Kiertävä fibrosyytti – uusi ja tarkka biomarkkeri akuutin umpilisäkkeen tulehduksen diagnosoinnissa aikuisilla

Akuutti umpilisäkkeen tulehdus (AA) on yleisin vatsan hätätilanne. Korkeasta esiintyvyydestään huolimatta umpilisäkkeen tulehduksen diagnoosi on edelleen haaste. Kliininen esitys on usein epätyypillinen ja oireet menevät usein päällekkäin monien muiden sairauksien kanssa. Yhdessä tämän kanssa nopean diagnoosin saavuttamatta jättäminen voi johtaa haitallisiin seurauksiin.

Verenkierrossa olevat fibrosyytit (CF:t) kuvaili ensimmäisen kerran vuonna 1994 Richard Bucala. Ne ovat luuytimestä peräisin olevia hematopoieettisia soluja. Ne kiertävät monosyyttifraktiossa ja voivat erilaistua myelofibrosyyteiksi, fibroblasteiksi ja adiposyyteiksi (muiden solutyyppien joukossa). Niillä on merkittävä rooli tulehdus- ja paranemisprosesseissa sekä fibroosin kehittymisessä.

Tähän mennessä ei ole tutkittu CF:n roolia akuutissa umpilisäkkeessä. Tämän kliinisen tutkimuksen tavoitteena oli siis (1) määrittää, ovatko CF:t muuttuneet akuutissa umpilisäkkeen tulehduksessa, (2) arvioida ja verrata niiden diagnostista tarkkuutta CRP:hen, WCC:hen, neutrofiileihin, lymfosyytteihin, neutrofiilien ja lymfosyyttien suhteeseen (NLR), monosyytteihin. , basofiilit ja eosinofiilit, ja (3) määrittämään luotettavimmat ennustajat AA:n diagnosoinnissa.

Prospektiivinen kohorttitutkimus suoritettiin (1) verenkierron fibrosyyttien (CF) määrittämiseksi potilailla, joilla on histologisesti varmistettu akuutti umpilisäke (AA) ja (2) verenkierron CF-tasojen herkkyyden ja spesifisyyden määrittämiseksi AA:n diagnoosissa aikuisilla. (ikä ≥ 16 vuotta), joilla esiintyy akuuttia oikean suoliluun kuoppakipua Limerickin yliopistollisessa sairaalassa. Umpilisäkkeentulehduksen diagnoosi vahvistettiin umpilisäkkeen poiston jälkeisellä histopatologisella arvioinnilla.

Potilaat jaettiin kolmeen kohorttiin heidän lopullisen diagnoosinsa jälkeen kotiutuksen yhteydessä ja histopatologisten tulosten perusteella. (1) RIFP-potilaat, joille tehtiin umpilisäkkeen poisto ja joilla oli normaali umpilisäke histologisessa arvioinnissa eli histologisesti todistettu normaali umpilisäkeryhmä (HPNG). (2) RIFP-potilaat, joille tehtiin umpilisäkkeen poisto ja joilla oli tulehtunut umpilisäke histologisessa arvioinnissa eli histologisesti todistettu umpilisäkeryhmä (HPAG). (3) RIFP:tä sairastavat potilaat, joilla oli kotiutuksen yhteydessä jokin muu diagnoosi kuin umpilisäkkeentulehdus eli vaihtoehtoinen diagnoosiryhmä (ADG). Toinen kohortti lisättiin (4) terveenä kontrollina.

Kerätyt tiedot sisälsivät vastaanottopäivän, potilaan sukupuolen, iän, oireiden esiintymisen, oireiden keston, CF-tasot, preoperatiivisen WCC:n ja sen erot (neutrofiilien, lymfosyyttien, neutrofiilien ja lymfosyyttien suhde (NLR), monosyyttien, basofiilien ja eosinofiilien määrät), CRP, CRP, lopullinen kliininen diagnoosi, leikkaus ja leikkauksen jälkeinen diagnoosi histologisen arvioinnin perusteella.

