Impacto de la barrera de PTFE-d expuesta intencionalmente al ambiente bucal en la regeneración ósea guiada para la preservación de la cresta

Diseño del estudio Este estudio clínico-laboratorial, paralelo, aleatorizado, prospectivo y controlado determinará el impacto de la barrera de PTFE-d expuesta intencionalmente al ambiente bucal en la regeneración ósea guiada para la preservación de la cresta, utilizando resultados microbiológicos, radiográficos, centrados en el paciente, moleculares. Patrón de marcadores relacionados con el hueso y estabilización del implante.

Grupos experimentales

Previa anestesia local, se realizó una incisión intrasulcular alrededor del diente a extraer y se despegó un colgajo mucoperióstico para exposición adecuada de 3 mm de cresta alveolar adyacente al alvéolo. Posteriormente se realizaron procedimientos de luxación y extracción dentaria de forma mínimamente invasiva, utilizando periotomos, palancas y extractores en caso de ser necesario. Posteriormente, se realizó la irrigación con solución salina y luego, mediante un software específico, los pacientes serán asignados aleatoriamente para recibir uno de los siguientes tratamientos:

GBR Group: Después de la extracción, la membrana de PTFE-d (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, EE. UU.) se personalizó con tijeras y se ajustó sobre el alvéolo, superando los tres milímetros de sus márgenes. Luego, la membrana se insertó subperiósticamente debajo de los colgajos bucal y palatino con la ayuda del separador Molt. Se realizó una mínima reflexión del colgajo para estabilizar la membrana, que se mantuvo intencionalmente expuesta al medio bucal. Antes de suturar se comprobó la estabilidad pasiva de la membrana sobre el alvéolo, así como la ausencia de pliegues o arrugas en la membrana. Luego se abordaron los colgajos en posición pre-extracción y se suturaron con puntos cruzados, buscando aumentar la estabilidad de la membrana, con hilo de PTFE 4-0 (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA).

Grupo sin GBR: después de la extracción, no se realizó ningún otro tratamiento. Luego se reposicionaron los colgajos y se suturaron con hilo de nylon 5.0 (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

Se instalaron prótesis adhesivas temporales adaptadas a los dientes adyacentes y se mantuvieron hasta el momento de la colocación del implante. El control del biofilm supragingival se realizó con colutorios de clorhexidina al 0,12% durante un periodo de 4 semanas en todos los grupos experimentales. Se indicó tratamiento antiinflamatorio prequirúrgico (dexametasona 4 mg, dosis única, 1 hora antes del procedimiento) y analgésico postoperatorio (dipirona sódica 500 mg, cada 4 horas, durante 3 días). Los pacientes fueron instruidos para tomar medicamentos analgésicos solo en caso de dolor durante el período descrito anteriormente, siendo instruidos para registrar la cantidad de medicamentos ingeridos. Se realizó terapia antimicrobiana sistémica profiláctica 1 hora antes de los procedimientos quirúrgicos con 2 gramos de Amoxicilina y se prescribirá la misma medicación durante 7 días en el postoperatorio, 500 mg cada 8 horas.

Las suturas se retiraron a los 15 días. En el grupo GBR, la membrana se retiró después del período de 28 días, bajo anestesia (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), siendo retirada suavemente con el movimiento de tracción con la ayuda de un pinzas.

Todos los pacientes fueron monitoreados mensualmente, durante todo el período de estudio, para observar el mantenimiento periodontal y reforzar las instrucciones de higiene.

Colocación de Implantes y Prótesis Tres meses después de la extracción, independientemente del grupo experimental, los pacientes recibieron implantes dentales. Por lo tanto, se moldearon para la planificación de la rehabilitación y se fabricaron guías quirúrgicas para ser utilizadas en la cirugía de colocación de implantes. En el acto quirúrgico los pacientes fueron sometidos a anestesia local y se realizaron colgajos mucoperiósticos para el acceso y exposición adecuada del hueso alveolar. Posteriormente, se realizó un fresado para insertar los implantes. En ambos grupos se realizaron implantes de una sola etapa, con colocación inmediata de prótesis provisionales sobre implantes. Todas las cirugías fueron realizadas por el mismo operador (EKM).

Tras la fase experimental del estudio, se instalaron las prótesis definitivas. Las suturas de los procedimientos quirúrgicos fueron realizadas con hilo de nylon 5.0 (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) y fue retirada a los 7 días. El control del biofilm supragingival se realizó con enjuagues bucales de clorhexidina al 0,12% durante un período de 7 días después de la cirugía. Se indicó tratamiento antiinflamatorio prequirúrgico (dexametasona 4 mg, dosis única, 1 hora antes del procedimiento) y analgésico postoperatorio (dipirona sódica 500 mg, cada 4 horas, durante 2 días).

Examen clínico El mismo examinador (SB) realizó todas las mediciones clínicas. Para realizar la calibración intraexaminador, se eligieron 15 personas ajenas al estudio que presentaban implantes dentales. El examinador midió la profundidad de sondaje periimplantario de todos los individuos dos veces en un período de 24 horas. La correlación intraclase se calculó como una reproducibilidad del 95%.

Usando una sonda de Carolina del Norte/Colorvue (Hu-Friedy, Chicago, IL, EE. UU.), se midieron los siguientes parámetros en cuatro sitios de los implantes dentales incluidos en el estudio al inicio (antes de la extracción y GBR) y a los 3 meses de seguimiento. arriba: profundidad de sondaje (PPD/mm), que era la distancia desde la parte inferior del surco/bolsa periodontal hasta el margen periodontal; Nivel de inserción clínica (CAL/mm), que era la distancia desde la unión cemento-esmalte hasta el fondo de la bolsa periodontal.

