Suun ympäristölle tarkoituksellisesti altistetun PTFE-d-esteen vaikutus ohjatussa luun regeneraatiossa harjanteen säilyttämiseen

Tutkimuksen suunnittelu Tässä kliinis-laboratorio-, rinnakkais-, satunnaistetussa, prospektiivisessa ja kontrolloidussa tutkimuksessa määritetään suun ympäristölle tarkoituksellisesti altistetun PTFE-d-esteen vaikutus ohjatussa luun regeneraatiossa harjanteen säilymiseen käyttämällä mikrobiologisia, radiografisia, potilaskeskeisiä tuloksia, molekyylitasoa. luuhun liittyvien merkkiaineiden kuvio ja implantin stabilointi.

Kokeiluryhmät

Paikallisen anestesian jälkeen poistettavan hampaan ympärille tehtiin intrasulkulaarinen viilto ja mukoperiosteaalinen läppä irrotettiin, jotta keuhkorakkuloiden vieressä olevasta alveolaarisesta harjasta paljastettiin riittävästi 3 mm. Sen jälkeen sijoiltaan ja hampaiden poistotoimenpiteet suoritettiin minimaalisesti invasiivisella tavalla käyttäen periotoomeja, vipuja ja poistolaitteita tarvittaessa. Myöhemmin suoritettiin kastelu suolaliuoksella, minkä jälkeen potilaat jaetaan satunnaisesti saamaan yksi seuraavista hoidoista erityistä ohjelmistoa käyttäen:

GBR-ryhmä: Uuton jälkeen PTFE-d-kalvo (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) mukautettiin saksilla ja säädettiin kannan yli yli kolme millimetriä sen marginaalit. Sitten kalvo asetettiin subperiostaalisesti poski- ja suulakiläpän alle Molt-irrottimen avulla. Minimaalinen läppäheijastus suoritettiin stabiloimaan kalvo, joka pidettiin tarkoituksella alttiina suun ympäristölle. Ennen ompelemista varmistettiin kalvon passiivinen stabiilisuus keuhkorakkuloiden päällä, samoin kuin poimujen tai ryppyjen puuttuminen kalvossa. Sitten läppä lähestyttiin uuttamisasennossa ja ommeltiin ristikkäisillä ompeleilla PTFE 4-0 -langalla (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) kalvon stabiilisuuden lisäämiseksi.

Ei-GBR-ryhmä: Uuton jälkeen jatkokäsittelyä ei suoritettu. Läpät asetettiin sitten uudelleen ja ommeltiin 5,0 nylonlangalla (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

Viereisiin hampaisiin sovitetut väliaikaiset liimaproteesit asennettiin ja niitä huollettiin implantin asettamiseen asti. Supragingivaalinen biofilmikontrolli suoritettiin 0,12 % klooriheksidiinin suuvedellä 4 viikon ajan kaikissa koeryhmissä. Ennen leikkausta anti-inflammatorinen hoito (deksametasoni 4 mg, kerta-annos, 1 tunti ennen toimenpidettä) ja leikkauksen jälkeiset analgeetit (natriumdipyroni 500 mg, 4 tunnin välein, 3 päivän ajan) oli tarkoitettu. Potilaita ohjeistettiin ottamaan kipulääkkeitä vain kivun sattuessa yllä kuvatun ajanjakson aikana ja ohjeistettiin kirjaamaan nieltyjen lääkkeiden määrät. Ennaltaehkäisevä systeeminen antimikrobinen hoito suoritettiin 1 tunti ennen leikkausta 2 grammalla amoksisilliinia ja samaa lääkettä määrätään 7 päivän ajan leikkauksen jälkeisenä aikana, 500 mg 8 tunnin välein.

Ompeleet poistettiin 15 päivän kuluttua. GBR-ryhmässä kalvo poistettiin 28 päivän jakson jälkeen nukutuksessa (Hoffmann ym. 2007, Carbonell ym. 2014, Cheon ym. 2017), ja se poistettiin kevyesti vetoliikkeellä pinsetit.

Kaikkia potilaita seurattiin kuukausittain koko tutkimusjakson ajan periodontaalihuollon ja hygieniaohjeiden vahvistamiseksi.

