Påvirkning af PTFE-d-barriere, der bevidst udsættes for bukalt miljø i guidet knogleregenerering til Ridge-bevaring

Undersøgelsesdesign Denne klinisk-laboratoriske, parallelle, randomiserede, prospektive og kontrollerede undersøgelse vil bestemme virkningen af ​​en PTFE-d-barriere bevidst udsat for bukalt miljø i guidet knogleregenerering til ridge-bevaring ved hjælp af mikrobiologiske, radiografiske, patientcentrerede resultater, molekylært. mønster af knoglerelaterede markører og implantatstabilisering.

Eksperimentelle grupper

Efter lokalbedøvelse blev der lavet et intrasulkulært snit rundt om tanden, der skulle ekstraheres, og en mucoperiosteal flap blev løsnet for tilstrækkelig eksponering af 3 mm af alveolarkammen ved siden af ​​alveolen. Derefter blev procedurer for dislokation og tandfjernelse udført på en minimalt invasiv måde, ved brug af periotomer, håndtag og ekstraktorer, hvis det var nødvendigt. Efterfølgende blev der udført vanding med saltvandsopløsning, og derefter, ved hjælp af specifik software, vil patienter blive tilfældigt tildelt til at modtage en af ​​følgende behandlinger:

GBR Group: Efter ekstraktion blev PTFE-d membranen (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) tilpasset med en saks og justeret over soklen, der oversteg tre millimeter fra dens marginer. Derefter blev membranen indsat subperiostalt under de bukkale og palatale klapper ved hjælp af Molt-afløseren. Der blev udført minimal flapreflektion for at stabilisere membranen, som blev opretholdt bevidst udsat for det orale miljø. Før suturering blev den passive stabilitet af membranen over alveolen bekræftet, samt fraværet af folder eller rynker i membranen. Flapperne blev derefter nærmet i præ-ekstraktionspositionen og sutureret med krydsede suturer med det formål at øge stabiliteten af ​​membranen med PTFE 4-0 gevind (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA).

Ikke-GBR gruppe: Efter ekstraktion blev der ikke udført yderligere behandling. Flapperne blev derefter genplaceret og syet med 5,0 nylontråd (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

Midlertidige klæbende proteser tilpasset til tilstødende tænder blev installeret og vedligeholdt indtil tidspunktet for implantatplacering. Den supragingivale biofilmkontrol blev udført med mundskyllevand af 0,12% klorhexidin i en periode på 4 uger i alle forsøgsgrupper. Præ-kirurgisk antiinflammatorisk behandling (dexamethason 4 mg, enkeltdosis, 1 time før proceduren) og postoperative analgetika (natriumdipyron 500 mg, hver 4. time, i 3 dage) var indiceret. Patienterne blev instrueret i kun at tage smertestillende medicin i tilfælde af smerter i den ovenfor beskrevne periode, idet de blev bedt om at registrere mængden af ​​indtaget medicin. Profylaktisk systemisk antimikrobiel behandling blev udført 1 time før kirurgiske indgreb med 2 gram Amoxicillin og den samme medicin vil blive ordineret i 7 dage i den postoperative periode, 500 mg hver 8. time.

Suturer blev fjernet efter 15 dage. I GBR-gruppen blev membranen fjernet efter 28 dages perioden under bedøvelse (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), idet den forsigtigt blev fjernet med trækbevægelsen ved hjælp af en pincet.

Alle patienter blev overvåget månedligt i hele undersøgelsesperioden for at observere periodontal vedligeholdelse og forstærke hygiejneinstruktioner.

