ガイド付き骨再生から隆起部の保存まで頬側環境に意図的に曝露された PTFE-d バリアの影響

研究デザイン この臨床研究室と並行した、ランダム化された前向き対照研究は、微生物学、X線写真、患者中心の結果、分子生物学的手法を用いて、ガイド付き骨再生から隆起保存まで頬側環境に意図的に曝露されたPTFE-dバリアの影響を判定するものである。骨関連マーカーのパターンとインプラントの安定化。

実験グループ

局所麻酔後、抜歯する歯の周囲で溝内切開を行い、粘膜骨膜弁を剥離して歯槽に隣接する歯槽頂の３ｍｍを適切に露出させた。 その後、必要に応じてペリオトーム、レバー、抜歯器具を使用して、脱臼と歯の除去の処置が低侵襲的な方法で実行されました。 その後、生理食塩水による洗浄が行われ、その後、特定のソフトウェアを使用して、患者は次のいずれかの治療を受けるようにランダムに割り当てられます。

GBR グループ: 抽出後、PTFE-d メンブレン (CytoplastTM Ti-250 チタン強化、前方狭幅 12 mm x 24 mm、Osteogenics、テキサス州ラボック、米国) をハサミでカスタマイズし、ソケット上で 3 ミリメートルを超えるように調整しました。その余白。 次に、Molt デタッチャーを使用して、膜を頬側弁と口蓋弁の下の骨膜下に挿入しました。 膜を安定させるために皮弁の反射を最小限に抑え、意図的に口腔環境にさらされた状態に維持しました。 縫合前に、肺胞上の膜の受動的安定性、および膜に折り目やしわがないことが確認されました。 次に、膜の安定性を高めることを目的として、抽出前の位置で皮弁にアプローチし、PTFE 4-0 糸 (Cytoplast PTFE、CS0618PREM、Osteogenics、ラボック、テキサス州、米国) を使用して交差縫合糸で縫合しました。

非GBRグループ：摘出後、さらなる治療は行われませんでした。 次いで、皮弁を再配置し、5.0 ナイロン糸 (Ethicon、Jonhson's Jonhson、São José dos Campos) で縫合しました。

隣接する歯に適合した一時的な接着プロテーゼが設置され、インプラント埋入の瞬間まで維持されました。 歯肉縁上のバイオフィルム制御は、すべての実験グループで 4 週間、0.12% クロルヘキシジンのうがい薬を使用して実施されました。 術前抗炎症療法（デキサメタゾン 4 mg、単回投与、手術の 1 時間前）および術後鎮痛薬（ジピロン ナトリウム 500 mg、4 時間ごと、3 日間）が必要でした。 患者には、上記の期間中に痛みがある場合にのみ鎮痛薬を服用するよう指示され、摂取した薬の量を記録するよう指示されました。 外科手術の1時間前に2グラムのアモキシシリンによる予防的全身抗菌療法が実施され、同じ薬剤が術後7日間、8時間ごとに500mg処方される。

15日後に縫合糸を除去した。 GBR群では、膜は28日後に麻酔下で除去され（Hoffmann et al. 2007、Carbonell et al. 2014、Cheon et al. 2017）、器具を使った牽引運動で穏やかに除去された。ピンセット。

すべての患者は、歯周メンテナンスを観察し、衛生指導を強化するために、研究期間を通じて毎月モニタリングされました。

インプラントと補綴物の配置 抜歯から 3 か月後、実験グループに関係なく、患者は歯科インプラントを受けました。 したがって、リハビリテーション計画のために成形され、インプラント埋入手術で使用されるサージカルガイドが作成されました。 外科的処置では、患者は局所麻酔を受け、歯槽骨にアクセスして適切に露出するために粘膜骨膜弁が作成されました。 その後、ドリルでインプラントを挿入します。 どちらのグループでも、インプラント上にプロビジョナル プロテーゼを即座に配置する一段階インプラントが実行されました。 すべての手術は同じオペレーター (EKM) によって行われました。

研究の実験段階の後、最終的なプロテーゼが設置されました。 外科手術の縫合は 5.0 ナイロン糸 (Ethicon、Jonhson's Jonhson、São José dos Campos) で行われ、7 日後に抜糸されました。 歯肉縁上のバイオフィルム制御は、手術後 7 日間、0.12% クロルヘキシジンのうがい薬を使用して実施されました。 術前抗炎症療法（デキサメタゾン 4 mg、単回投与、手術の 1 時間前）および術後鎮痛薬（ジピロン ナトリウム 500 mg、4 時間ごと、2 日間）が必要でした。

臨床検査 同じ検査官 (SB) がすべての臨床測定を実行しました。 検査者内キャリブレーションを実行するために、歯科インプラントを提示している非研究者 15 名が選ばれました。 検査者は、24 時間以内にすべての患者のインプラント周囲のプロービング深さを 2 回測定しました。 クラス内相関は 95% の再現性として計算されました。

North Carolina/Colorvue プローブ (Hu-Friedy、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して、ベースライン (抜歯前および GBR 前) と 3 か月後の研究に含まれる歯科インプラントの 4 つの部位で以下のパラメータを測定しました。上：プロービング深さ（PPD/mm）、これは歯周溝/ポケットの底部から歯周縁までの距離でした。クリニカルアタッチメントレベル（CAL/mm）：セメントエナメル接合部から歯周ポケットの底までの距離。

