Monikeskustutkimus niPGT-A:n validoimiseksi (niPGT-A)
Prospektiivinen, havainnollinen, monikeskus, kansainvälinen tutkimus ei-invasiivisen preimplantaatiogeenitestin validoimiseksi alkion aneuploidia varten käytetyssä elatusaineessa (niPGT-A).
Epänormaali kromosomiluku tai aneuploidia on yleistä ihmisalkioissa. Se aiheuttaa yli puolet kaikista keskenmenoista, ja se on johtava synnynnäisten epämuodostumien syy. Lisäksi on kuvattu, että aneuploidia voi vaikuttaa myös alkion implantaatioon. Siksi sellaisten alkioiden valitseminen, joilla on parhaat mahdollisuudet istuttaa ja kasvaa terveeksi vauvaksi, on yksi tärkeimmistä vaiheista avusteisen lisääntymisen alalla.
Viimeaikaiset kehityssuunnat geneettisissä teknologioissa, kuten seuraavan sukupolven sekvensointi (NGS), ovat mahdollistaneet aneuploidian havaitsemisen entistä herkemmin. Tämän tekniikan soveltaminen trofektodermibiopsioihin, jotka on otettu alkioista ennen niiden siirtämistä kohtuun, on antanut käsityksen kromosomaalisen tilan kliinisistä vaikutuksista. Tätä alkioiden seulontaprosessia, jolla varmistetaan, että niillä on oikea määrä kromosomeja, ja etsitään mahdollisia rakenteellisia poikkeavuuksia kromosomeista, kutsutaan preimplantaatiogeenitestiksi aneuploidialle (PGT-A). Se vaatii erityisiä laitteita ja koulutettua henkilöstöä, mikä lisää kustannuksia ja riskejä, joten vaihtoehtona etsitään ei-invasiivisia tekniikoita. Jotkut ryhmät ovat tutkineet näitä ei-invasiivisia menetelmiä, jotka analysoivat käytettyä viljelyalustaa, jossa alkiota inkuboidaan siirto- tai pakastushetkeen asti. Päivittäisessä rutiinissa tämä elatusaine heitetään pois alkioviljelyn päätyttyä, mutta sen on raportoitu sisältävän jälkiä alkion soluttomasta DNA:sta (cfDNA), joka voi edustaa alkion geneettistä kuormitusta. Tällä hetkellä tutkimustuloksissa on kuitenkin suurta vaihtelua, ja yhteensopivien tulosten prosenttiosuus alustan ja trofektodermibiopsian välillä vaihtelee välillä 3,5 - 85,7 %.
Siten tämän projektin päätavoitteena on validoida uusi ei-invasiivinen menetelmä PGT-A:lle (niPGT-A), joka perustuu viljelyalustojen parannettuun keräämiseen ja analysointiin, jotta saavutetaan korkeampi herkkyys ja spesifisyys ja vähennetään vaikutusta. Joistakin sisäisistä vaikeuksista, kuten alhainen alkion cfDNA-syöttö, mosaiikki ja äidin kontaminaatio.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Ihmisalkioiden aneuploidisuusaste on korkeampi (20-80 %) kuin muilla lajeille. Huomattavalla osalla näistä aneuploidisista alkioista on kyky saavuttaa blastokystivaihe. Aneuploidian tyypistä riippuen jotkut eivät kuitenkaan implantoitu kohtuun, kun taas toiset implantoituvat, mutta eivät pysty suorittamaan varhaista alkion kehitystä (keskenmeno), tai erittäin harvoin johtavat elävänä syntyneisiin lapsiin, joilla on tiettyjä poikkeavuuksia. Siksi on tärkeää tunnistaa aneuploidiset alkiot On tärkeää tunnistaa alkiot, joilla on riski saada aneuploidisia kromosomeja potilailla, joilla on edennyt äidin ikä (AMA), toistuva implantaatiohäiriö (RIF) tai toistuva keskenmeno (RM).
Aneuploidioiden tunnistaminen on erityisen tärkeää sellaisten potilaiden alkioissa, joilla on korkeampi aneuploidiariski, kuten potilailla, joilla on edennyt äidin ikä (AMA), toistuva implantaation epäonnistuminen (RIF) tai toistuva keskenmeno (RM). Siksi normaali alkion morfologia ja kehitys ovat riippuvaisia kromosomaalisesta komplementista.
PGT-A-tekniikka analysoi yksittäisen solun täyden kromosomisisällön korkealla herkkyydellä ja spesifisyydellä, mutta vaatii invasiivisen biopsian alkiomateriaalin saamiseksi geneettistä analyysiä varten. Siten ei-invasiiviset menetelmät nykyisen invasiivisen testausmenetelmän korvaamiseksi olisivat hyödyllisiä äidin ja sikiön turvallisuuden parantamisessa.
