Влияние барьера PTFE-d, преднамеренно подвергаемого воздействию щечной среды при направленной костной регенерации, на сохранение альвеолярного отростка

Дизайн исследования Это клинико-лабораторное, параллельное, рандомизированное, проспективное и контролируемое исследование будет определять влияние барьера PTFE-d, преднамеренно подвергаемого воздействию щечной среды, на направленную регенерацию кости для сохранения альвеолярного гребня с использованием микробиологических, рентгенологических, ориентированных на пациента результатов, молекулярных исследований. набор маркеров, связанных с костью, и стабилизация имплантата.

Экспериментальные группы

После местной анестезии был сделан внутрибороздковый разрез вокруг удаляемого зуба и отслоен слизисто-надкостничный лоскут для адекватного обнажения 3 мм альвеолярного гребня, прилегающего к альвеоле. После этого малоинвазивным способом выполняли операции по вывиху и удалению зубов, при необходимости с использованием периотомов, рычагов и экстракторов. Затем была проведена ирригация физиологическим раствором, а затем с помощью специального программного обеспечения пациенты будут случайным образом распределены для получения одного из следующих видов лечения:

GBR Group: После экстракции мембрана PTFE-d (CytoplastTM Ti-250, армированная титаном, Anterior Narrow 12 мм x 24 мм, Osteogenics, Лаббок, Техас, США) была адаптирована ножницами и отрегулирована над гнездом, превышающим три миллиметра от его окраины. Затем с помощью съемника Molt субпериостально под щечный и небный лоскуты вводили мембрану. Минимальное отражение лоскута было выполнено для стабилизации мембраны, которую намеренно поддерживали в контакте с ротовой средой. Перед наложением швов подтверждали пассивную стабильность мембраны над альвеолой, а также отсутствие складок и складок в мембране. Затем к лоскутам подходили в положении перед экстракцией и сшивали перекрестными швами с целью повышения стабильности мембраны нитью PTFE 4-0 (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Лаббок, Техас, США).

Группа без GBR: после экстракции дальнейшее лечение не проводилось. Затем лоскуты были перемещены и ушиты нейлоновой нитью 5,0 (Ethicon, Jonhson’s Jonhson, São José dos Campos).

Были установлены временные адгезивные протезы, адаптированные к соседним зубам, которые сохранялись до момента установки имплантата. Борьба с наддесневой биопленкой осуществлялась полосканием рта 0,12% хлоргексидином в течение 4 недель во всех экспериментальных группах. Показана предоперационная противовоспалительная терапия (дексаметазон 4 мг однократно за 1 ч до процедуры) и послеоперационные анальгетики (натрий дипирон 500 мг каждые 4 ч в течение 3 дней). Пациентов проинструктировали принимать анальгетики только в случае боли в течение периода, описанного выше, и проинструктировали регистрировать количество проглоченных лекарств. Профилактическую системную антимикробную терапию проводят за 1 час до оперативных вмешательств 2 г амоксициллина и тот же препарат назначат в течение 7 дней в послеоперационном периоде по 500 мг каждые 8 ​​часов.

Швы сняты через 15 дней. В группе НКР мембрану удаляли через 28 дней под анестезией (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), осторожно удаляя тракционным движением с помощью пинцет.

Все пациенты находились под ежемесячным наблюдением в течение всего периода исследования для соблюдения ухода за пародонтом и закрепления инструкций по гигиене.

Установка имплантатов и протезов Через три месяца после удаления, независимо от экспериментальной группы, пациентам были установлены дентальные имплантаты. Поэтому они были отлиты для планирования реабилитации, а хирургические шаблоны были изготовлены для использования в операции по установке имплантатов. Во время хирургического вмешательства пациентам проводили местную анестезию и изготавливали слизисто-надкостничные лоскуты для доступа и адекватного обнажения альвеолярной кости. После этого было выполнено сверление для установки имплантатов. В обеих группах выполнялась одномоментная имплантация с немедленной установкой временных протезов на имплантаты. Все операции выполнял один и тот же оператор (ЭКМ).

После экспериментального этапа исследования были установлены постоянные протезы. Швы хирургических процедур были выполнены нейлоновой нитью 5,0 (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) и были удалены через 7 дней. Контроль наддесневой биопленки осуществлялся полосканием рта 0,12% раствором хлоргексидина в течение 7 дней после операции. Показана предоперационная противовоспалительная терапия (дексаметазон 4 мг однократно за 1 ч до процедуры) и послеоперационные анальгетики (натрий дипирон 500 мг каждые 4 ч в течение 2 сут).

Клиническое обследование Один и тот же исследователь (SB) выполнял все клинические измерения. Для проведения внутриэкспертной калибровки были выбраны 15 неучаствовавших в исследовании лиц с зубными имплантатами. Исследователь измерял глубину зондирования вокруг имплантата у всех людей дважды в течение 24 часов. Внутриклассовую корреляцию рассчитывали как воспроизводимость 95%.

С помощью датчика North Carolina/Colorvue (Hu-Friedy, Чикаго, Иллинойс, США) были измерены следующие параметры на четырех участках зубных имплантатов, включенных в исследование, в начале исследования (до экстракции и НКР) и через 3 месяца: вверху: глубина зондирования (PPD/мм), которая представляла собой расстояние от дна периодонтальной борозды/кармана до пародонтального края; Клинический уровень прикрепления (CAL/мм), который представлял собой расстояние от соединения цемента с эмалью до дна пародонтального кармана.

