경에 의해 결정된 엔테로이드의 생존력
|
평균 3개월
|
공동 작업자 및 조사자
수사관
- 수석 연구원: Chi-Wai Chan, PhD, Chinese University of Hong Kong
연구 기록 날짜
연구 주요 날짜
연구 시작 (실제)
기본 완료 (예상)
연구 완료 (예상)
연구 등록 날짜
최초 제출
QC 기준을 충족하는 최초 제출
처음 게시됨 (실제)
연구 기록 업데이트
마지막 업데이트 게시됨 (실제)
QC 기준을 충족하는 마지막 업데이트 제출
마지막으로 확인됨
추가 정보
이 연구와 관련된 용어
키워드
추가 관련 MeSH 약관
기타 연구 ID 번호
- MIC_CHAN_GRF_17_18_v1_20160930
개별 참가자 데이터(IPD) 계획
개별 참가자 데이터(IPD)를 공유할 계획입니까?
약물 및 장치 정보, 연구 문서
미국 FDA 규제 의약품 연구
미국 FDA 규제 기기 제품 연구
이 정보는 변경 없이 clinicaltrials.gov 웹사이트에서 직접 가져온 것입니다. 귀하의 연구 세부 정보를 변경, 제거 또는 업데이트하도록 요청하는 경우 register@clinicaltrials.gov. 문의하십시오. 변경 사항이 clinicaltrials.gov에 구현되는 즉시 저희 웹사이트에도 자동으로 업데이트됩니다. .