Viime aikoina geenitestauksen alalla on tapahtunut monia tutkimusedistuksia. Solutonta DNA:ta (cfDNA) on havaittu käytetyissä alkioviljelyalustassa. CfDNA:n alkuperä blastokystivaiheessa voidaan katsoa johtuvan apoptoottisista tapahtumista, joita voi esiintyä normaalin kehityksen aikana. Tämä on kannustanut eri tutkimusryhmiä analysoimaan käytettyjä viljelyalustoja.
Monogeenisiin sairauksiin (MTHFR9, HBA1/HBA210, SRY11) liittyvien spesifisten geenien havaitsemiseksi suoritettiin alun perin erilaisia tutkimuksia. Äskettäin on kehitetty ei-invasiivinen PGT-A, jolla on erittäin vaihtelevia tuloksia yhteensopivuussuhteessa (3,5 %, 59,1 %, ja 85,7 %, 30,6 %). Alkion kromosomaalista tilaa käytetyssä elatusaineessa olevasta DNA:sta verrattiin standardiprotokollan mukaisesti saatuun trofektodermibiopsiaa käyttäen. Raportoitujen tulosten ero voi liittyä erilaisiin käytettyihin menetelmiin, koska käytettiin erilaisia amplifikaatio- ja detektiomenetelmiä -aCGH tai NGS-. Lisäksi yhteensopivuussuhteet määriteltiin eri tavalla kussakin tutkimuksessa, eli käytetyn viljelyalustan ja trofektodermibiopsian aneuploidisia tuloksia voitiin pitää yhdenmukaisina huolimatta siitä, että ne eivät osoittaneet samoja aneuploidisia kromosomeja.
Viljelyolosuhteiden vaikutusta ei-invasiivisen lähestymistavan tehokkuuteen ovat tutkineet Hammond et al, (2016). He havaitsivat, että DNA-kontaminaation taso (mitokondrioiden ja tuman DNA) oli johdonmukaisesti erittäin alhainen elatusainekontrollissa, joka oli peräisin kolmesta erityyppisestä kaupallisesta alustasta, jotka eivät olleet altistuneet alkioille. Havaitun DNA-kontaminaation alhaisen perustason tason uskotaan olevan peräisin viljelyalustan proteiinilisästä.
Lopuksi, kaksi olennaista tekijää voi vaikuttaa PGT-A:han: kontaminaatio äidin DNA:lla granulosasoluista (MCC) ja mosaiikki.
IVF (in vitro Fertilization) -ohjelmien tulosten parantamiseksi on tarpeen tunnistaa alkio, jolla on korkein implantaatiopotentiaali. Alkion kromosomianalyysi mahdollistaa euploidisten alkioiden valinnan, joilla on korkeampi implantaation onnistumisprosentti.
Ei-invasiivisen PGT-A-protokollan kehittäminen parantaa nykyisiä menetelmiä, joita käytetään näiden euploidisten alkioiden tunnistamiseen. Näin vältetään biopsian haitallinen vaikutus alkioon ja alennetaan taloudellisia kustannuksia.
Alkuperäinen arvioitu otoskoko oli 3245 alkiota (jokaista alkiota pidetään tutkimuksen kohteena), kun otetaan huomioon 30 %:n keskeyttämisaste.
Tiedot ryhmitellään ja analysoidaan Igenomixissa tutkimuksen kolmena ajankohtana: kun kustakin keskuksesta on käsitelty 25 alkiota (metodologian toteutuksen arvioimiseksi), sen jälkeen, kun 30 % näytteistä on käsitelty (väliaikana tarkista tulokset) ja tutkimuksen lopussa lopullista analyysiä varten, mukaan lukien kliinisen tuloksen seuranta.
