Den cirkulerende fibrocyt - en ny og nøjagtig biomarkør til diagnosticering af akut blindtarmsbetændelse hos voksne

Akut blindtarmsbetændelse (AA) er den hyppigste abdominale nødsituation. På trods af dens høje udbredelse er diagnosen blindtarmsbetændelse stadig en udfordring. Den kliniske præsentation er ofte atypisk, og symptomer overlapper ofte med mange andre tilstande. Kombineret med dette kan undladelse af at nå frem til en hurtig diagnose resultere i uønskede resultater.

Cirkulerende fibrocytter (CF'er) blev først beskrevet i 1994 af Richard Bucala. De er hæmatopoietiske celler, der stammer fra knoglemarven. De cirkulerer i monocytfraktionen og kan differentiere til myelofibrocytter, fibroblaster og adipocytter (blandt andre celletyper). De har en fremtrædende rolle i inflammatoriske og helingsprocesser og i udviklingen af ​​fibrose.

Ingen undersøgelser til dato har undersøgt CF'ers rolle i akut blindtarmsbetændelse. Formålet med dette kliniske forsøg var således (1) at bestemme, om CF'er er ændret ved akut blindtarmsbetændelse, (2) at vurdere og sammenligne deres diagnostiske nøjagtighed med CRP, WCC, neutrofiler, lymfocytter, neutrofiler-lymfocytforhold (NLR), monocytter , basofiler og eosinofiler, og (3) for at bestemme de mest pålidelige prædiktorer ved diagnosticering af AA.

En prospektiv kohorteundersøgelse blev foretaget for (1) at bestemme niveauer af cirkulerende fibrocytter (CF) hos patienter med histologisk bekræftet akut appendicitis (AA), og (2) for at bestemme følsomheden og specificiteten af ​​cirkulerende CF-niveauer ved diagnosen AA hos voksne (alder ≥ 16 år) med akutte smerter i fossa iliaca på universitetshospitalet Limerick. Diagnosen blindtarmsbetændelse blev bekræftet ved histopatologisk vurdering efter blindtarmsoperation.

Patienterne blev opdelt i tre kohorter efter deres endelige diagnose ved udskrivelse og baseret på histopatologiske resultater. (1) patienter med RIFP, som gennemgik en blindtarmsoperation og havde en normal blindtarm ved histologisk vurdering, dvs. histologisk bevist normal blindtarmsgruppe (HPNG). (2) patienter med RIFP, som blev foretaget en blindtarmsbetændelse og havde en betændt blindtarm ved histologisk vurdering, dvs. histologisk dokumenteret blindtarmsbetændelse gruppe (HPAG). (3) patienter med RIFP, som havde en anden diagnose ved udskrivelse end blindtarmsbetændelse, dvs. alternativ diagnosegruppe (ADG). En anden kohorte blev tilføjet som (4) raske kontroller.

De indsamlede data omfattede indlæggelsesdato, patientens køn, alder, symptomer, varighed af symptomer, CF-niveauer, præoperativ WCC og dets forskelle (neutrofile, lymfocytter, neutrofiler-lymfocytforhold (NLR), monocytter, basofile og eosinofile tal), CRP, endelig klinisk diagnose, operation og postoperativ diagnose baseret på histologisk vurdering.

Perifere venøse prøver blev opnået fra patienter i kohorte 1, 2 og 3 (n=80) og raske kontroller (n=15). En enkelt 10 ml prøve af hepariniseret venøst ​​blod blev opsamlet via perifer venepunktur i den øvre ekstremitet. Prøver blev opsamlet i natriumheparin (EDTA) vacutainerrør og overført til laboratoriet inden for 3 timer. Prøver blev derefter behandlet for at isolere buffy coat-laget ved anvendelse af tæthedsgradientcentrifugering (Histopaque, Sigma-Aldrich, Wicklow, Irland). De resulterende mononukleære blodceller fra perifert blod blev efterfølgende vasket i fosfatpufret saltvand (PBS) og resuspenderet i frysemedium (50 % føtalt bovint serum, 40 % RPMI-medium og 10 % dimethylsulfoxid) før overførsel til kryogene hætteglas i 1- ml alikvoter. Til sidst blev prøver afkølet i en kryogen temperaturkontrolhastighedsbeholder til -80 °C indtil behandling til flowcytometri. Efter isolering af hvide blodlegemer under anvendelse af tæthedsgradientcentrifugering blev 1 x 106 celler resuspenderet i flowcytometribuffer (RPMI-medium suppleret med 10 % hesteserum, 0,1 % natriumazid og 25 mM HEPES). Celler blev fikseret og permeabiliseret ved hjælp af BD Cytofix/Cytoperm-opløsning (BD Biosciences, Oxford, England) og blokeret før intracellulær farvning af Collagen-I med muse-anti-humant Collagen-I-antistof (Millipore, Cork, Irland, produktkode MAB3391), som blev efterfølgende farvet med Alexa-Fluor 488 gede-anti-mus sekundært antistof (Jackson ImmunoResearch Europe, Suffolk, England; Produktkode 115-545-146). Celler blev derefter farvet for celleoverfladeantigen CD45 under anvendelse af PerCP anti-humant CD45 (Biolegend, London, England). Celler blev derefter resuspenderet i PBS før efterfølgende analyse på flowcytometeret (BD FACSVerse). Al analyse blev udført på en BD FACSVerse (BD Biosciences) under anvendelse af BD FACSuite v1.0.5 (BD Biosciences). Fibrocytniveauer blev vist som en procentdel af den samlede population af hvide blodlegemer.

Dataanalyser blev udført ved hjælp af IBM SPSS til Mac OSX version 25.0. Data blev præsenteret som gennemsnit og standardafvigelser eller medianer og interkvartilintervaller, alt efter hvad der var relevant. Fordelingen af ​​variabler blev vurderet ved hjælp af histogrammer, Q-Q plots og box plots. Variansanalyse (One-Way ANOVA) blev brugt til at sammenligne mellem forskellige uafhængige grupper. Kruskal-Wallis test blev brugt til at sammenligne mellem biomarkørerne og de forskellige grupper (HPNG vs. HPAG vs. ADG), og til subgruppeanalyse blev der udført parvise sammenligninger, en P - værdi på mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Receiver operation characteristic (ROC) kurve blev brugt til at karakterisere og sammenligne mellem den diagnostiske nøjagtighed af CF'er, WCC, CRP, neutrofiler, NLR og monocytter. Multinomial logistisk regressionsanalyse blev brugt til at vurdere uafhængige forudsigere for AA.