NiPGT-Aを検証するための多施設研究 (niPGT-A)
使用済み培養培地（niPGT-A）における胚異数性の非侵襲的着床前遺伝子検査を検証するための前向き、観察的、多施設、国際研究。
異常な染色体数、または異数性は、ヒト胚では一般的です。 流産の半分以上の原因であり、先天性先天性欠損症の主な原因です。 さらに、異数性も胚着床に影響を与える可能性があることが記載されています。 したがって、着床して健康な赤ちゃんに成長する可能性が最も高い胚を選択することは、生殖補助医療の分野で最も重要なステップの 1 つです。
次世代シーケンシング (NGS) などの遺伝子技術の最近の進歩により、異数性をより高い感度で検出できるようになりました。 子宮への移植前に胚から採取された栄養外胚葉生検へのこの技術の適用は、染色体状態の臨床的影響への洞察を提供しました。 胚が適切な数の染色体を持っていることを確認し、染色体の構造異常を探すために胚をスクリーニングするこのプロセスは、異数性の着床前遺伝子検査 (PGT-A) と呼ばれます。 これには、コストとリスクを追加する特定の機器と訓練を受けた人員が必要であるため、代替手段として非侵襲的技術が求められています。 これらの非侵襲的な手順は、移植または凍結の時点まで胚が培養される使用済み培養液を分析するいくつかのグループによって検討されています。 日常的に、この培地は胚培養が終了した後に廃棄されますが、胚の遺伝的負荷を表すことができる微量の胚性無細胞 DNA (cfDNA) が含まれていることが報告されています。 ただし、現時点では、研究全体で結果に大きなばらつきがあり、メディアと栄養外胚葉生検の間で一致する結果の割合は 3.5 ～ 85.7% です。
したがって、このプロジェクトの主な目的は、感度と特異性の高いレートを達成し、効果を減少させるために、培地の収集と分析の改善に基づいて、PGT-A (niPGT-A) の新しい非侵襲的方法を検証することです。胚性 cfDNA インプットの低さ、モザイク現象、母体汚染などのいくつかの本質的な問題の影響を受けます。
調査の概要
詳細な説明
ヒト胚は、他の種よりも異数性率が高い (20 ～ 80%)。 これらの異数性胚のかなりの割合が、胚盤胞段階に到達する能力を持っています。 ただし、異数性のタイプによっては、子宮に着床しないものもあれば、着床しても初期胚発生を行うことができないもの（流産）や、ごくまれに、特定の異常を伴う生児が生まれることがあります。 したがって、異数体胚を特定することが重要です。高齢母体年齢 (AMA)、再発性着床不全 (RIF)、または反復流産 (RM) の患者で、異数性染色体のリスクがある胚を特定することが重要です。
異数性の同定は、高齢母体年齢 (AMA)、反復性着床不全 (RIF)、反復流産 (RM) など、異数性のリスクが高い患者の胚で特に重要です。 したがって、正常な胚の形態と発生は染色体補体に依存しています。
PGT-A 技術は、単一細胞の完全な染色体内容を高い感度と特異性で分析しますが、遺伝分析用の胚性材料を得るには侵襲的な生検が必要です。 したがって、既存の侵襲的な検査方法に代わる非侵襲的な方法は、母体と胎児の安全性の改善に役立ちます。
最近、遺伝子検査の分野で多くの研究が進歩しています。 無細胞 DNA (cfDNA) は、使用済み胚培養培地で観察されています。 胚盤胞段階での cfDNA の起源は、正常な発達中に発生する可能性があるアポトーシス イベントに起因する可能性があります。 これにより、さまざまな研究グループが使用済み培地の分析を実施するようになりました。
単一遺伝子疾患に関連する特定の遺伝子 (MTHFR9、HBA1/HBA210、SRY11) を検出するために、さまざまな研究が最初に行われました。 最近、非侵襲的な PGT-A が開発され、一致率 (3.5%、59.1%、 および 85.7%、30.6%)。 使用済み培養培地に存在する DNA からの胚の染色体状態を、栄養外胚葉生検を使用した標準プロトコルに従って得られたものと比較しました。 報告された結果の違いは、異なる増幅および検出方法 (aCGH または NGS) が使用されたため、適用された異なる方法論に関連している可能性があります。 さらに、一致率は各研究で異なるように定義されました。つまり、使用済み培養液および栄養外胚葉生検における異数体の結果は、同じ異数体染色体を示さないにもかかわらず、一致していると見なすことができました。
非侵襲的アプローチの効率における培養条件の影響は、Hammond et al, (2016) によって調査されています。 彼らは、胚に曝露されていない 3 種類の市販の培地から得られた対照培地に一貫して非常に低いレベルの DNA 汚染 (ミトコンドリアおよび核 DNA) があることを発見しました。 観察された DNA 汚染の低いベースライン レベルは、培養培地のタンパク質サプリメントに由来すると考えられています。
最後に、PGT-A に対する 2 つの関連要因の影響がある可能性があります。顆粒膜細胞 (MCC) からの母体 DNA の混入とモザイク現象です。
IVF (体外受精) プログラムの結果を改善するには、着床の可能性が最も高い胚を特定する必要があります。 胚染色体分析により、着床成功率の高い正倍数体胚を選択することができます。
非侵襲的な PGT-A プロトコルの開発は、胚に対する生検の有害な影響を回避し、経済的コストを削減するこれらの正倍数体胚を識別するために使用される現在の方法論を改善します。
計算された最初の推定サンプルサイズは、30% のドロップアウト率を考慮して、3245 個の胚 (各胚は研究の対象と見なされます) でした。
データは、研究の 3 つの時点で Igenomix でグループ化され、分析されます。各センターの 25 個の胚が処理された後 (方法論の実装を評価するため)、サンプルの 30% が処理された後 (暫定的に結果を確認してください）、臨床結果のフォローアップを含む最終分析のために研究の最後に。
募集の 30% で実行された中間分析の後、合計サンプル サイズは、中間分析中に観察されたドロップアウト率に従って 5% のドロップアウト率を考慮して、2620 サンプルとして再計算されました。 Rubio et al., AJOG 2020 で公開された中間分析の結果。
研究の種類
入学 (実際)
連絡先と場所
研究場所
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California
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San Diego、California、アメリカ、92130
- San Diego Fertility Center
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Massachusetts
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Boston、Massachusetts、アメリカ、02109
- Boston IVF Fertility Clinic
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Washington
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Arlington、Washington、アメリカ、22203
- Dominion Fertility
