Einfluss der absichtlich der bukalen Umgebung ausgesetzten PTFE-d-Barriere bei der gesteuerten Knochenregeneration auf die Kieferkammerhaltung

Studiendesign In dieser klinisch-laboratorischen, parallelen, randomisierten, prospektiven und kontrollierten Studie werden die Auswirkungen der absichtlich der bukalen Umgebung ausgesetzten PTFE-D-Barriere bei der gesteuerten Knochenregeneration zur Kieferkammkonservierung unter Verwendung mikrobiologischer, radiologischer, patientenzentrierter und molekularer Ergebnisse bestimmt Muster knochenbezogener Marker und Implantatstabilisierung.

Experimentelle Gruppen

Nach örtlicher Betäubung wurde ein intrasulkulärer Einschnitt um den zu extrahierenden Zahn herum vorgenommen und ein Mukoperiostlappen abgenommen, um eine ausreichende Freilegung von 3 mm des an die Alveole angrenzenden Alveolarkamms zu ermöglichen. Anschließend wurden Eingriffe zur Luxation und Zahnentfernung minimalinvasiv durchgeführt, bei Bedarf unter Verwendung von Periotomen, Hebeln und Extraktoren. Anschließend wurde eine Spülung mit Kochsalzlösung durchgeführt und anschließend werden die Patienten mithilfe einer speziellen Software nach dem Zufallsprinzip einer der folgenden Behandlungen zugewiesen:

GBR-Gruppe: Nach der Extraktion wurde die PTFE-d-Membran (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) mit einer Schere angepasst und über der Pfanne angepasst, wobei der Abstand mehr als drei Millimeter beträgt seine Ränder. Anschließend wurde die Membran mit Hilfe des Molt-Detacheurs subperiostal unter den bukkalen und palatinalen Lappen eingeführt. Um die Membran zu stabilisieren, wurde eine minimale Lappenreflexion durchgeführt, die absichtlich der Mundumgebung ausgesetzt blieb. Vor dem Nähen wurde die passive Stabilität der Membran über der Alveole sowie das Fehlen von Falten oder Fältchen in der Membran bestätigt. Anschließend wurden die Lappen in der Position vor der Extraktion angefahren und mit gekreuzten Nähten mit PTFE 4-0-Faden (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) vernäht, um die Stabilität der Membran zu erhöhen.

Nicht-GBR-Gruppe: Nach der Extraktion wurde keine weitere Behandlung durchgeführt. Anschließend wurden die Lappen neu positioniert und mit 5,0-Nylonfaden (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) vernäht.

An die Nachbarzähne angepasste temporäre Klebeprothesen wurden installiert und bis zum Zeitpunkt der Implantatinsertion beibehalten. Die supragingivale Biofilmkontrolle wurde in allen Versuchsgruppen über einen Zeitraum von 4 Wochen mit Mundspülungen von 0,12 % Chlorhexidin durchgeführt. Indiziert waren eine präoperative entzündungshemmende Therapie (Dexamethason 4 mg, Einzeldosis, 1 Stunde vor dem Eingriff) und postoperative Analgetika (Natriumdipyron 500 mg, alle 4 Stunden, für 3 Tage). Die Patienten wurden angewiesen, schmerzstillende Medikamente nur dann einzunehmen, wenn während des oben beschriebenen Zeitraums Schmerzen auftraten, und sie wurden angewiesen, die Menge der eingenommenen Medikamente zu protokollieren. Eine prophylaktische systemische antimikrobielle Therapie wurde 1 Stunde vor dem chirurgischen Eingriff mit 2 Gramm Amoxicillin durchgeführt und das gleiche Medikament wird für 7 Tage in der postoperativen Phase verschrieben, 500 mg alle 8 Stunden.

Die Nähte wurden nach 15 Tagen entfernt. In der GBR-Gruppe wurde die Membran nach dem 28-tägigen Zeitraum unter Narkose entfernt (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017) und dabei sanft mit der Zugbewegung mit Hilfe von a entfernt Pinzette.

Alle Patienten wurden während des gesamten Studienzeitraums monatlich überwacht, um die parodontale Erhaltung zu überwachen und die Hygienevorschriften zu verstärken.

Platzierung von Implantaten und Prothesen Drei Monate nach der Extraktion erhielten die Patienten unabhängig von der Versuchsgruppe Zahnimplantate. Daher wurden sie für die Rehabilitationsplanung geformt und es wurden Bohrschablonen für die Implantatinsertionschirurgie angefertigt. Bei dem chirurgischen Eingriff wurden die Patienten einer Lokalanästhesie unterzogen und es wurden Mukoperiostlappen für den Zugang und eine ausreichende Freilegung des Alveolarknochens angelegt. Anschließend wurde gebohrt, um die Implantate einzusetzen. In beiden Gruppen wurden einzeitige Implantate durchgeführt, wobei sofort provisorische Prothesen auf den Implantaten platziert wurden. Alle Operationen wurden vom selben Operateur (EKM) durchgeführt.

