치조골 보존에 대한 가이드 골 재생에서 협측 환경에 의도적으로 노출된 PTFE-d 장벽의 영향

연구 설계 이 임상-실험실, 병렬, 무작위, 전향적 및 통제 연구는 미생물학적, 방사선학적, 환자 중심 결과, 분자적, 분자적 뼈 관련 마커의 후두둑 및 임플란트 안정화.

실험군

국소마취 후 발치하고자 하는 치아 주위에 열구내 절개를 하고 치조에 인접한 치조능선의 3mm를 충분히 노출시키기 위해 점막골막피판을 분리하였다. 이후 필요에 따라 치주절제, 지렛대, 발치기를 이용하여 최소침습적인 방법으로 탈구 및 발치술을 시행하였다. 그 후, 식염수 세척을 수행한 다음 특정 소프트웨어를 사용하여 환자를 무작위로 배정하여 다음 치료 중 하나를 받도록 합니다.

GBR 그룹: 발치 후 PTFE-d 멤브레인(CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12mm x 24mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA)을 가위로 맞춤 제작하고 소켓에서 3mm를 초과하도록 조정했습니다. 그것의 여백. 그런 다음 Molt detacher를 사용하여 협측 및 구개측 플랩 아래에 멤브레인을 골막하로 삽입했습니다. 의도적으로 구강 환경에 노출된 멤브레인을 안정화하기 위해 최소한의 플랩 반사를 수행했습니다. 봉합 전에 폐포에 대한 막의 수동적 안정성과 막에 접힘이나 주름이 없음을 확인했습니다. 그런 다음 플랩을 사전 추출 위치에서 접근하고 PTFE 4-0 스레드(Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA)를 사용하여 멤브레인의 안정성을 높이기 위해 교차 봉합사로 봉합했습니다.

Non-GBR군: 적출 후 추가 처리는 하지 않았다. 플랩을 재배치하고 5.0 나일론 실로 봉합했습니다(Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

인접 치아에 적합한 임시 접착 보철물을 설치하고 임플란트 식립 순간까지 유지했습니다. 모든 실험군에서 4주 동안 0.12% 클로르헥시딘 구강청결제로 치은연상 바이오필름 제어를 수행했습니다. 수술 전 소염 요법(dexamethasone 4 mg, 시술 1시간 전 단회 투여)과 수술 후 진통제(sodium dipyrone 500 mg, 4시간 간격, 3일간)를 지시하였다. 환자는 위에서 설명한 기간 동안 통증이 있는 경우에만 진통제를 복용하도록 지시받았고, 섭취한 약물의 양을 기록하도록 지시받았다. 예방적 전신 항균 요법은 수술 1시간 전에 Amoxicillin 2g으로 시행하였으며, 수술 후 7일 동안 동일한 약물을 8시간마다 500mg씩 처방한다.

봉합사는 15일 후에 제거하였다. GBR군에서는 28일 경과 후 마취 상태에서 막을 제거하였고(Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), 족집게.

치주 유지 관리를 관찰하고 위생 지침을 강화하기 위해 연구 기간 동안 모든 환자를 매월 모니터링했습니다.

Implants and Prostheses Placement 발치 3개월 후, 실험군에 관계없이 환자들은 치과 임플란트를 받았다. 따라서 재활계획을 위해 성형하고 임플란트 식립술에 사용할 수 있도록 수술가이드를 제작하였다. 수술 과정에서 환자는 국소 마취를 받고 치조골의 접근과 적절한 노출을 위해 점막 골막 피판을 만들었습니다. 그 후 임플란트 식립을 위해 드릴링을 진행하였습니다. 두 그룹 모두 임플란트에 임시 보철물을 즉시 배치하는 단일 단계 임플란트가 수행되었습니다. 모든 수술은 동일한 시술자(EKM)에 의해 수행되었습니다.

연구의 실험 단계 후 최종 보철물이 설치되었습니다. 수술의 봉합은 5.0 나일론사(Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos)로 시행하였고 7일 후에 제거하였다. 수술 후 7일 동안 0.12% 클로르헥시딘 구강청결제로 치은연상균막 조절을 시행하였다. 수술 전 소염 요법(dexamethasone 4mg, 시술 1시간 전 단회 투여)과 수술 후 진통제(sodium dipyrone 500mg, 4시간 간격, 2일)를 처방하였다.

임상 검사 동일한 검사자(SB)가 모든 임상 측정을 수행했습니다. 검사자 내 보정을 수행하기 위해 치과 임플란트를 제공하는 15명의 비연구 개인을 선택했습니다. 검사자는 24시간 동안 모든 개인의 임플란트 주변 탐침 깊이를 두 번 측정했습니다. 클래스 내 상관관계는 95% 재현성으로 계산되었습니다.

North Carolina/Colorvue 프로브(Hu-Friedy, Chicago, IL, USA)를 사용하여 연구에 포함된 치과 임플란트의 4개 부위에서 베이스라인(발치 및 GBR 전)과 3개월 후 다음 매개변수를 측정했습니다. 위: 탐침 깊이(PPD/mm), 이는 치주 열구/주머니의 바닥에서 치주 변연까지의 거리였습니다. CAL/mm(Clinical Attachment Level), 시멘트 법랑질 접합부에서 치주낭 바닥까지의 거리입니다.

미생물종 평가 장벽(GBR 그룹) 및 수리 영역(비GBR 그룹)에 존재하는 생물막의 미생물학적 평가는 추출 3일 후 및 28일 후(GBR 그룹에서 장벽 제거 시) 수행되었습니다. ).