30 %:lla rekrytoinneista tehdyn välianalyysin jälkeen kokonaisotoskoko on laskettu uudelleen 2620 näytteeksi, kun otetaan huomioon 5 %:n keskeyttämisaste välianalyysin aikana havaitun keskeytysasteen mukaan. Rubio et al., AJOG 2020 -julkaisussa julkaistun välianalyysin tulokset.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Buenos Aires, Argentiina, C1425DGQ
- Pregna Medicina Reproductiva
-
-
-
-
Porto Alegre
-
Boa Vista, Porto Alegre, Brasilia, 91330-002
- Nilo Frantz - Centro de Reprodução Humana
-
-
-
-
-
Madrid, Espanja, 28036
- ProcreaTec
-
-
-
-
Roma
-
Rome, Roma, Italia, 00197
- Genera Rome
-
-
-
-
Cdmx
-
Mexico City, Cdmx, Meksiko, 05120
- NASCERE
-
-
-
-
-
Lima, Peru, 15036
- Inmater - Clínica de Fertilidad
-
-
-
-
-
Istanbul, Turkki, 07720
- Bahçeci Group
-
-
-
-
California
-
San Diego, California, Yhdysvallat, 92130
- San Diego Fertility Center
-
-
Massachusetts
-
Boston, Massachusetts, Yhdysvallat, 02109
- Boston IVF Fertility Clinic
-
-
Washington
-
Arlington, Washington, Yhdysvallat, 22203
- Dominion Fertility
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- PGT-A-tapaukset, joissa on trofektodermibiopsia ja SET kaikkia lääketieteellisiä käyttöaiheita varten ja allekirjoitettu kirjallinen tietoinen suostumuslomake, jonka EC/IRB on hyväksynyt sen jälkeen, kun heille on ilmoitettu tutkimuksen luonteesta ja vapaaehtoisesti hyväksytty osallistumaan tutkimukseen.
- ICSI (intrasytoplasminen siittiöinjektio), IVF (in vitro -hedelmöitys) tai ICSI/IVF, joka suoritetaan pariskuntien tuoreissa munasoluissa, ovat sallittuja.
Huomautus: Luovuttajan sperma on sallittu.
- Vain tuoreet munasolut ovat sallittuja.
- Tuore ja viivästetty alkionsiirto on sallittu. Huomautus: Jos alkionsiirto on viivästynyt, alkiot on lasitettava aina blastokystabiopsian jälkeen.
- Ikä: 20-44 vuotta (molemmat mukana).
Poissulkemiskriteerit:
- Tunnettu epänormaali karyotyyppi parin jäsenellä.
- Monogeenisten sairauksien preimplantaatiogeenitestaus (PGT-M) tai preimplantaatiogeeninen testaus rakenteellisten uudelleenjärjestelyjen varalta (PGT-SR) ei kuulu tapauksiin.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Havaintomallit: Muut
- Aikanäkymät: Tulevaisuuden
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Alkiot, joille tehdään PGT-A / niPGT-A
Alkiot 20–44-vuotiaista IVF-potilaista, joille tehdään PGT-A missä tahansa lääketieteellisessä indikaatiossa, joilla on omat munasolujen tai munasolujen luovutussyklit ja yksittäinen alkionsiirto (SET)
|
PGT-A suoritetaan noudattaen tavanomaista kliinistä käytäntöä: Blastokystistä otetut trofektodermibiopsianäytteet analysoidaan NGS:llä numeeristen kromosomipoikkeavuuksien seulomiseksi.
Ei-invasiivinen preimplantaatiogeenitesti alkion aneuploidia varten, jossa analysoidaan käytetty elatusaine, jossa alkiota inkuboidaan lasitushetkeen asti.
Tämä väliaine sisältää jälkiä alkion soluttomasta DNA:sta (cfDNA), joka voi edustaa alkion geneettistä kuormaa.
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Alkioiden kromosomitila
Aikaikkuna: 6-7 päivää alkion kehitystä
|
Kromosomien lukumäärän ja rakenteen vastaavuus biopsian ja käytettyjen blastokystaelatusainenäytteiden analyysitulosten välillä.
|
6-7 päivää alkion kehitystä
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Elävä syntyvyys
Aikaikkuna: 40 viikkoa
|
Syntyneiden vauvojen määrä alkionsiirtoa kohden
|
40 viikkoa
|
|
Raskausaste
Aikaikkuna: 20 viikkoa
|
Raskauksien määrä alkionsiirtoa kohden
|
20 viikkoa
|
|
Kliinisen keskenmenon määrä
Aikaikkuna: 20 viikkoa
|
Kliinisten keskenmenojen määrä raskauksien kokonaismäärää kohti
|
20 viikkoa
|
|
Hedelmöitystuotteiden analyysi (POC)
Aikaikkuna: Jopa 20 viikkoa
|
Istukan ja/tai sikiön kudos, joka jää kohtuun spontaanin raskauden menetyksen jälkeen
|
Jopa 20 viikkoa
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Tutkijat
- Opintojen puheenjohtaja: Carlos Simón, MD PhD, Igenomix
- Päätutkija: Carmen Rubio, BSc PhD, Igenomix
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- IGX1-NIP-CS-18-02-SUB1
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .