Le fibrocyte circulant - un biomarqueur nouveau et précis dans le diagnostic de l'appendicite aiguë chez l'adulte

L'appendicite aiguë (AA) est l'urgence abdominale la plus fréquente. Malgré sa forte prévalence, le diagnostic de l'appendicite reste un défi. La présentation clinique est souvent atypique et les symptômes se chevauchent souvent avec de nombreuses autres affections. Couplé à cela, l'incapacité à parvenir à un diagnostic rapide peut entraîner des résultats indésirables.

Les fibrocytes circulants (FC) ont été décrits pour la première fois en 1994 par Richard Bucala. Ce sont des cellules hématopoïétiques dérivées de la moelle osseuse. Ils circulent dans la fraction monocyte et peuvent se différencier en myélofibrocytes, fibroblastes et adipocytes (entre autres types cellulaires). Ils jouent un rôle de premier plan dans les processus inflammatoires et cicatrisants, ainsi que dans le développement de la fibrose.

Aucune étude à ce jour n'a examiné le rôle des FC dans l'appendicite aiguë. Ainsi, les objectifs de cet essai clinique étaient (1) de déterminer si les CF sont altérés dans l'appendicite aiguë, (2) d'évaluer et de comparer leur précision diagnostique avec la CRP, le WCC, les neutrophiles, les lymphocytes, le rapport neutrophiles-lymphocytes (NLR), les monocytes , basophiles et éosinophiles, et (3) pour déterminer les prédicteurs les plus fiables dans le diagnostic de l'AA.

Une étude de cohorte prospective a été entreprise pour (1) déterminer les niveaux de fibrocytes circulants (CF) chez les patients atteints d'appendicite aiguë (AA) confirmée histologiquement, et (2) pour déterminer la sensibilité et la spécificité des niveaux de CF circulants dans le diagnostic de l'AA, chez les adultes (âge ≥ 16 ans) présentant une douleur aiguë de la fosse iliaque droite, à l'hôpital universitaire de Limerick. Le diagnostic d'appendicite a été confirmé par un bilan histopathologique après appendicectomie.

Les patients ont été divisés en trois cohortes après leur diagnostic final à la sortie et sur la base des résultats histopathologiques. (1) les patients atteints de RIFP qui ont subi une appendicectomie et qui avaient un appendice normal lors de l'évaluation histologique, c'est-à-dire un groupe d'appendices normaux histologiquement prouvés (HPNG). (2) les patients atteints de RIFP qui ont subi une appendicectomie et qui avaient un appendice enflammé lors de l'évaluation histologique, c'est-à-dire le groupe d'appendicite histologiquement prouvée (HPAG). (3) les patients atteints de RIFP qui avaient un diagnostic alternatif à la sortie autre que l'appendicite, c'est-à-dire le groupe de diagnostic alternatif (ADG). Une autre cohorte a été ajoutée en tant que (4) témoins sains.

Les données recueillies comprenaient la date d'admission, le sexe du patient, son âge, les symptômes présentés, la durée des symptômes, les niveaux de mucoviscidose, le WCC préopératoire et ses différentiels (neutrophiles, lymphocytes, rapport neutrophiles-lymphocytes (NLR), nombre de monocytes, de basophiles et d'éosinophiles), CRP, diagnostic clinique final, diagnostic opératoire et post-opératoire basé sur l'évaluation histologique.

Des échantillons veineux périphériques ont été prélevés sur des patients des cohortes 1, 2 et 3 (n = 80) et des témoins sains (n ​​= 15). Un seul échantillon de 10 ml de sang veineux hépariné a été prélevé par ponction veineuse périphérique du membre supérieur. Les échantillons ont été prélevés dans des tubes Vacutainer à héparine sodique (EDTA) et transférés au laboratoire dans les 3 heures. Les échantillons ont ensuite été traités pour isoler la couche leucocytaire en utilisant une centrifugation en gradient de densité (Histopaque, Sigma-Aldrich, Wicklow, Irlande). Les cellules mononucléaires du sang périphérique résultantes ont ensuite été lavées dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et remises en suspension dans un milieu de congélation (50 % de sérum bovin fœtal, 40 % de milieu RPMI et 10 % de diméthylsulfoxyde) avant d'être transférées dans des flacons cryogéniques en 1- ml d'aliquotes. Enfin, les échantillons ont été refroidis dans un récipient cryogénique à température contrôlée à -80 ° C jusqu'au traitement pour la cytométrie en flux. Après isolement des globules blancs par centrifugation en gradient de densité, 1 x 106 cellules ont été remises en suspension dans un tampon de cytométrie en flux (milieu RPMI additionné de 10 % de sérum de cheval, 0,1 % d'azide de sodium et 25 mM HEPES). Les cellules ont été fixées et perméabilisées à l'aide de la solution BD Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences, Oxford, Angleterre) et bloquées avant la coloration intracellulaire du collagène-I avec un anticorps anti-collagène humain de souris (Millipore, Cork, Irlande, code produit MAB3391) qui a ensuite été coloré avec l'anticorps secondaire anti-souris de chèvre Alexa-Fluor 488 (Jackson ImmunoResearch Europe, Suffolk, Angleterre; code produit 115-545-146). Les cellules ont ensuite été colorées pour l'antigène de surface cellulaire CD45 en utilisant du PerCP anti-CD45 humain (Biolegend, Londres, Angleterre). Les cellules ont ensuite été remises en suspension dans du PBS avant une analyse ultérieure sur le cytomètre en flux (BD FACSVerse). Toutes les analyses ont été effectuées sur un BD FACSVerse (BD Biosciences) à l'aide de BD FACSuite v1.0.5 (BD Biosciences). Les niveaux de fibrocytes ont été affichés en pourcentage de la population totale de globules blancs.

Les analyses de données ont été effectuées à l'aide d'IBM SPSS pour Mac OSX version 25.0. Les données ont été présentées sous forme de moyennes et d'écarts types, ou de médianes et d'intervalles interquartiles, selon le cas. La distribution des variables a été évaluée par des histogrammes, des graphiques Q-Q et des diagrammes en boîte. L'analyse de variance (One-Way ANOVA) a été utilisée pour comparer différents groupes indépendants. Le test de Kruskal-Wallis a été utilisé pour comparer les biomarqueurs et les différents groupes (HPNG vs HPAG vs ADG), et pour l'analyse des sous-groupes, des comparaisons par paires ont été effectuées, une valeur P inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. La courbe des caractéristiques de fonctionnement du récepteur (ROC) a été utilisée pour caractériser et comparer la précision diagnostique des CF, WCC, CRP, neutrophiles, NLR et monocytes. Une analyse de régression logistique multinomiale a été utilisée pour évaluer les prédicteurs indépendants de l'AA.