O fibrócito circulante - um novo e preciso biomarcador no diagnóstico de apendicite aguda em adultos

A apendicite aguda (AA) é a emergência abdominal mais comum. Apesar de sua alta prevalência, o diagnóstico de apendicite permanece um desafio. A apresentação clínica é frequentemente atípica e os sintomas muitas vezes se sobrepõem a muitas outras condições. Juntamente com isso, a falha em chegar a um diagnóstico imediato pode resultar em resultados adversos.

Os fibrócitos circulantes (FCs) foram descritos pela primeira vez em 1994 por Richard Bucala. São células hematopoiéticas derivadas da medula óssea. Eles circulam na fração de monócitos e podem se diferenciar em mielofibrócitos, fibroblastos e adipócitos (entre outros tipos celulares). Têm papel de destaque nos processos inflamatórios e cicatriciais e no desenvolvimento da fibrose.

Até o momento, nenhum estudo examinou o papel dos FCs na apendicite aguda. Assim, os objetivos deste ensaio clínico foram (1) determinar se os FCs estão alterados na apendicite aguda, (2) avaliar e comparar sua precisão diagnóstica com PCR, WCC, neutrófilos, linfócitos, relação neutrófilos-linfócitos (NLR), monócitos , basófilos e eosinófilos, e (3) determinar os preditores mais confiáveis ​​no diagnóstico de AA.

Um estudo de coorte prospectivo foi realizado para (1) determinar os níveis de fibrócitos circulantes (FC) em pacientes com apendicite aguda (AA) histologicamente confirmada e (2) determinar a sensibilidade e especificidade dos níveis circulantes de FC no diagnóstico de AA, em adultos (idade ≥ 16 anos) apresentando dor aguda na fossa ilíaca direita, no Hospital Universitário de Limerick. O diagnóstico de apendicite foi confirmado por avaliação histopatológica após apendicectomia.

Os pacientes foram divididos em três coortes após o diagnóstico final na alta e com base nos resultados da histopatologia. (1) pacientes com RIFP submetidos a apendicectomia e com apêndice normal na avaliação histológica, ou seja, grupo de apêndice normal comprovado histologicamente (HPNG). (2) pacientes com RIFP submetidos a apendicectomia e com apêndice inflamado na avaliação histológica, ou seja, grupo de apendicite comprovada histologicamente (HPAG). (3) pacientes com RIFP que tiveram um diagnóstico alternativo na alta além de apendicite, ou seja, grupo de diagnóstico alternativo (ADG). Outra coorte foi adicionada como (4) controles saudáveis.

Os dados coletados incluíram data de admissão, sexo do paciente, idade, sintomas de apresentação, duração dos sintomas, níveis de FC, WCC pré-operatório e seus diferenciais (contagens de neutrófilos, linfócitos, neutrófilos-linfócitos (NLR), monócitos, basófilos e eosinófilos), PCR, diagnóstico clínico final, operação e diagnóstico pós-operatório com base na avaliação histológica.

Amostras venosas periféricas foram obtidas de pacientes das coortes 1, 2 e 3 (n= 80) e controles saudáveis ​​(n=15). Uma única amostra de 10 mL de sangue venoso heparinizado foi coletada por punção venosa periférica da extremidade superior. As amostras foram coletadas em tubos vacutainer de heparina sódica (EDTA) e transferidas para o laboratório em 3 horas. As amostras foram então processadas para isolar a camada de revestimento leucocitário usando centrifugação de gradiente de densidade (Histopaque, Sigma-Aldrich, Wicklow, Irlanda). As células mononucleares do sangue periférico resultantes foram subsequentemente lavadas em solução salina tamponada com fosfato (PBS) e ressuspensas em meio de congelamento (50% de soro fetal bovino, 40% de meio RPMI e 10% de dimetil sulfóxido) antes da transferência para frascos criogênicos em 1- alíquotas de ml. Por fim, as amostras foram resfriadas em um recipiente criogênico com taxa de controle de temperatura a -80 °C até o processamento para citometria de fluxo. Após o isolamento de glóbulos brancos usando centrifugação em gradiente de densidade, 1 × 106 células foram ressuspensas em tampão de citometria de fluxo (meio RPMI suplementado com 10% de soro de cavalo, 0,1% de azida de sódio e 25 mM HEPES). As células foram fixadas e permeabilizadas usando solução BD Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences, Oxford, Inglaterra) e bloqueadas antes da coloração intracelular de Colágeno-I com anticorpo anti-colágeno-I humano de camundongo (Millipore, Cork, Irlanda, código do produto MAB3391) que foi subsequentemente corado com anticorpo secundário de cabra anti-ratinho Alexa-Fluor 488 (Jackson ImmunoResearch Europe, Suffolk, Inglaterra; código do produto 115-545-146). As células foram então coradas para antígeno de superfície celular CD45 usando PerCP anti-humano CD45 (Biolegend, Londres, Inglaterra). As células foram então ressuspensas em PBS antes da análise subsequente no citômetro de fluxo (BD FACSVerse). Todas as análises foram feitas em um BD FACSVerse (BD Biosciences) usando BD FACSuite v1.0.5 (BD Biosciences). Os níveis de fibrócitos foram exibidos como uma porcentagem da população total de glóbulos brancos.

As análises de dados foram realizadas usando IBM SPSS para Mac OSX versão 25.0. Os dados foram apresentados como médias e desvios padrão, ou medianas e intervalos interquartis, conforme apropriado. A distribuição das variáveis ​​foi avaliada por histogramas, gráficos Q-Q e gráficos de caixa. A análise de variância (One-Way ANOVA) foi usada para comparar diferentes grupos independentes. O teste de Kruskal-Wallis foi usado para comparar entre os biomarcadores e os diferentes grupos (HPNG vs. HPAG vs. ADG), e para análise de subgrupo comparações pareadas foram realizadas, um valor de P menor que 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. A curva Receiver Operating Characteristic (ROC) foi utilizada para caracterizar e comparar a acurácia diagnóstica de CFs, WCC, PCR, neutrófilos, NLR e monócitos. A análise de regressão logística multinomial foi usada para avaliar preditores independentes para AA.