クリプトスポリジウム症の治療

背景: バングラデシュでの縦断的な出生コホート研究の報告によると、77% の子供が生後 2 年間に少なくとも 1 回はクリプトスポリジウム症を発症しています。 クリプトスポリジウム症はまた、栄養失調の発症にも関連しており、さらに 420 万年の障害調整寿命が失われると推定されています。 icddr,b で実施されたクリプトスポリジウム症に関する多くの研究は、クリプトスポリジウム sp.罹患率と死亡率に関連する下痢の最も重要な原因物質の1つでした。 icddr,b での以前の研究では、他にも多くの興味深い解明が行われました。

1. クリプトスポリジウム属 ダッカのミルプールのコホートでは、生後 1 年のほとんどの子供が感染しました。 調査官は、乳児の最大 64% が生後 1 年目にクリプトスポリジウム症と診断され、これらの症例の 26% が同時感染を伴うことを観察しました。
2. クリプトスポリジウム属は、他の複数の腸内病原体による感染が発生しており、下痢性病原体のトップ 10 として確立されています。 調査官は、低中所得国環境下の乳児における複数の腸内病原体による感染と下痢が、例外なく標準であることを発見しました。 平均して、バングラデシュのミルプールの各乳児は、一度に 3 ～ 5 の腸内病原体を便に含んでいました。乳児の下痢の主な原因としてのクリプトスポリジウムの重要性は、8 つの異なる低度から中所得サイト。
3. 生後 1 年間のクリプトスポリジウムによる下痢は、栄養失調の将来の進行と独立して関連していました。
4. クリプトスポリジウム症の病歴のある乳児の 2 歳での神経認知発達障害は、Bayley の乳児発育尺度を使用して測定されます。

現在、クリプトスポリジウム症に対す​​る有効なワクチンはなく、クリプトスポリジウム感染による下痢の治療薬として承認されているのはニタゾキサニド (NTZ) のみです (U.S. DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES 2003)。 NTZ は唯一の治療法ですが、対照臨床試験での有効性は大きく異なります。 この薬は一般的に 80% 以上の有効性があることが示されていますが、ザンビアの栄養失調の子供を対象とした以前の研究では、56% の有効性しかないことが示されました。 効果的な治療法は、感染の負荷が高く、下痢がなくても腸内病原体が持続することが栄養失調に関連している発展途上国の子供のクリプトスポリジウム症に魅力的です.

NTZ が栄養失調の子供に高い失敗率を示す正確な理由は不明ですが、この薬は寄生虫や嫌気性細菌のピルビン酸フェレドキシン酸化還元酵素を阻害することが示されていますが、クリプトスポリジウム症と闘う効果は宿主の免疫能力に依存しています。 腸の微小環境は、環境への挑戦に対する宿主の反応の重要な要素であり、腸の微生物叢は、免疫系のあらゆる側面を促進および調整する上で不可欠な役割を媒介すると仮定されています。 発酵食品 (ヨーグルトなど) は、健康を促進すると長い間考えられてきました。 しかし、ほとんどの市販食品では、有益な微生物またはプロバイオティクスのレベルは一貫しておらず、望ましい生物学的効果に必要なレベルよりも低くなっています。 Lactobacillus reuteri DSM 17938 は、機能性胃腸障害を持つ子供と大人で最も広く研究されているプロバイオティクスの 1 つです。 特に、ラクトバチルス・ロイテリ DSM 17938 は、ヒトの十二指腸に両方の微生物が存在するため、クリプトスポリジウム症に対して有効であると考えられます。 icddr, b での最近の研究では、この一般的に使用されているプロバイオティクスが安全であり、バングラデシュの家族に広く受け入れられていることが示されています. Lactobacillus reuteri は臨床試験でテストされ、子供と大人の両方で使用するための「GRAS (一般に安全と見なされる)」ステータスを達成し、さらに免疫調節活性が実証されています。 したがって、このプロバイオティクスは、クリプトスポリジウム感染に起因する腸の炎症を潜在的に軽減することにより、クリプトスポリジウム症の NTZ 治療に対する有益なサプリメントとして作用すると仮定されています。 さらに、微生物叢の治療が寄生虫の排除を促進し、負担を軽減する場合、それはより迅速な病気の解決とより良い臨床転帰に関連付けられます. Lactobacillus reuteri DSM 17938 は、RORa/y 活性を阻害して Th17 細胞を抑制し、薬物治療の有効性を改善する適切な免疫応答を促進することが報告されています。 Lactobacillus reuteri DSM 17938 および抗炎症活性を持つ他の細菌を含むプロバイオティクス VSL#3 は、動物モデルで炎症性下痢の重症度を軽減することが示され、British Society による嚢炎の治療オプションの 1 つとして含まれています。消化器科の。 この研究における研究者の目標は、クリプトスポリジウム症に対して現在使用されている最も効果的な治療法を改善および最適化するための反復的なアプローチを行うことです。

実験計画と方法論:

この研究の目的は、1) クリプトスポリジウム症の発生率を決定すること、2) クリプトスポリジウム症に対す​​る獲得免疫応答を評価すること、および 3) クリプトスポリジウム症に対す​​る感受性に影響を与えるヒト遺伝子を分析することです。 提案された研究は、親研究のフィールド設定を利用します。 この提案されたパイロット研究は、クリプトスポリジウム症の効果的な治療法を解明するのに役立ちます。これは、親研究の研究参加者を助けるだけでなく、同様の状況でクリプトスポリジウム症を患う他の個人にも役立ちます. その後、親研究の結果は、宿主の免疫メカニズムを調査するのに役立つ情報を提供し、プロバイオティクス治療によるNTZの有効性を改善する適切な免疫応答を最適化できる宿主指向療法を組み込んだ新しい戦略の設計を可能にします.