Implanttien ja proteesien asettaminen Kolme kuukautta poiston jälkeen potilaat saivat koeryhmästä riippumatta hammasimplantteja. Siksi ne valettiin kuntoutuksen suunnittelua varten ja tehtiin kirurgiset oppaat käytettäviksi implantin asennuskirurgiassa. Kirurgisessa toimenpiteessä potilaat alistettiin paikallispuudutukseen ja mukoperiosteaaliset läpät tehtiin pääsyä ja riittävää altistamista varten alveolaariseen luuhun. Sen jälkeen suoritettiin poraus implanttien asentamiseksi. Molemmissa ryhmissä suoritettiin yksivaiheiset implantit, jolloin väliaikaiset proteesit asetettiin välittömästi implantteihin. Kaikki leikkaukset teki sama operaattori (EKM).

Tutkimuksen kokeellisen vaiheen jälkeen lopulliset proteesit asennettiin. Kirurgisten toimenpiteiden ompeleet suoritettiin 5,0 nylonlangalla (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) ja se poistettiin 7 päivän kuluttua. Supragingivaalinen biofilmikontrolli suoritettiin 0,12-prosenttisella klooriheksidiinillä 7 päivän ajan leikkauksen jälkeen. Ennen leikkausta anti-inflammatorinen hoito (deksametasoni 4 mg, kerta-annos, 1 tunti ennen toimenpidettä) ja postoperatiiviset kipulääkkeet (natriumdipyroni 500 mg, 4 tunnin välein, 2 päivän ajan) oli tarkoitettu.

Kliininen tutkimus Sama tutkija (SB) suoritti kaikki kliiniset mittaukset. Tutkijan sisäisen kalibroinnin suorittamiseksi valittiin 15 tutkimukseen kuulumatonta henkilöä, jotka esittivät hammasimplantteja. Tutkija mittasi kaikkien yksilöiden implanttia ympäröivän koetussyvyyden kahdesti 24 tunnin aikana. Luokan sisäinen korrelaatio laskettiin 95 %:n toistettavuudeksi.

Käyttämällä North Carolina/Colorvue -koetinta (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) mitattiin seuraavat parametrit neljästä tutkimukseen sisältyvien hammasimplanttien kohdasta lähtötilanteessa (ennen ekstrahointia ja GBR:tä) ja 3 kuukauden kuluttua. ylös: Probing Depth (PPD/mm), joka oli etäisyys parodontaalisen uurteen/taskun pohjasta periodontaaliseen reunaan; Clinical Attachment Level (CAL/mm), joka oli etäisyys sementtikiilteen liitoskohdasta periodontaalisen taskun pohjaan.

Mikrobiooman arviointi Esteillä (GBR-ryhmä) ja korjausalueella (ei-GBR-ryhmä) olevan biofilmin mikrobiologiset arvioinnit tehtiin 3 päivän uuton jälkeen ja 28 päivän kuluttua (esteen poiston yhteydessä GBR-ryhmässä) ).

Mikrobiologinen analyysi tehdään Illumina HiSeq -alustan 16S-geenin sekvensointitekniikalla, jonka avulla voidaan määrittää mikrobipopulaation monimuotoisuus ja runsaus samassa näytteessä. Tämä arviointi suoritetaan funktionaalisen genomiikan keskitetyssä monikäyttäjälaboratoriossa.

Potilaan ilmoittamien parametrien arviointi Potilaskeskeisten parametrien arviointi leikkauksen jälkeisen ajanjakson sairastuvuuteen ja elämänlaatuun liittyvistä oireista suoritetaan 3, 7, 14, 28, 35 ja 42 päivän uuttopäivän jälkeen kyselylomakkeilla. , joka perustuu 100 mm:n vaakaviivaan (Visual Analog Scale; VAS).