Perifeeriset laskimonäytteet otettiin kohortin 1, 2 ja 3 potilailta (n = 80) ja terveiltä kontrolleilta (n = 15). Yksi 10 ml:n näyte heparinisoitua laskimoverta kerättiin perifeerisellä yläraajojen laskimopunktiolla. Näytteet kerättiin natriumhepariini (EDTA) -vacutainer-putkiin ja siirrettiin laboratorioon 3 tunnin kuluessa. Sitten näytteet käsiteltiin buffy coat -kerroksen eristämiseksi käyttämällä tiheysgradienttisentrifugointia (Histopaque, Sigma-Aldrich, Wicklow, Irlanti). Tuloksena saadut perifeerisen veren mononukleaarisolut pestiin sen jälkeen fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS) ja suspendoitiin uudelleen pakastusväliaineeseen (50 % naudan sikiön seerumi, 40 % RPMI-elatusaine ja 10 % dimetyylisulfoksidi) ennen siirtämistä kryogeenisiin injektiopulloihin 1- ml alikvootteja. Lopuksi näytteet jäähdytettiin kryogeenisessä lämpötilansäätösäiliössä -80 °C:seen virtaussytometriaa varten käsittelyyn asti. Sen jälkeen kun valkosolut eristettiin käyttämällä tiheysgradienttisentrifugointia, 1 x 106 solua suspendoitiin uudelleen virtaussytometriapuskuriin (RPMI-elatusaine, jota oli täydennetty 10 % hevosen seerumilla, 0,1 % natriumatsidilla ja 25 mM HEPES:llä). Solut kiinnitettiin ja permeabilisoitiin käyttämällä BD Cytofix/Cytoperm -liuosta (BD Biosciences, Oxford, Englanti) ja blokattiin ennen kollageeni-I:n solunsisäistä värjäystä hiiren anti-ihmis-kollageeni-I-vasta-aineella (Millipore, Cork, Irlanti, tuotekoodi MAB3391). värjättiin myöhemmin Alexa-Fluor 488 vuohen anti-hiirivasta-aineella (Jackson ImmunoResearch Europe, Suffolk, Englanti; tuotekoodi 115-545-146). Sitten solut värjättiin solun pinta-antigeenin CD45 suhteen käyttämällä PerCP:tä anti-ihmis-CD45:tä (Biolegend, Lontoo, Englanti). Sitten solut suspendoitiin uudelleen PBS:ään ennen myöhempää analyysiä virtaussytometrillä (BD FACSVerse). Kaikki analyysi suoritettiin BD FACSVerse (BD Biosciences) -laitteella käyttäen BD FACSuite v1.0.5:tä (BD Biosciences). Fibrosyyttitasot esitettiin prosentteina koko valkosolupopulaatiosta.

Tietojen analyysit suoritettiin käyttämällä IBM SPSS for Mac OSX -versiota 25.0. Tiedot esitettiin keskiarvoina ja standardipoikkeamana tai mediaaneina ja kvartiilivälinä tarpeen mukaan. Muuttujien jakautuminen arvioitiin histogrammeilla, Q-Q-kaavioilla ja laatikkokaavioilla. Varianssianalyysiä (One-Way ANOVA) käytettiin vertaamaan eri riippumattomien ryhmien välillä. Biomarkkerien ja eri ryhmien (HPNG vs. HPAG vs. ADG) välistä vertailua käytettiin Kruskal-Wallis-testillä, ja alaryhmäanalyysissä suoritettiin parivertailuja, joiden P - arvoa alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevänä. Vastaanottimen toimintakäyrää (ROC) käytettiin karakterisoimaan ja vertaamaan CF:iden, WCC:n, CRP:n, neutrofiilien, NLR:n ja monosyyttien diagnostista tarkkuutta. Multinomiaalista logistista regressioanalyysiä käytettiin AA:n riippumattomien ennustajien arvioimiseen.