Оценка микробиомы Микробиологические оценки биопленки, присутствующей на барьерах (группа НКР) и в области ремонта (группа не НКР), были сделаны через 3 дня после экстракции и через 28 дней (во время удаления барьера в группе НКР). ).

Микробиологический анализ будет проводиться с помощью метода секвенирования гена 16S на платформе Illumina HiSeq, что позволяет определить разнообразие и численность микробной популяции в одном и том же образце. Эта оценка будет проводиться в Централизованной многопользовательской лаборатории функциональной геномики.

Оценка параметров, сообщаемых пациентом. Оценка параметров, ориентированных на пациента, касающихся симптомов, связанных с заболеваемостью и качеством жизни в послеоперационном периоде, будет проводиться через 3, 7, 14, 28, 35 и 42 дня после удаления с использованием опросников. , исходя из горизонтальной линии 100 мм (визуальная аналоговая шкала; ВАШ).

Молекулярная оценка маркеров, связанных с остеокластами / бластогенезом. При хирургической процедуре установки дентальных имплантатов, во время фрезерования для подготовки ложа, костная ткань будет удалена с помощью одноразового костного коллектора, адаптированного к вакуумному насосу / хирургическому аспиратору. Часть образца костной ткани будет использована для анализа экспрессии генов, а другая часть – для иммуноферментного анализа различных биомаркеров, связанных с остеокластами/бластогенезом. Все молекулярные анализы, связанные с маркерами остеокластов/бластогенеза, будут проводиться в лаборатории стоматологических исследований головного учреждения. Все собранные биопсии будут храниться в специальном растворе, чтобы избежать деградации РНК (RNAlater®, Ambion Inc., Остин, Техас).

Анализ экспрессии генов Экстракция РНК: удаленные ткани должным образом упаковываются в раствор, чтобы избежать деградации РНК (RNAlater®, Ambion Inc., Остин, Техас). Общая РНК будет выделена методом реагентов TRIZOL (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA). Сначала отсасывают раствор RNAlater, затем измельченный образец помещают в реагент TRIZOL, встряхивают в течение 30 секунд и инкубируют в течение 5 минут при комнатной температуре. По истечении этого периода добавляется хлороформ (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), перемешивается и центрифугируется при 10000 об/мин в течение 15 минут при температуре 4oC. Водную часть переносят в другую пробирку, в которую добавляют изопропанол, встряхивают, инкубируют в течение 20 минут при температуре -20°С и центрифугируют так же, как описано выше. После этого процесса сформируется осадок, который будет промыт охлажденным 75% этанолом и высушен при комнатной температуре. Образцы РНК ресуспендируют примерно в 50 мкл воды, обработанной диэтилпирокарбонатом (DEPC), и хранят при температуре -70°C. Концентрацию РНК определяют с помощью спектрофотометра.

Будет проведена обработка ДНКазой и ПЦР в реальном времени (RT-PCR). ) будет разработан с помощью pGBRram, разработанного специально для разработки праймеров для LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Мангейм, Германия). Все праймеры будут проверены на специфичность путем проверки кривой плавления с использованием положительных и отрицательных контролей. Профиль реакции будет определяться в соответствии с формулой, предложенной производителем оборудования. Для каждого из «прогонов» вода будет использоваться в качестве отрицательного контроля, а продукт реакций будет количественно определен с использованием собственного pGBRram производителя (программное обеспечение для относительной количественной оценки LightCycler - Roche Diagnostics GmbH). GAPDH будет использоваться в качестве эталонного гена (хозяйственного обслуживания) для нормализации значений.

Иммуноферментный анализ Часть образца костной ткани, собранного во время установки имплантата, будет помещена в стерильные пробирки, содержащие 400 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS) с 0,05% Tween-20. Все образцы будут храниться при температуре -20°C. Затем ткань взвешивают, гомогенизируют и растворяют в PBS до конечной концентрации 100 мг ткани/мл. После перемешивания в вортексе в течение 10 минут каждый образец центрифугируют при 370 g в течение 5 минут, надосадочную жидкость собирают и хранят при -70°C до использования. Во избежание активности протеазы всю процедуру проводят при 4°C. Диккопф (DKK1), склеростин (SOST), фактор некроза опухоли (TNF-α), остеопротегерин (OPG), остеокальцин (OC), остеопонтин (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), рецептор активатора связывания NF-κB (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), остеонектин (OSN) и тартратрезистентная кислая фосфатаза ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Биллерика, Массачусетс, США), будет определяться с использованием технологии Luminex/MAGpix, позволяющей определять наличие и количественно определять концентрацию различных маркеров в одном и том же образце.

С этой целью анализы будут выполняться в 96-луночных планшетах с помощью упомянутых выше высокочувствительных панелей в соответствии с инструкциями производителя. рассчитать концентрации каждого маркера.

Томографический анализ КТ пациентов будут получены сразу после удаления и через 3 месяца (до установки имплантата). Томографические исследования, выполненные в разные периоды, будут проанализированы на предмет скорости потери костной массы после удаления и сохранения лунки, как по вертикали, так и по горизонтали, с помощью программного обеспечения Dental Slice.