Estudo multicêntrico para validar o niPGT-A (niPGT-A)

Embriões humanos têm taxas de aneuploidia mais altas (20-80%) do que outras espécies. Uma proporção considerável desses embriões aneuplóides tem a capacidade de atingir o estágio de blastocisto. No entanto, dependendo do tipo de aneuploidia, algumas não conseguem se implantar no útero, enquanto outras se implantam, mas não conseguem realizar o desenvolvimento embrionário inicial (aborto espontâneo) ou, muito raramente, resultam em crianças nascidas vivas com anormalidades específicas. Portanto, é importante identificar embriões aneuplóides É importante identificar embriões com risco de cromossomos aneuplóides em pacientes com idade materna avançada (AMA), falha recorrente de implantação (RIF) ou aborto recorrente (RM).

A identificação de aneuploidias é especialmente importante em embriões de pacientes com maior risco de aneuploidia, como aqueles com idade materna avançada (AMA), falha recorrente de implantação (RIF) ou aborto recorrente (RM). Portanto, a morfologia e o desenvolvimento normal do embrião dependem do complemento cromossômico.

A técnica PGT-A analisa todo o conteúdo cromossômico de uma única célula com alta sensibilidade e especificidade, mas requer uma biópsia invasiva para obter material embrionário para a análise genética. Assim, métodos não invasivos para substituir o método de teste invasivo existente seriam úteis na melhoria da segurança materna e fetal.

Recentemente, houve muitos avanços na pesquisa no campo dos testes genéticos. DNA livre de células (cfDNA) foi observado em meios de cultura de embriões gastos. A origem do cfDNA no estágio de blastocisto pode ser atribuída a eventos apoptóticos que podem ocorrer durante o desenvolvimento normal. Isso tem incentivado diferentes grupos de pesquisa a realizar análises de meios de cultura gastos.

Vários estudos foram inicialmente realizados para detectar genes específicos associados a distúrbios monogênicos (MTHFR9, HBA1/HBA210, SRY11). Recentemente, foi desenvolvido o PGT-A não invasivo, com resultados altamente variáveis ​​na taxa de concordância (3,5%,59,1%, e 85,7%, 30,6%). O estado cromossômico do embrião a partir do DNA presente no meio de cultura gasto foi comparado ao obtido seguindo o protocolo padrão usando biópsia de trofectoderma. A diferença nos resultados relatados pode estar relacionada às diferentes metodologias aplicadas, pois diferentes métodos de amplificação e detecção -aCGH ou NGS- foram usados. Além disso, as taxas de concordância foram definidas de forma diferente em cada estudo, ou seja, resultados aneuploides em meio de cultura usado e biópsia de trofectoderme podem ser considerados concordantes, apesar de não mostrarem os mesmos cromossomos aneuploides.

O impacto das condições de cultura na eficiência da abordagem não invasiva foi investigado por Hammond et al, (2016). Eles descobriram que havia consistentemente um nível muito baixo de contaminação de DNA (DNA mitocondrial e nuclear) em controles de mídia, de três tipos diferentes de mídia comercial, que não haviam sido expostos a embriões. Acredita-se que o baixo nível basal de contaminação de DNA observado tenha origem no suplemento de proteína do meio de cultura.

Finalmente, pode haver influência de dois fatores relevantes no PGT-A: contaminação com DNA materno de células da granulosa (MCC) e mosaicismo.

Para melhorar os resultados dos programas de FIV (Fertilização In Vitro), é necessário identificar o embrião com maior potencial de implantação. A análise cromossômica embrionária permite a seleção de embriões euploides, que apresentam maior taxa de sucesso de implantação.

O desenvolvimento de um protocolo PGT-A não invasivo irá melhorar as metodologias atuais usadas para identificar esses embriões euploides evitando o efeito prejudicial da biópsia sobre o embrião e diminuindo o custo econômico.

O tamanho inicial estimado da amostra calculada foi de 3.245 embriões (cada embrião é considerado um sujeito do estudo), considerando uma taxa de abandono de 30%.

Os dados serão agrupados e analisados ​​na Igenomix em três momentos do estudo: uma vez processados ​​25 embriões de cada centro (para avaliar a implementação da metodologia), após o processamento de 30% das amostras (como ínterim para verificar os resultados) e no final do estudo para a análise final, incluindo o acompanhamento do resultado clínico.

Após a análise interina realizada a 30% do recrutamento, o tamanho amostral total foi recalculado para 2.620 amostras, considerando uma taxa de abandono de 5% de acordo com a taxa de desistência observada durante a análise interina. Resultados da análise intermediária publicados em Rubio et al., AJOG 2020.