Estudio multicéntrico para validar niPGT-A (niPGT-A)

Los embriones humanos tienen tasas de aneuploidía más altas (20-80%) que otras especies. Una proporción considerable de estos embriones aneuploides tienen la capacidad de alcanzar el estadio de blastocisto. Sin embargo, según el tipo de aneuploidía, algunas no se implantarán en el útero, mientras que otras se implantarán pero no podrán llevar a cabo el desarrollo embrionario temprano (aborto espontáneo) o, muy raramente, darán como resultado niños vivos con anomalías específicas. Por lo tanto, es importante identificar los embriones aneuploides. Es importante identificar los embriones con riesgo de cromosomas aneuploides en pacientes con edad materna avanzada (AMA), falla de implantación recurrente (RIF) o aborto espontáneo recurrente (RM).

La identificación de aneuploidías es especialmente importante en embriones de pacientes con mayor riesgo de aneuploidías, como aquellos con edad materna avanzada (AMA), falla de implantación recurrente (RIF) o aborto espontáneo recurrente (RM). Por lo tanto, la morfología y el desarrollo normal del embrión dependen del complemento cromosómico.

La técnica PGT-A analiza el contenido cromosómico completo de una sola célula con alta sensibilidad y especificidad, pero requiere una biopsia invasiva para obtener material embrionario para el análisis genético. Por lo tanto, los métodos no invasivos para reemplazar el método de prueba invasivo existente serían útiles para mejorar la seguridad materna y fetal.

Recientemente, ha habido muchos avances en la investigación en el campo de las pruebas genéticas. Se ha observado ADN libre de células (cfDNA) en medios de cultivo de embriones gastados. El origen del cfDNA en la etapa de blastocisto podría atribuirse a eventos apoptóticos que pueden ocurrir durante el desarrollo normal. Esto ha animado a diferentes grupos de investigación a realizar análisis de medios de cultivo gastados.

Inicialmente se realizaron varios estudios para detectar genes específicos asociados a trastornos monogénicos (MTHFR9, HBA1/HBA210, SRY11). Recientemente se ha desarrollado el PGT-A no invasivo, con resultados muy variables en la tasa de concordancia (3,5%, 59,1%, y 85,7%, 30,6%). El estado cromosómico del embrión a partir del ADN presente en el medio de cultivo gastado se comparó con el obtenido siguiendo el protocolo estándar mediante biopsia de trofoectodermo. La diferencia en los resultados reportados puede estar relacionada con las diferentes metodologías aplicadas debido a que se utilizaron diferentes métodos de amplificación y detección -aCGH o NGS-. Además, las tasas de concordancia se definieron de manera diferente en cada estudio, es decir, los resultados aneuploides en los medios de cultivo gastados y la biopsia de trofoectodermo podrían considerarse concordantes a pesar de no mostrar los mismos cromosomas aneuploides.

El impacto de las condiciones de cultivo en la eficiencia del enfoque no invasivo ha sido investigado por Hammond et al, (2016). Descubrieron que había constantemente un nivel muy bajo de contaminación de ADN (ADN mitocondrial y nuclear) en los controles de los medios, de tres tipos diferentes de medios comerciales, que no habían estado expuestos a embriones. Se cree que el bajo nivel inicial de contaminación del ADN observado se origina en el suplemento proteico de los medios de cultivo.

Finalmente, podría haber influencia de dos factores relevantes en el PGT-A: la contaminación con ADN materno de células de la granulosa (MCC) y el mosaicismo.

Para mejorar los resultados de los programas de FIV (Fecundación In vitro), es necesario identificar el embrión con mayor potencial de implantación. El análisis cromosómico de embriones permite la selección de embriones euploides, que tienen una mayor tasa de éxito de implantación.

El desarrollo de un protocolo PGT-A no invasivo mejorará las metodologías actuales utilizadas para identificar aquellos embriones euploides evitando el efecto perjudicial de la biopsia sobre el embrión y disminuyendo el coste económico.

El tamaño de muestra estimado inicial calculado fue de 3245 embriones (cada embrión es considerado como sujeto en el estudio), considerando una tasa de abandono del 30%.

Los datos se agruparán y analizarán en Igenomix en tres momentos del estudio: una vez que se hayan procesado 25 embriones de cada centro (para evaluar la implementación de la metodología), después de que se haya procesado el 30% de las muestras (como un paso intermedio para comprobar los resultados) y al final del estudio para el análisis final, incluido el seguimiento del resultado clínico.

Después del análisis intermedio realizado al 30 % del reclutamiento, el tamaño total de la muestra se ha vuelto a calcular en 2620 muestras, considerando una tasa de abandono del 5 % según la tasa de abandono observada durante el análisis intermedio. Resultados del análisis intermedio publicado en Rubio et al., AJOG 2020.