研究製品：ニタゾキサニドは、地元の商用Square Pharmaceuticals Ltd.から購入され、プロバイオティクスは、スウェーデンのヘルスケア会社であるBio Gaiaから購入されます。

研究の詳細: これは、パイロット規模で前向きに実施される無作為化臨床試験です。 この調査は、ミルプール (ダッカ、バングラデシュ) のスラム街で実施されます。 親組織は、クリプトスポリジウム症に関する研究のためのフィールド サイトを維持しています。 これは、クリプトスポリジウム症と子供の栄養失調の両方の発生率が高い地域です。 特定された参加者は、厳密なメンテナンスと、包含および除外基準の遵守によってスクリーニングされます。 研究スタッフは、子供を登録するために患者の法定後見人から同意を得ます。 治験責任医師は、性別を問わず生後 12 か月から 36 か月で、登録前の最後の 1 か月間に抗生物質の使用歴がない 975 人の子供をスクリーニングします。 そのコミュニティの提案された年齢層におけるクリプトスポリジウム感染の有病率は約 8% です。 治験責任医師は、便からの免疫アッセイを使用して診断されたクリプトスポリジウム症の症例を持つ 78 人の参加者を登録します。 治験責任医師は、症状のある子供と無症状の子供の両方を登録します。 治験担当医師は、人口統計学的、社会経済的、人体測定的、臨床的および治療に関するすべての情報を収集します。 子供がどの治療グループに割り当てられるかを決定するために、乱数発生器が使用されます。 4日目（NTZ治療の翌日）、8日目（プロバイオティクス治療の翌日）、90日目（3か月の追跡調査）、および180日目（追跡- 6 か月まで)。 4日目および8日目の糞便中のqPCRによるオーシスト負荷の減少率を試験する。

研究スケジュール：研究訪問ごとにリストされた完全な研究スケジュールの詳細は、以下に記載されています。

入学

• インフォームドコンセントの取得
• 人体測定
• 入学アンケート
• クリプトスポリジウム症の検出の免疫アッセイおよびベースライン寄生虫負荷の定量的 PCR のための糞便収集

介入の開始 (1 日目)

• 入学資格審査
• 人体測定
• 介入を開始する

2日目と3日目の訪問

• 介入の管理
• 有害事象のスクリーニング

訪問 4日目

• 介入の管理
• 有害事象のスクリーニング
• q PCR のための採便

5日目、6日目、7日目の訪問

• 介入の管理
• 有害事象のスクリーニング

訪問 8日目

• 有害事象のスクリーニング
• q PCR のための採便

90日目と180日目の経過観察

• 人体測定
• 糞便採取

介入: 子供は無作為に選択され、7 日間のプロバイオティクスによる 3 日間の NTZ 治療を受けるか、7 日間のプラセボによる 3 日間の NTZ 治療を受けるか. NTZ の用量は 1 日 2 回、3 日間、L reuteri DSM 17938 は 2×10^8 CFU を経口摂取します。 治療グループは、プロバイオティクスを 5 滴、1 日 2 回、連続 7 日間摂取し、プラセボ グループは、プロバイオティクスなしで 3 日間 NTZ を摂取します。 NTZ の投与量は、食事と一緒に 12 時間ごとに 5 ml です。 NTZ 経口懸濁液には 100mg/5ml が含まれています。

この薬 NTZ とプロバイオティクスには、通常、副作用はありません。 以前の研究では、有害事象または重篤な有害事象がないことが示唆されています。

予想されるドロップアウト: 以前の経験から、ドロップアウト率は非常に低いです。 治験責任医師は、各グループで 10% が脱落すると考えました。

サンプルサイズ：これは、合計78人の患者が上記の2つの研究アームに均等に分散されたパイロット研究になります. サンプル サイズ N = 71 人 (各グループで 35 人) は、グループ間の差の両側 Z 検定を使用して、グループ間の割合 (少なくとも) 24% の臨床的に重要な差を検出するのに十分です。検出力 80 %、有意水準 5 %、精度 0.10 の比率。 この 24% の差は、NTZ+プラセボ群の 56% の有病率と NTZ+ プロバイオティクス群の 80% の差を表しています。 10% の離職率を考慮すると、合計サンプル サイズは 78 人 (各グループで 39 人) です。 これはパイロット研究であり、資金が少ないため、精度値は 0.10 と見なされます。

データ分析計画: ラボのテスト値を取得した後、データベースが作成されます。 データは SPSS (バージョン 16) を使用して分析されます。 治療効果は2つのグループで測定されます。 データ分布の性質は、正規分布かどうかをチェックします。 グループ間で 2 つのサンプル平均検定を使用すると、該当する場合はパラメトリック (t 検定) またはノンパラメトリック (マンホイットニー検定) を使用して比較されます。 小児におけるNTZ+プロバイオティクス治療と比較して、NTZ+プラセボによる治療のクリプトスポリジウム感染転帰に違いがあるかどうか研究者を調査し、データ分布に応じてペアパラメトリックテストまたはペアノンパラメトリックテストを行います。 治験責任医師は、栄養失調の子供の治療効果も調べます。 クリプトスポリジウム症に対す​​るさまざまな治療に関連する社会経済的状態、栄養、およびその他の臨床的状態の影響を調べるために、多変量ロジスティック回帰が実行されます。