微生物腫の評価 バリア上 (GBR グループ) および修復領域 (非 GBR グループ) に存在するバイオフィルムの微生物学的評価は、抽出の 3 日後と 28 日後 (GBR グループのバリア除去時) に行われました。 ）。

微生物学的分析は、Illumina HiSeq プラットフォームによる 16S 遺伝子の配列決定技術を通じて行われ、同じサンプル内の微生物集団の多様性と存在量を決定することができます。 この評価は、集中型マルチユーザー機能ゲノミクス研究所で実施されます。

患者が報告したパラメータの評価 術後の罹患率および生活の質に関連する症状に関する患者中心のパラメータの評価は、抜歯後 3、7、14、28、35、42 日後にアンケートを使用して実施されます。 、100 mm の水平線に基づいています (Visual Analog Scale; VAS)。

破骨細胞/胚盤葉形成に関連するマーカーの分子評価 歯科インプラントを埋入する外科手術では、ベッドを準備するためのミリング中に、真空ポンプ/外科用吸引器に適合した使い捨て骨コレクターを使用して骨組織が除去されます。 骨組織サンプルの一部は遺伝子発現の分析に使用され、別の部分は破骨細胞/胚盤葉形成に関連するさまざまなバイオマーカーの免疫酵素分析に使用されます。 破骨細胞/胚盤葉形成マーカーに関連するすべての分子解析は、本部機関の歯科研究所で行われます。 収集されたすべての生検材料は、RNA の分解を避けるために特定の溶液に保存されます (RNAlater®、Ambion Inc.、テキサス州オースティン)。

遺伝子発現解析 RNA 抽出: RNA の分解を避けるために、切除された組織は溶液に適切に詰められます (RNAlater®、Ambion Inc.、テキサス州オースティン)。 全 RNA は TRIZOL 試薬法 (Gibco BRL、Life Technologies、Rockville、MD、USA) によって単離されます。 まず、RNAlater 溶液を吸引し、粉砕したサンプルを TRIZOL 試薬に入れ、30 秒間振盪し、室温で 5 分間インキュベートします。 この期間の後、クロロホルム (Sigma、セントルイス、ミズーリ州、米国) を添加し、撹拌し、4℃の温度で 10,000 rpm で 15 分間遠心分離します。 水性部分を別のチューブに移し、イソプロパノールを加え、振盪し、-20℃の温度で20分間インキュベートし、上記と同じ方法で遠心分離します。 このプロセスの後、ペレットが形成され、これを冷却した 75% エタノールで洗浄し、室温で乾燥させます。 RNA サンプルは、ジエチルピロカーボネート (DEPC) で処理した約 50 µl の水に再懸濁し、-70℃ で保存します。 RNA の濃度は分光光度計を使用して測定されます。

DNAase処理を行い、リアルタイムPCR（RT-PCR）を行います。GAPDH（参照遺伝子）、トランスフォーミング増殖因子（TGF-β）、骨シアロタンパク質（BSP）、I型コラーゲン（COL-I）用のプライマー) は、LightCycle 用のプライマーを設計するために特別に開発された pGBRram (Roche Diagnostics GmbH、マンハイム、ドイツ) を利用して設計されます。 ポジティブおよびネガティブコントロールを使用して融解曲線をチェックすることにより、すべてのプライマーの特異性がチェックされます。 反応プロファイルは、装置メーカーが提案する式に従って決定されます。 各「実験」では、水を陰性対照として使用し、反応生成物をメーカー独自の pGBRram (LightCycle Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH) を使用して定量します。 GAPDH は、値を正規化するための参照遺伝子 (ハウスキーピング) として使用されます。

免疫酵素分析 インプラント埋入時に収集した骨組織サンプルの一部を、0.05% Tween-20 を含むリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 400 μL を含む滅菌チューブに入れます。 すべてのサンプルは -20 °C で保存されます。 次に、組織の重量を量り、ホモジナイズし、組織 100mg/mL の最終濃度になるように PBS に溶解します。 ボルテックスで10分間撹拌した後、各サンプルを370gで5分間遠心分離し、上清を収集し、使用するまで-70℃で保存します。 プロテアーゼ活性を避けるため、手順全体を 4 ℃ で実行します。 HBNMAG-51K、ミリポア コーポレーション、米国マサチューセッツ州ビレリカ）、NF-κB 結合活性化因子受容体（RANKL）（HRNKLMAG-31K-01、ミリポア コーポレーション、米国マサチューセッツ州ビレリカ）、オステオネクチン（OSN）および酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ TRAP）（HCMBMAG-22K、Millipore Corporation、ビレリカ、マサチューセッツ州、米国）は、Luminex / MAGpix テクノロジーを使用して測定されます。これにより、同じサンプル内のさまざまなマーカーの存在を確認し、その濃度を絶対的な方法で定量することができます。

この目的のために、分析は、メーカーの指示に従い、上記の高感度パネルを使用して 96 ウェル プレートで実行されます。サンプルは 2 回評価され、得られた値の平均が次の目的に使用されます。各マーカーの濃度を計算します。

断層撮影分析 患者の CT スキャンは、抜歯直後と 3 か月後 (インプラント埋入前) に取得されます。 さまざまな期間に実施された断層撮影検査は、Dental Slice ソフトウェアを使用して、ソケットの抽出と保存後の垂直方向と水平方向の骨損失率を分析します。