Placering af implantater og proteser Tre måneder efter ekstraktionen fik patienterne, uanset forsøgsgruppen, tandimplantater. Derfor blev de støbt til rehabiliteringsplanlægning, og der blev lavet kirurgiske guider til brug ved implantatplaceringsoperationen. I den kirurgiske procedure blev patienterne underkastet lokalbedøvelse, og der blev lavet mucoperiosteale klapper for adgang og tilstrækkelig eksponering af alveolarknoglen. Derefter blev der boret for at indsætte implantaterne. I begge grupper blev der udført enkelttrinsimplantater med øjeblikkelig placering af provisoriske proteser på implantater. Alle operationer blev udført af den samme operatør (EKM).

Efter den eksperimentelle fase af undersøgelsen blev de definitive proteser installeret. Suturerne af de kirurgiske procedurer blev udført med 5,0 nylontråd (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos), og det blev fjernet efter 7 dage. Den supragingivale biofilmkontrol blev udført med mundskyllevand af 0,12 % klorhexidin i en periode på 7 dage efter operationen. Præ-kirurgisk antiinflammatorisk behandling (dexamethason 4 mg, enkeltdosis, 1 time før proceduren) og postoperative analgetika (natriumdipyron 500 mg, hver 4. time, i 2 dage) var indiceret.

Klinisk undersøgelse Samme undersøger (SB) udførte alle kliniske målinger. Til at udføre intra-eksaminator-kalibreringen blev 15 ikke-undersøgelsespersoner, der præsenterede tandimplantater, valgt. Undersøgeren målte peri-implantatets sonderingsdybde for alle individer to gange inden for en 24-timers periode. Intra-klasse korrelationen blev beregnet som 95% reproducerbarhed.

Ved hjælp af en North Carolina/Colorvue-sonde (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) blev følgende parametre målt på fire steder af tandimplantaterne inkluderet i undersøgelsen ved baseline (før ekstraktion og GBR) og ved 3-måneders efter- op: Probing Depth (PPD/mm), som var afstanden fra bunden af ​​den periodontale sulcus/lomme til den periodontale margin; Clinical Attachment Level (CAL/mm), som var afstanden fra cementemaljeforbindelsen til bunden af ​​parodontallommen.

Mikrobiomavaluering Mikrobiologiske vurderinger af biofilmen til stede på barriererne (GBR-gruppen) og i reparationsområdet (ikke-GBR-gruppen) blev foretaget efter 3 dages ekstraktion og efter 28 dage (på tidspunktet for fjernelse af barrieren i GBR-gruppen ).

Den mikrobiologiske analyse vil blive udført gennem sekventeringsteknikken for 16S-genet af Illumina HiSeq-platformen, som gør det muligt at bestemme mangfoldigheden og overfloden af ​​den mikrobielle population i samme prøve. Denne evaluering vil blive udført på Centralized Multi-User Laboratory of Functional Genomics.

Evaluering af parametre indberettet af patienten Vurderingen af ​​patientcentrerede parametre vedrørende symptomer relateret til morbiditet og livskvalitet i den postoperative periode vil blive udført efter 3, 7, 14, 28, 35 og 42 dages ekstraktion ved hjælp af spørgeskemaer , baseret på en vandret linje på 100 mm (Visual Analog Scale; VAS).