미생물 분석은 Illumina HiSeq 플랫폼에 의한 16S 유전자의 시퀀싱 기술을 통해 수행되며, 이를 통해 동일한 샘플에서 미생물 집단의 다양성과 풍부함을 결정할 수 있습니다. 이 평가는 Centralized Multi-User Laboratory of Functional Genomics에서 수행됩니다.

환자가 보고한 매개변수 평가 수술 후 이환율 및 삶의 질과 관련된 증상과 관련된 환자 중심 매개변수 평가는 추출 3, 7, 14, 28, 35 및 42일 후에 설문지를 사용하여 수행됩니다. , 100mm의 수평선 기준(Visual Analog Scale; VAS).

파골 세포/배아 형성과 관련된 마커의 분자 평가 치과용 임플란트를 식립하기 위한 수술 절차에서 베드를 준비하기 위한 밀링 중에 진공 펌프/수술용 흡인기에 적합한 일회용 뼈 수집기를 사용하여 뼈 조직을 제거합니다. 뼈 조직 샘플의 일부는 유전자 발현 분석에 사용되고 다른 일부는 파골세포/배아세포와 관련된 다양한 바이오마커의 면역효소 분석에 사용됩니다. 파골세포/모세포형성 마커와 관련된 모든 분자분석은 본부기관 치과연구소에서 진행하게 됩니다. 수집된 모든 생검은 RNA 분해를 방지하기 위해 특정 용액에 보관됩니다(RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

유전자 발현 분석 RNA 추출: 제거된 조직은 RNA의 분해를 피하기 위해 용액에 적절하게 포장됩니다(RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). 전체 RNA는 TRIZOL 시약 방법(Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA)으로 분리됩니다. 먼저 RNAlater 용액을 흡입하고 분쇄된 샘플을 TRIZOL 시약에 넣고 30초 동안 흔들고 실온에서 5분 동안 배양합니다. 이 시간 후, 클로로포름(Sigma, St. Louis, MO, USA)을 첨가하고, 교반하고, 4oC의 온도에서 15분 동안 10,000rpm으로 원심분리한다. 수성 부분은 이소프로판올이 첨가될 다른 튜브로 옮겨지고, 진탕되고, -20oC의 온도에서 20분 동안 인큐베이션되고, 위에서 설명한 것과 동일한 방식으로 원심분리된다. 이 과정이 끝나면 펠릿이 형성되고 냉각된 75% 에탄올로 세척하고 실온에서 건조합니다. RNA 샘플은 디에틸피로카보네이트(DEPC)로 처리된 약 50µl의 물에 재현탁되고 -70oC에서 보관됩니다. RNA의 농도는 분광광도계를 사용하여 결정됩니다.

DNAase 처리 및 Real-time PCR(RT-PCR)을 실시합니다.GAPDH(참조 유전자), TGF-β(Transforming growth factor), BSP(Bone sialoprotein) 및 Collagen type I(COL-I)에 대한 프라이머 )는 LightCycler(Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany)용 프라이머를 디자인하기 위해 특별히 개발된 pGBRram의 도움으로 디자인될 것입니다. 모든 프라이머는 양성 및 음성 대조군을 사용하여 용융 곡선을 확인하여 특이성을 확인합니다. 반응 프로파일은 장비 제조업체가 제안한 공식에 따라 결정됩니다. 각각의 "실행"에 대해 물을 음성 대조군으로 사용하고 반응 생성물을 제조업체 고유의 pGBRram(LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH)을 사용하여 정량화합니다. GAPDH는 값의 정규화를 위한 참조 유전자(하우스키핑)로 사용됩니다.

Immunoenzymatic Analysis 임플란트 식립 시 수집된 뼈 조직 샘플의 일부는 0.05% Tween-20이 포함된 400μL의 인산염 완충 식염수(PBS)가 들어 있는 멸균 튜브에 배치됩니다. 모든 샘플은 -20°C에서 보관됩니다. 그런 다음 조직의 무게를 측정하고 균질화한 후 최종 농도가 조직 100mg/mL이 되도록 PBS에 용해합니다. 10분 동안 Vortex에서 교반한 후, 각 샘플을 370g에서 5분 동안 원심분리하고, 상등액을 수집하여 사용할 때까지 -70 °C에서 보관합니다. 프로테아제 활성을 피하기 위해, 전체 절차는 4℃에서 수행될 것이다. HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), NF-κB binding activator receptor (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), 오스테오넥틴(OSN) 및 Tartrate Resistant Acid Phosphatase( TRAP)(HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA)는 Luminex/MAGpix 기술을 사용하여 결정될 것이며, 이는 동일한 샘플에서 다른 마커의 존재를 결정하고 절대적인 방식으로 농도를 정량화할 수 있습니다.

이를 위해 제조업체의 지침에 따라 위에서 언급한 고감도 패널의 도움을 받아 96웰 플레이트에서 분석을 수행합니다. 샘플을 두 번 평가하고 얻은 값의 평균을 다음 용도로 사용합니다. 각 마커의 농도를 계산합니다.

환자의 단층 분석 CT 스캔은 발치 직후와 3개월 후(임플란트 식립 전)에 얻을 것입니다. 서로 다른 기간에 수행된 단층 촬영 검사는 Dental Slice 소프트웨어를 통해 소켓의 발치 및 보존 후 골 손실률을 수직 및 수평으로 분석합니다.