Evaluación del microbioma Las evaluaciones microbiológicas del biofilm presente en las barreras (Grupo GBR) y en el área de reparación (Grupo no GBR) se realizaron después de 3 días de extracción y después de 28 días (en el momento de la eliminación de la barrera en el grupo GBR). ).

El análisis microbiológico se realizará mediante la Técnica de Secuenciación del gen 16S por la plataforma Illumina HiSeq, que permite determinar la diversidad y abundancia de la población microbiana en una misma muestra. Esta evaluación se realizará en el Laboratorio Centralizado Multiusuario de Genómica Funcional.

Evaluación de parámetros informados por el paciente La evaluación de parámetros centrados en el paciente en cuanto a síntomas relacionados con la morbilidad y calidad de vida en el postoperatorio se realizará a los 3, 7, 14, 28, 35 y 42 días de la extracción, mediante cuestionarios , basado en una línea horizontal de 100 mm (Escala Visual Analógica; EVA).

Evaluación molecular de marcadores relacionados con osteoclasto/blastogénesis En el procedimiento quirúrgico de colocación de implantes dentales, durante el fresado para preparar el lecho, se extraerá tejido óseo mediante un recolector de hueso desechable adaptado a la bomba de vacío/aspirador quirúrgico. Parte de la muestra de tejido óseo se utilizará para análisis de expresión génica y otra parte para análisis inmunoenzimático de diferentes biomarcadores relacionados con osteoclastos/blastogénesis. Todos los análisis moleculares relacionados con los marcadores de osteoclastos/blastogénesis se realizarán en el Laboratorio de Investigaciones Odontológicas de la Institución Sede. Todas las biopsias recolectadas se almacenarán en una solución específica para evitar la degradación del ARN (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Análisis de expresión génica Extracción de ARN: Los tejidos extraídos se empaquetarán adecuadamente en una solución para evitar la degradación del ARN (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). El ARN total se aislará mediante el método del reactivo TRIZOL (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, EE. UU.). Primero, se aspirará la solución de RNAlater y luego se colocará la muestra triturada en el reactivo TRIZOL, se agitará durante 30 segundos y se incubará durante 5 minutos a temperatura ambiente. Pasado este tiempo se añadirá cloroformo (Sigma, St. Louis, MO, USA), se agitará y centrifugará a 10.000 rpm durante 15 minutos a una temperatura de 4oC. La porción acuosa se pasará a otro tubo al que se le añadirá isopropanol, se agitará, se incubará durante 20 minutos a una temperatura de -20oC y se centrifugará de la misma manera que se ha descrito anteriormente. Después de este proceso, se formará un sedimento, que se lavará con etanol al 75 % enfriado y se secará a temperatura ambiente. Las muestras de ARN se resuspenderán en aproximadamente 50 µl de agua tratada con dietilpirocarbonato (DEPC) y se almacenarán a -70 °C. La concentración de ARN se determinará utilizando un espectrofotómetro.

Se realizará tratamiento con ADNasa y PCR en tiempo real (RT-PCR). Cebadores para GAPDH (gen de referencia), Factor de crecimiento transformante (TGF-β), Sialoproteína ósea (BSP) y Colágeno tipo I (COL-I ) se diseñará con la ayuda de un pGBRram desarrollado específicamente para diseñar cebadores para LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania). Se comprobará la especificidad de todos los cebadores comprobando la curva de fusión con controles positivos y negativos. El perfil de reacción se determinará según la fórmula sugerida por el fabricante del equipo. Para cada una de las "corridas", se utilizará agua como control negativo, y el producto de las reacciones se cuantificará utilizando el pGBRram (Software LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH) del propio fabricante. GAPDH se utilizará como gen de referencia (mantenimiento) para la normalización de valores.

Análisis inmunoenzimático Parte de la muestra de tejido óseo recolectada en el momento de la colocación del implante se colocará en tubos estériles que contienen 400 μL de solución salina tamponada con fosfato (PBS) con Tween-20 al 0,05 %. Todas las muestras se almacenarán a -20 °C. Luego, el tejido será pesado, homogeneizado y disuelto en PBS hasta una concentración final de 100mg de tejido/mL. Después de agitar en Vortex durante 10 minutos, cada muestra se centrifugará a 370 g durante 5 minutos, se recogerá el sobrenadante y se almacenará a -70 °C hasta su uso. Para evitar la actividad de la proteasa, todo el procedimiento se realizará a 4 °C. Dickkopf (DKK1), Esclerostina (SOST), Factor de necrosis tumoral (TNF-α), Osteoprotegerina (OPG), Osteocalcina (OC), Osteopontina (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, EE. UU.), receptor del activador de unión a NF-κB (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, EE. UU.), osteonectina (OSN) y fosfatasa ácida resistente al tartrato ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, EE. UU.), se determinará utilizando la tecnología Luminex/MAGpix, que permite determinar la presencia y cuantificar de forma absoluta la concentración de diferentes marcadores en una misma muestra.

Para ello, los análisis se realizarán en placas de 96 pocillos, con la ayuda de los paneles de alta sensibilidad mencionados anteriormente, siguiendo las instrucciones del fabricante. Las muestras se evaluarán por duplicado y se utilizará la media de los valores obtenidos para calcular las concentraciones de cada marcador.

Análisis tomográfico Se obtendrán tomografías computarizadas de los pacientes inmediatamente después de la extracción y 3 meses después (antes de la colocación del implante). Se analizarán los exámenes tomográficos realizados en los diferentes períodos para determinar la tasa de pérdida ósea después de la extracción y preservación del alvéolo, tanto vertical como horizontalmente, a través del software Dental Slice.