Osteoklastiin/blastogeneesiin liittyvien markkerien molekyyliarviointi Hammasimplanttien asettamisen kirurgisessa toimenpiteessä alustan valmistelevan jyrsinnän aikana luukudos poistetaan käyttämällä kertakäyttöistä luunkerääjää, joka on sovitettu tyhjiöpumppuun/kirurgiseen imulaitteeseen. Osa luukudosnäytteestä käytetään geeniekspression analysointiin ja osa erilaisten osteoklastien/blastogeneesiin liittyvien biomarkkerien immunoentsymaattiseen analyysiin. Kaikki osteoklasti-/blastogeneesimarkkereihin liittyvät molekyylianalyysit tehdään pääkonttorilaitoksen Hammastutkimuslaboratoriossa. Kaikki kerätyt biopsiat säilytetään spesifisessä liuoksessa RNA:n hajoamisen välttämiseksi (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Geeniekspressioanalyysi RNA:n uuttaminen: Poistetut kudokset pakataan kunnolla liuokseen RNA:n hajoamisen välttämiseksi (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). Kokonais-RNA eristetään TRIZOL-reagenssimenetelmällä (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA). Ensin RNAlater-liuos imetään ja murskattu näyte laitetaan sitten TRIZOL-reagenssiin, ravistellaan 30 sekuntia ja inkuboidaan 5 minuuttia huoneenlämpötilassa. Tämän ajanjakson jälkeen lisätään kloroformia (Sigma, St. Louis, MO, USA), sekoitetaan ja sentrifugoidaan 10 000 rpm:ssä 15 minuuttia 4 °C:n lämpötilassa. Vesipitoinen osa siirretään toiseen putkeen, johon lisätään isopropanolia, ravistellaan, inkuboidaan 20 minuuttia -20 °C:n lämpötilassa ja sentrifugoidaan samalla tavalla kuin edellä on kuvattu. Tämän prosessin jälkeen muodostuu pelletti, joka pestään jäähdytetyllä 75 % etanolilla ja kuivataan huoneenlämpötilassa. RNA-näytteet suspendoidaan uudelleen noin 50 µl:aan vettä, joka on käsitelty dietyylipyrokarbonaatilla (DEPC) ja säilytetään -70 oC:ssa. RNA:n pitoisuus määritetään käyttämällä spektrofotometriä.

DNAaasikäsittely suoritetaan ja reaaliaikainen PCR (RT-PCR). Alukkeet GAPDH:lle (referenssigeeni), transformoivalle kasvutekijälle (TGF-β), luun sialoproteiinille (BSP) ja kollageenille tyyppi I (COL-I). ) suunnitellaan pGBRramin avulla, joka on kehitetty erityisesti LightCyclerin alukkeiden suunnitteluun (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Saksa). Kaikkien alukkeiden spesifisyys tarkistetaan tarkistamalla sulamiskäyrä käyttämällä positiivisia ja negatiivisia kontrolleja. Reaktioprofiili määritetään laitteen valmistajan ehdottaman kaavan mukaan. Jokaisessa "ajossa" käytetään vettä negatiivisena kontrollina, ja reaktioiden tuote kvantifioidaan käyttämällä valmistajan omaa pGBRramia (LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH). GAPDH:ta käytetään referenssigeeninä (housekeeping) arvojen normalisoinnissa.

Immunoentsymaattinen analyysi Osa implantin asettamisen yhteydessä kerätystä luukudosnäytteestä sijoitetaan steriileihin putkiin, jotka sisältävät 400 µl fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) ja 0,05 % Tween-20:tä. Kaikki näytteet säilytetään -20 °C:ssa. Sitten kudos punnitaan, homogenisoidaan ja liuotetaan PBS:ään lopulliseen konsentraatioon 100 mg kudosta/ml. Kun on sekoitettu Vortexissä 10 minuuttia, jokaista näytettä sentrifugoidaan 370 g:ssä 5 minuuttia, supernatantti kerätään ja säilytetään -70 °C:ssa käyttöön asti. Proteaasiaktiivisuuden välttämiseksi koko toimenpide suoritetaan 4 °C:ssa. Dickkopf (DKK1), Sclerostin (SOST), Tuumorinekroositekijä (TNF-α), Osteoprotegeriini (OPG), Osteokalsiini (OC), Osteopontiini (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), NF-KB-sitoutumisaktivaattorireseptori (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), osteonektiini (OSN) ja tartraattiresistentti happofosfataasi ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), määritetään Luminex/MAGpix-tekniikalla, jonka avulla voidaan määrittää eri merkkiaineiden läsnäolo ja kvantifioida absoluuttisella tavalla samassa näytteessä olevien merkkiaineiden pitoisuus.

Tätä tarkoitusta varten analyysit suoritetaan 96-kuoppaisille levyille, edellä mainittujen erittäin herkkien paneelien avulla valmistajan ohjeiden mukaisesti. Näytteet arvioidaan kahtena kappaleena ja saatujen arvojen keskiarvoa käytetään laske kunkin markkerin pitoisuudet.

Tomografinen analyysi Potilaiden CT-skannaukset otetaan välittömästi poistamisen jälkeen ja 3 kuukautta myöhemmin (ennen implantin asettamista). Eri ajanjaksoina tehdyt tomografiset tutkimukset analysoidaan Dental Slice -ohjelmiston avulla luukadon nopeuden suhteen hylsyn poistamisen ja säilytyksen jälkeen sekä pysty- että vaakasuunnassa.