Circulating Fibrocyte - 성인의 급성 맹장염 진단에 있어 새롭고 정확한 바이오마커

급성 맹장염(AA)은 가장 흔한 복부 응급 상황입니다. 높은 유병률에도 불구하고 맹장염의 진단은 여전히 ​​어려운 과제입니다. 임상 양상은 종종 비정형적이며 증상은 종종 다른 많은 조건과 겹칩니다. 이와 함께 신속한 진단에 도달하지 못하면 불리한 결과를 초래할 수 있습니다.

순환 섬유세포(CF)는 1994년 Richard Bucala에 의해 처음 기술되었습니다. 그들은 골수에서 파생된 조혈 세포입니다. 이들은 단핵구 분획에서 순환하며 골수섬유세포, 섬유아세포 및 지방세포(다른 세포 유형 중에서)로 분화할 수 있습니다. 그들은 염증 및 치유 과정과 섬유증의 발달에 중요한 역할을 합니다.

현재까지 급성 맹장염에서 CF의 역할을 조사한 연구는 없습니다. 따라서 이 임상 시험의 목적은 (1) 급성 충수염에서 CF가 변경되는지 확인하고, (2) CRP, WCC, 호중구, 림프구, NLR(호중구-림프구 비율), 단핵구와의 진단 정확도를 평가하고 비교하는 것입니다. , 호염기구 및 호산구, 그리고 (3) AA 진단에서 가장 신뢰할 수 있는 예측 변수를 결정합니다.

전향적 코호트 연구가 (1) 조직학적으로 확인된 급성 맹장염(AA) 환자의 순환 섬유세포 수준(CF)을 결정하고, (2) 성인에서 AA 진단 시 순환 섬유세포 수준의 민감도와 특이성을 결정하기 위해 수행되었습니다. (연령 ≥ 16세) Limerick 대학 병원에서 오른쪽 장골와 통증을 심하게 나타냄. 맹장염의 진단은 맹장 절제술 후 조직병리학적 평가에 의해 확인되었습니다.

환자는 퇴원 시 최종 진단을 받은 후 조직 병리학 결과에 따라 3개의 코호트로 분류되었습니다. (1) 맹장 절제술을 받고 조직학적 평가에서 정상적인 맹장을 가진 RIFP 환자, 즉 조직학적으로 입증된 정상 맹장 그룹(HPNG). (2) 맹장 절제술을 받고 조직학적 평가에서 충수 염증이 있는 RIFP 환자, 즉 조직학적으로 입증된 맹장염 그룹(HPAG). (3) 퇴원 시 맹장염 이외의 다른 진단을 받은 RIFP 환자, 즉 대체 진단 그룹(ADG). 또 다른 코호트는 (4) 건강한 대조군으로 추가되었습니다.

수집된 데이터에는 입원 날짜, 환자의 성별, 연령, 증상 발현, 증상 기간, CF 수준, 수술 전 WCC 및 감별(호중구, 림프구, 호중구-림프구 비율(NLR), 단핵구, 호염기구 및 호산구 수), CRP, 최종 임상 진단, 수술 및 조직학적 평가를 기반으로 한 수술 후 진단.

코호트 1, 2 및 3(n=80) 및 건강한 대조군(n=15)의 환자로부터 말초 정맥 샘플을 얻었다. 헤파린 처리된 정맥혈의 단일 10mL 샘플이 말초 상지 정맥 천자를 통해 수집되었습니다. 샘플은 나트륨 헤파린(EDTA) 진공채취관에 채취하여 3시간 이내에 실험실로 옮겼습니다. 그런 다음 샘플을 처리하여 밀도 구배 원심분리(Histopaque, Sigma-Aldrich, Wicklow, Ireland)를 사용하여 버피 코트 층을 분리했습니다. 생성된 말초 혈액 단핵 세포를 이어서 인산염 완충 식염수(PBS)에서 세척하고 냉동 배지(50% 태아 소 혈청, 40% RPMI 배지 및 10% 디메틸 설폭사이드)에 재현탁한 후 1-에서 극저온 바이알로 옮겼습니다. ml 분량. 마지막으로 샘플을 극저온 온도 조절 속도 용기에서 유세포 분석을 위해 처리할 때까지 -80°C로 냉각했습니다. 밀도 구배 원심분리를 사용하여 백혈구를 분리한 후, 1 x 106세포를 유세포 분석 완충액(10% 말 혈청, 0.1% 아지드화나트륨 및 25mM HEPES가 보충된 RPMI 배지)에 재현탁했습니다. 세포를 BD Cytofix/Cytoperm 용액(BD Biosciences, Oxford, England)을 사용하여 고정 및 투과화하고 마우스 항-인간 Collagen-I 항체(Millipore, Cork, Ireland, 제품 코드 MAB3391)로 콜라겐-I의 세포내 염색 전에 차단했습니다. 이어서 Alexa-Fluor 488 염소 항-마우스 2차 항체(Jackson ImmunoResearch Europe, Suffolk, England; 제품 코드 115-545-146)로 염색했습니다. 이어서 세포를 PerCP 항-인간 CD45(Biolegend, London, England)를 사용하여 세포 표면 항원 CD45에 대해 염색하였다. 그런 다음 유세포 분석기(BD FACSVerse)에서 후속 분석하기 전에 세포를 PBS에 재현탁했습니다. 모든 분석은 BD FACSuite v1.0.5(BD Biosciences)를 사용하여 BD FACSVerse(BD Biosciences)에서 수행되었습니다. 섬유 세포 수준은 총 백혈구 인구의 백분율로 표시되었습니다.

데이터 분석은 Mac OSX 버전 25.0용 IBM SPSS를 사용하여 수행되었습니다. 데이터는 적절하게 평균 및 표준 편차 또는 중앙값 및 사분위수 범위로 표시되었습니다. 변수 분포는 히스토그램, Q-Q 플롯 및 박스 플롯으로 평가했습니다. 분산 분석(One-Way ANOVA)을 사용하여 서로 다른 독립 그룹을 비교했습니다. Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 바이오마커와 다른 그룹(HPNG 대 HPAG 대 ADG)을 비교하고 하위 그룹 분석을 위해 쌍별 비교를 수행하여 0.05 미만의 P 값을 통계적으로 유의한 것으로 간주했습니다. 수신자 작동 특성(ROC) 곡선을 사용하여 CF, WCC, CRP, 호중구, NLR 및 단핵구의 진단 정확도를 특성화하고 비교했습니다. 다항 로지스틱 회귀 분석을 사용하여 AA에 대한 독립 예측 변수를 평가했습니다.