Molekylær evaluering af markører relateret til osteoklast/blastogenese I den kirurgiske procedure for at placere tandimplantater, under fræsningen for at forberede sengen, vil knoglevæv blive fjernet ved hjælp af en engangs knogleopsamler tilpasset til vakuumpumpen/kirurgisk aspirator. En del af knoglevævsprøven vil blive brugt til analyse af genekspression og en anden del til immunoenzymatisk analyse af forskellige biomarkører relateret til osteoklast/blastogenese. Alle molekylære analyser relateret til osteoklast / blastogenese markører vil blive udført på Dental Research Laboratory i hovedkvartersinstitutionen. Alle indsamlede biopsier vil blive opbevaret i en specifik opløsning for at undgå nedbrydning af RNA (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Genekspressionsanalyse RNA-ekstraktion: Det fjernede væv vil blive pakket korrekt i en opløsning for at undgå nedbrydning af RNA'et (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). Det totale RNA vil blive isoleret ved hjælp af TRIZOL-reagensmetoden (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA). Først vil RNAlater-opløsningen blive aspireret, og den knuste prøve vil derefter blive placeret i TRIZOL-reagenset, rystet i 30 sekunder og inkuberet i 5 minutter ved stuetemperatur. Efter denne periode tilsættes chloroform (Sigma, St. Louis, MO, USA), omrøres og centrifugeres ved 10.000 rpm i 15 minutter ved en temperatur på 4oC. Den vandige portion overføres til et andet rør, hvortil der tilsættes isopropanol, rystes, inkuberes i 20 minutter ved en temperatur på -20oC og centrifugeres på samme måde som beskrevet ovenfor. Efter denne proces vil der blive dannet en pellet, som vaskes med afkølet 75% ethanol og tørres ved stuetemperatur. RNA-prøverne vil blive resuspenderet i ca. 50 µl vand behandlet med diethylpyrocarbonat (DEPC) og opbevaret ved -70oC. Koncentrationen af ​​RNA vil blive bestemt ved hjælp af et spektrofotometer.

Behandling med DNAase vil blive udført, og real-time PCR (RT-PCR) vil blive udført. Primere for GAPDH (referencegen), Transforming growth factor (TGF-β), Bone sialoprotein (BSP) og Collagen type I (COL-I) ) vil blive designet ved hjælp af et pGBRram udviklet specifikt til at designe primere til LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Tyskland). Alle primere vil blive kontrolleret for specificitet ved at kontrollere smeltekurven ved hjælp af positive og negative kontroller. Reaktionsprofilen vil blive bestemt i henhold til formlen foreslået af udstyrsproducenten. Til hver af "kørslerne" vil vand blive brugt som en negativ kontrol, og produktet af reaktionerne vil blive kvantificeret ved hjælp af producentens eget pGBRram (LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH). GAPDH vil blive brugt som referencegen (husholdning) til normalisering af værdier.

Immunoenzymatisk analyse En del af knoglevævsprøven, der indsamles på tidspunktet for implantatplacering, vil blive anbragt i sterile rør indeholdende 400 μL fosfatbufret saltvand (PBS) med 0,05 % Tween-20. Alle prøver vil blive opbevaret ved -20 ° C. Derefter vil vævet blive vejet, homogeniseret og opløst i PBS til en slutkoncentration på 100 mg væv/ml. Efter omrøring i Vortex i 10 minutter, vil hver prøve blive centrifugeret ved 370 g i 5 minutter, supernatanten vil blive opsamlet og opbevaret ved -70 ° C indtil brug. For at undgå proteaseaktivitet vil hele proceduren blive udført ved 4°C. Dickkopf (DKK1), Sclerostin (SOST), Tumornekrosefaktor (TNF-α), Osteoprotegerin (OPG), Osteocalcin (OC), Osteopontin (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), NF-KB-bindingsaktivatorreceptor (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), Osteonectin (OSN) og tartratresistent syrephosphatase ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), vil blive bestemt ved hjælp af Luminex / MAGpix teknologi, som gør det muligt at bestemme tilstedeværelsen og kvantificere på en absolut måde koncentrationen af ​​forskellige markører i den samme prøve.

Til dette formål vil analyserne blive udført i plader med 96 brønde ved hjælp af ovennævnte paneler med høj følsomhed efter producentens instruktioner. Prøverne vil blive evalueret i to eksemplarer, og gennemsnittet af de opnåede værdier vil blive brugt til at beregne koncentrationerne af hver markør.

Tomografisk analyse CT-scanninger af patienterne vil blive foretaget umiddelbart efter ekstraktion og 3 måneder senere (før implantatplacering). Tomografiske undersøgelser udført i de forskellige perioder vil blive analyseret for hastigheden af ​​knogletab efter ekstraktion og konservering af soklen, både vertikalt og horisontalt, gennem Dental Slice-softwaren.