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Buenos Aires、アルゼンチン、C1425DGQ
- Pregna Medicina Reproductiva
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Roma
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Rome、Roma、イタリア、00197
- Genera Rome
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Madrid、スペイン、28036
- ProcreaTec
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Porto Alegre
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Boa Vista、Porto Alegre、ブラジル、91330-002
- Nilo Frantz - Centro de Reprodução Humana
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Lima、ペルー、15036
- Inmater - Clínica de Fertilidad
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Cdmx
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Mexico City、Cdmx、メキシコ、05120
- NASCERE
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Istanbul、七面鳥、07720
- Bahçeci Group
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- -栄養外胚葉生検および医学的適応症のためのSETを伴うPGT-A症例、および研究の性質について正式に通知され、研究への参加を自発的に受け入れた後、EC / IRBによって承認された書面によるインフォームドコンセントフォームに署名した。
- ICSI (細胞質内精子注入)、IVF (体外受精)、またはカップルからの新鮮な卵母細胞で行われる ICSI/IVF は許可されています。
注: ドナー精子が許可されます。
- 新鮮な卵母細胞のみが許可されます。
- 新鮮および遅延胚移植が許可されています。 注: 遅延胚移植の場合、胚は常に胚盤胞生検後にガラス化する必要があります。
- 年齢: 20 ～ 44 歳 (両方を含む)。
除外基準:
- カップルのメンバーの既知の異常な核型。
- 単一遺伝子疾患の着床前遺伝子検査 (PGT-M) または構造再編成の着床前遺伝子検査 (PGT-SR) のケースは除外されます。
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
- 観測モデル：他の
- 時間の展望：見込みのある
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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PGT-A / niPGT-Aを受けている胚
20 歳から 44 歳までの体外受精患者からの胚で、任意の医学的適応症のために PGT-A を受けており、独自の卵母細胞または卵子提供サイクルがあり、単一胚移植 (SET) が行われている
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PGT-A は、通常の臨床診療に従って実施されます。胚盤胞からの栄養外胚葉生検サンプルを NGS で分析し、数値染色体異常をスクリーニングします。
胚がガラス化するまで培養される使用済み培養培地を分析する、胚の異数性に関する非侵襲的着床前遺伝子検査。
この培地には、胚の遺伝的負荷を表す可能性のある微量の胚無細胞 DNA (cfDNA) が含まれています。
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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胚の染色体の状態
時間枠：胚の発育には6〜7日かかります
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生検サンプルと使用済み胚盤胞培地サンプルの分析結果間の染色体の数と構造の一致。
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胚の発育には6〜7日かかります
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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出生率
時間枠：40週間
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胚移植ごとに生まれる赤ちゃんの数
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40週間
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妊娠率
時間枠：20週間
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胚移植あたりの妊娠数
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20週間
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臨床的流産率
時間枠：20週間
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総妊娠数あたりの臨床的流産数
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20週間
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受胎産物の分析 (POC)
時間枠：最長20週間
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自然流産後に子宮内に残る胎盤および/または胎児の組織
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最長20週間
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協力者と研究者
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捜査官
- スタディチェア：Carlos Simón, MD PhD、Igenomix
- 主任研究者：Carmen Rubio, BSc PhD、Igenomix
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (実際)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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