El fibrocito circulante: un biomarcador novedoso y preciso en el diagnóstico de apendicitis aguda en adultos

La apendicitis aguda (AA) es la urgencia abdominal más frecuente. A pesar de su alta prevalencia, el diagnóstico de apendicitis sigue siendo un desafío. La presentación clínica suele ser atípica y los síntomas a menudo se superponen con muchas otras condiciones. Junto con esto, la falta de llegar a un diagnóstico rápido puede dar lugar a resultados adversos.

Los fibrocitos circulantes (FC) fueron descritos por primera vez en 1994 por Richard Bucala. Son células hematopoyéticas derivadas de la médula ósea. Circulan en la fracción de monocitos y pueden diferenciarse en mielofibrocitos, fibroblastos y adipocitos (entre otros tipos celulares). Tienen un papel destacado en los procesos inflamatorios y de cicatrización, y en el desarrollo de la fibrosis.

Ningún estudio hasta la fecha ha examinado el papel de los CF en la apendicitis aguda. Por lo tanto, los objetivos de este ensayo clínico fueron (1) determinar si los CF están alterados en la apendicitis aguda, (2) evaluar y comparar su precisión diagnóstica con CRP, WCC, neutrófilos, linfocitos, relación neutrófilos-linfocitos (NLR), monocitos , basófilos y eosinófilos, y (3) determinar los predictores más confiables en el diagnóstico de AA.

Se llevó a cabo un estudio de cohorte prospectivo para (1) determinar los niveles de fibrocitos circulantes (FC) en pacientes con apendicitis aguda (AA) confirmada histológicamente y (2) para determinar la sensibilidad y especificidad de los niveles circulantes de CF en el diagnóstico de AA, en adultos. (edad ≥ 16 años) que se presentó de forma aguda con dolor en la fosa ilíaca derecha, en el hospital universitario de Limerick. El diagnóstico de apendicitis se confirmó mediante evaluación histopatológica después de la apendicectomía.

Los pacientes se dividieron en tres cohortes según su diagnóstico final al alta y en función de los resultados de la histopatología. (1) pacientes con RIFP que se sometieron a una apendicectomía y tenían un apéndice normal en la evaluación histológica, es decir, grupo de apéndice normal comprobado histológicamente (HPNG). (2) pacientes con RIFP que se sometieron a una apendicectomía y tenían un apéndice inflamado en la evaluación histológica, es decir, grupo de apendicitis comprobada histológicamente (HPAG). (3) pacientes con RIFP que tenían un diagnóstico alternativo al alta además de apendicitis, es decir, grupo de diagnóstico alternativo (ADG). Se añadió otra cohorte como (4) controles sanos.

Los datos recopilados incluyeron la fecha de ingreso, el sexo del paciente, la edad, los síntomas de presentación, la duración de los síntomas, los niveles de CF, el WCC preoperatorio y sus diferenciales (neutrófilos, linfocitos, proporción de neutrófilos-linfocitos (NLR), recuentos de monocitos, basófilos y eosinófilos), CRP, Diagnóstico clínico final, operación y diagnóstico postoperatorio basado en la evaluación histológica.

Se obtuvieron muestras venosas periféricas de pacientes de las cohortes 1, 2 y 3 (n= 80) y controles sanos (n=15). Se recogió una única muestra de 10 ml de sangre venosa heparinizada mediante venopunción periférica de las extremidades superiores. Las muestras se recogieron en tubos vacutainer con heparina sódica (EDTA) y se transfirieron al laboratorio en un plazo de 3 horas. A continuación, las muestras se procesaron para aislar la capa leucocitaria mediante centrifugación en gradiente de densidad (Histopaque, Sigma-Aldrich, Wicklow, Irlanda). Las células mononucleares de sangre periférica resultantes se lavaron posteriormente en solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se resuspendieron en medio de congelación (50 % de suero bovino fetal, 40 % de medio RPMI y 10 % de dimetilsulfóxido) antes de transferirlas a viales criogénicos en 1- alícuotas de ml. Finalmente, las muestras se enfriaron en un recipiente criogénico con control de temperatura a -80 °C hasta su procesamiento para citometría de flujo. Después del aislamiento de glóbulos blancos mediante centrifugación en gradiente de densidad, se resuspendieron 1 x 106 células en tampón de citometría de flujo (medio RPMI suplementado con suero de caballo al 10 %, azida sódica al 0,1 % y HEPES 25 mM). Las células se fijaron y permeabilizaron utilizando la solución BD Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences, Oxford, Inglaterra) y se bloquearon antes de la tinción intracelular de Colágeno-I con anticuerpo de ratón anti-Colágeno-I humano (Millipore, Cork, Irlanda, código de producto MAB3391) que posteriormente se tiñó con el anticuerpo secundario anti-ratón de cabra Alexa-Fluor 488 (Jackson ImmunoResearch Europe, Suffolk, Inglaterra; código de producto 115-545-146). A continuación, las células se tiñeron para detectar el antígeno de superficie celular CD45 usando PerCP anti-CD45 humano (Biolegend, Londres, Inglaterra). A continuación, las células se volvieron a suspender en PBS antes del análisis posterior en el citómetro de flujo (BD FACSVerse). Todos los análisis se realizaron en un BD FACSVerse (BD Biosciences) utilizando BD FACSuite v1.0.5 (BD Biosciences). Los niveles de fibrocitos se mostraron como un porcentaje de la población total de glóbulos blancos.

Los análisis de datos se realizaron utilizando IBM SPSS para Mac OSX versión 25.0. Los datos se presentaron como medias y desviaciones estándar, o medianas y rangos intercuartílicos, según correspondiera. La distribución de las variables se evaluó mediante histogramas, diagramas Q-Q y diagramas de caja. Se utilizó el análisis de varianza (ANOVA de una vía) para comparar entre diferentes grupos independientes. Se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis para comparar entre los biomarcadores y los diferentes grupos (HPNG vs. HPAG vs. ADG), y para el análisis de subgrupos se realizaron comparaciones por pares, un valor de P inferior a 0,05 se consideró estadísticamente significativo. La curva característica operativa del receptor (ROC) se utilizó para caracterizar y comparar la precisión diagnóstica de CF, WCC, CRP, neutrófilos, NLR y monocitos. Se utilizó un análisis de regresión logística multinomial para evaluar los predictores independientes de AA.