Multi-center studie om niPGT-A te valideren (niPGT-A)

Menselijke embryo's hebben hogere aneuploïdiepercentages (20-80%) dan andere soorten. Een aanzienlijk deel van deze aneuploïde embryo's heeft het vermogen om het blastocyststadium te bereiken. Afhankelijk van het type aneuploïdie zullen sommige echter niet in de baarmoeder worden geïmplanteerd, terwijl andere wel zullen worden geïmplanteerd, maar geen vroege embryonale ontwikkeling (miskraam) kunnen uitvoeren, of in zeer zeldzame gevallen resulteren in levendgeboren kinderen met specifieke afwijkingen. Het is daarom belangrijk om aneuploïde embryo's te identificeren. Het is belangrijk om embryo's te identificeren die risico lopen op aneuploïde chromosomen bij patiënten met gevorderde maternale leeftijd (AMA), herhaald implantatiefalen (RIF) of herhaalde miskraam (RM).

De identificatie van aneuploïdieën is vooral belangrijk bij embryo's van patiënten met een hoger risico op aneuploïdie, zoals patiënten met gevorderde maternale leeftijd (AMA), herhaald implantatiefalen (RIF) of herhaalde miskraam (RM). Daarom zijn de normale morfologie en ontwikkeling van het embryo afhankelijk van het chromosomale complement.

PGT-A-techniek analyseert de volledige chromosoominhoud van een enkele cel met hoge gevoeligheid en specificiteit, maar vereist een invasieve biopsie om embryonaal materiaal te verkrijgen voor de genetische analyse. Niet-invasieve methoden ter vervanging van de bestaande invasieve testmethode zouden dus nuttig zijn bij het verbeteren van de veiligheid van moeder en foetus.

De laatste tijd zijn er veel onderzoeksvooruitgangen geboekt op het gebied van genetische tests. Celvrij DNA (cfDNA) is waargenomen in gebruikte embryocultuurmedia. De oorsprong van het cfDNA in het blastocyststadium kan worden toegeschreven aan apoptotische gebeurtenissen die kunnen optreden tijdens normale ontwikkeling. Dit heeft verschillende onderzoeksgroepen aangemoedigd om analyses uit te voeren van gebruikte kweekmedia.

In eerste instantie werden verschillende onderzoeken uitgevoerd om specifieke genen op te sporen die geassocieerd zijn met monogene aandoeningen (MTHFR9, HBA1/HBA210, SRY11). Onlangs is niet-invasieve PGT-A ontwikkeld, met zeer variabele resultaten op het concordantiepercentage (3,5%, 59,1%, en 85,7%, 30,6%). De chromosomale status van het embryo van het DNA dat aanwezig was in het verbruikte kweekmedium werd vergeleken met die verkregen volgens het standaardprotocol met behulp van trophectodermbiopsie. Het verschil in de gerapporteerde resultaten kan verband houden met de verschillende toegepaste methodologieën omdat verschillende amplificatie- en detectiemethoden -aCGH of NGS- werden gebruikt. Bovendien werden de concordantiepercentages in elk onderzoek anders gedefinieerd, d.w.z. aneuploïde resultaten in gebruikte kweekmedia en trophectodermbiopsie konden als concordant worden beschouwd ondanks het feit dat ze niet dezelfde aneuploïde chromosomen vertoonden.

De impact van cultuuromstandigheden op de efficiëntie van de niet-invasieve benadering is onderzocht door Hammond et al, (2016). Ze ontdekten dat er consequent een zeer laag niveau van DNA-besmetting (mitochondriaal en nucleair DNA) was in mediacontroles, afkomstig van drie verschillende soorten commerciële media, die niet waren blootgesteld aan embryo's. Aangenomen wordt dat het lage basislijnniveau van DNA-besmetting afkomstig is van het eiwitsupplement van de kweekmedia.

Ten slotte zou er een invloed kunnen zijn van twee relevante factoren op PGT-A: besmetting met maternaal DNA uit granulosacellen (MCC) en mozaïekvorming.

Om de resultaten van IVF-programma's (in-vitrofertilisatie) te verbeteren, moet het embryo met het hoogste implantatiepotentieel worden geïdentificeerd. Embryo-chromosomale analyse maakt de selectie van euploïde embryo's mogelijk, die een hoger slagingspercentage hebben bij implantatie.

De ontwikkeling van een niet-invasief PGT-A-protocol zal de huidige methodologieën verbeteren die worden gebruikt om die euploïde embryo's te identificeren, waarbij het nadelige effect van de biopsie op het embryo wordt vermeden en de economische kosten worden verlaagd.

De aanvankelijk berekende geschatte steekproefomvang was 3245 embryo's (elk embryo wordt beschouwd als een proefpersoon in het onderzoek), rekening houdend met een uitvalpercentage van 30%.

De gegevens zullen worden gegroepeerd en geanalyseerd bij Igenomix op drie tijdstippen van de studie: zodra 25 embryo's van elk centrum zijn verwerkt (om de implementatie van de methodologie te beoordelen), nadat de 30% van de monsters is verwerkt (als tussentijdse controleer de resultaten) en aan het einde van de studie voor de definitieve analyse inclusief de follow-up van de klinische uitkomst.

Na de tussentijdse analyse uitgevoerd op 30% van de rekrutering, is de totale steekproefomvang herberekend naar 2620 steekproeven, rekening houdend met een uitvalpercentage van 5% volgens het uitvalpercentage waargenomen tijdens de tussentijdse analyse. Resultaten van de tussentijdse analyse gepubliceerd in Rubio et al., AJOG 2020.