循環線維細胞 - 成人の急性虫垂炎の診断における新規かつ正確なバイオマーカー

急性虫垂炎 (AA) は、最も一般的な腹部の緊急事態です。 有病率が高いにもかかわらず、虫垂炎の診断は依然として課題です。 臨床症状は非典型的であることが多く、症状は他の多くの状態と重複することがよくあります。 これと相まって、迅速な診断に到達できないと、有害な結果が生じる可能性があります。

循環線維細胞 (CF) は、1994 年に Richard Bucala によって最初に記述されました。 骨髄由来の造血細胞です。 それらは単球画分を循環し、骨髄線維細胞、線維芽細胞、および脂肪細胞（他の細胞タイプの中でも）に分化できます。 それらは、炎症および治癒過程、ならびに線維症の発症において重要な役割を果たしています。

今日まで、急性虫垂炎におけるCFの役割を調べた研究はありません。 したがって、この臨床試験の目的は、（1）CFが急性虫垂炎で変化するかどうかを判断すること、（2）CRP、WCC、好中球、リンパ球、好中球-リンパ球比（NLR）、単球との診断精度を評価および比較することでした、好塩基球および好酸球、および（3）AAの診断において最も信頼できる予測因子を決定する。

(1) 組織学的に確認された急性虫垂炎 (AA) 患者の循環線維細胞レベル (CF) を決定するため、および (2) 成人の AA の診断における循環 CF レベルの感度と特異性を決定するために、前向きコホート研究が行われました。 (年齢 16 歳以上) リムリック大学病院で、右腸骨窩の痛みを急性に訴えています。 虫垂炎の診断は、虫垂切除後の組織病理学的評価によって確認された。

退院時の最終診断後、組織病理学の結果に基づいて、患者を 3 つのコホートに分けました。 (1) 虫垂切除術を受け、組織学的評価で正常な虫垂を有していたRIFP患者、すなわち、組織学的に証明された正常虫垂群(HPNG)。 (2) 虫垂切除術を受け、組織学的評価で炎症を起こした虫垂を有するRIFP患者、すなわち組織学的に証明された虫垂炎群(HPAG)。 (3)退院時に虫垂炎以外の代替診断を受けたRIFP患者、すなわち代替診断群(ADG)。 別のコホートが (4) 健康なコントロールとして追加されました。

収集されたデータには、入院日、患者の性別、年齢、症状の発現、症状の持続時間、CF レベル、術前の WCC およびその差異 (好中球、リンパ球、好中球-リンパ球比 (NLR)、単球、好塩基球および好酸球の数)、CRP、組織学的評価に基づく最終臨床診断、手術および術後診断。

末梢静脈サンプルは、コホート 1、2、および 3 の患者 (n= 80) および健常対照者 (n=15) から得られました。 ヘパリン処理した静脈血の 10 mL サンプルを、上肢の末梢静脈穿刺によって 1 回採取しました。 サンプルは、ヘパリン ナトリウム (EDTA) バキュテナー チューブに収集され、3 時間以内に実験室に移されました。 次いで、試料を処理して、密度勾配遠心分離（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ウィックロー、アイルランド）を使用してバフィーコート層を単離した。 得られた末梢血単核細胞を続いてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、凍結培地（５０％ウシ胎児血清、４０％ＲＰＭＩ培地および１０％ジメチルスルホキシド）に再懸濁した後、１－２の極低温バイアルに移した。 mlのアリコート。 最後に、フローサイトメトリーの処理までサンプルを極低温温度制御速度コンテナーで-80 °C に冷却しました。 密度勾配遠心分離を使用した白血球の分離後、1×106個の細胞をフローサイトメトリー緩衝液(10%ウマ血清、0.1%アジ化ナトリウムおよび25 mM HEPESを添加したRPMI培地)に再懸濁しました。 BD Cytofix/Cytoperm 溶液 (BD Biosciences, Oxford, England) を使用して細胞を固定および透過処理し、マウス抗ヒト コラーゲン I 抗体 (Millipore, Cork, Ireland, Product code MAB3391) によるコラーゲン I の細胞内染色の前にブロックしました。その後、Alexa-Fluor 488 ヤギ抗マウス二次抗体 (Jackson ImmunoResearch Europe、サフォーク、イングランド、製品コード 115-545-146) で染色しました。 次いで、ＰｅｒＣＰ抗ヒトＣＤ４５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｌｏｎｄｏｎ、Ｅｎｇｌａｎｄ）を使用して、細胞を細胞表面抗原ＣＤ４５について染色した。 その後、フローサイトメーター（BD FACSVerse）でのその後の分析の前に、細胞をPBSに再懸濁しました。 すべての分析は、BD FACSuite v1.0.5 (BD Biosciences) を使用して BD FACSVerse (BD Biosciences) で行われました。 線維細胞レベルは、全白血球集団のパーセンテージとして表示されました。

IBM SPSS for Mac OSX バージョン 25.0 を使用してデータ分析を実行しました。 データは、必要に応じて、平均と標準偏差、または中央値と四分位範囲として提示されました。 変数の分布は、ヒストグラム、Q-Q プロット、およびボックス プロットによって評価されました。 分散分析 (One-Way ANOVA) を使用して、異なる独立したグループ間を比較しました。 クラスカル・ウォリス検定を使用して、バイオマーカーと異なるグループ (HPNG vs. HPAG vs. ADG) を比較し、サブグループ分析ではペアワイズ比較を行い、0.05 未満の P 値を統計的に有意と見なしました。 受信者動作特性 (ROC) 曲線を使用して、CF、WCC、CRP、好中球、NLR、および単球の診断精度を特徴付け、比較しました。 多項ロジスティック回帰分析を使用して、AA の独立した予測因子を評価しました。