Nach der experimentellen Phase der Studie wurden die endgültigen Prothesen eingesetzt. Die Nähte der chirurgischen Eingriffe wurden mit 5,0-Nylonfaden (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) durchgeführt und nach 7 Tagen entfernt. Die Kontrolle des supragingivalen Biofilms erfolgte mit Mundspülungen mit 0,12 % Chlorhexidin über einen Zeitraum von 7 Tagen nach der Operation. Eine präoperative entzündungshemmende Therapie (Dexamethason 4 mg, Einzeldosis, 1 Stunde vor dem Eingriff) und postoperative Analgetika (Natriumdipyron 500 mg, alle 4 Stunden, für 2 Tage) waren angezeigt.

Klinische Untersuchung Derselbe Prüfer (SB) führte alle klinischen Messungen durch. Zur Durchführung der Intra-Untersucher-Kalibrierung wurden 15 Nicht-Studienpersonen ausgewählt, die Zahnimplantate vorstellten. Der Untersucher maß die periimplantäre Sondierungstiefe bei allen Personen zweimal innerhalb von 24 Stunden. Die klasseninterne Korrelation wurde mit einer Reproduzierbarkeit von 95 % berechnet.

Mit einer North Carolina/Colorvue-Sonde (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) wurden die folgenden Parameter an vier Stellen der in die Studie einbezogenen Zahnimplantate zu Studienbeginn (vor Extraktion und GBR) und nach 3 Monaten gemessen: oben: Sondierungstiefe (PPD/mm), das ist der Abstand vom Boden des parodontalen Sulkus/der parodontalen Tasche bis zum parodontalen Rand; Klinisches Bindungsniveau (CAL/mm), das den Abstand von der Zement-Schmelz-Verbindung zum Boden der Parodontaltasche darstellt.

Mikrobiombewertung Mikrobiologische Bewertungen des Biofilms auf den Barrieren (GBR-Gruppe) und im Reparaturbereich (Nicht-GBR-Gruppe) wurden nach 3 Tagen der Extraktion und nach 28 Tagen (zum Zeitpunkt der Entfernung der Barriere in der GBR-Gruppe) durchgeführt ).

Die mikrobiologische Analyse erfolgt mithilfe der Sequenzierungstechnik des 16S-Gens durch die Illumina HiSeq-Plattform, die es ermöglicht, die Diversität und Häufigkeit der mikrobiellen Population in derselben Probe zu bestimmen. Diese Bewertung wird im zentralen Mehrbenutzerlabor für funktionelle Genomik durchgeführt.

Bewertung der vom Patienten gemeldeten Parameter Die Bewertung patientenzentrierter Parameter in Bezug auf Symptome im Zusammenhang mit Morbidität und Lebensqualität in der postoperativen Phase wird nach 3, 7, 14, 28, 35 und 42 Tagen nach der Extraktion anhand von Fragebögen durchgeführt , basierend auf einer horizontalen Linie von 100 mm (Visual Analog Scale; VAS).

Molekulare Bewertung von Markern im Zusammenhang mit Osteoklasten/Blastogenese. Bei dem chirurgischen Eingriff zur Platzierung von Zahnimplantaten wird während des Fräsens zur Vorbereitung des Bettes Knochengewebe mithilfe eines Einweg-Knochensammlers entfernt, der an die Vakuumpumpe/den chirurgischen Absauger angepasst ist. Ein Teil der Knochengewebeprobe wird zur Analyse der Genexpression und ein anderer Teil zur immunenzymatischen Analyse verschiedener Biomarker im Zusammenhang mit Osteoklasten/Blastogenese verwendet. Alle molekularen Analysen im Zusammenhang mit Osteoklasten-/Blastogenese-Markern werden im Dentalforschungslabor der Haupteinrichtung durchgeführt. Alle gesammelten Biopsien werden in einer speziellen Lösung gelagert, um einen Abbau der RNA zu verhindern (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Genexpressionsanalyse RNA-Extraktion: Die entnommenen Gewebe werden ordnungsgemäß in eine Lösung verpackt, um einen Abbau der RNA zu verhindern (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). Die Gesamt-RNA wird mit der TRIZOL-Reagenzmethode (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA) isoliert. Zuerst wird die RNAlater-Lösung abgesaugt und die zerkleinerte Probe dann in das TRIZOL-Reagenz gegeben, 30 Sekunden lang geschüttelt und 5 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Nach diesem Zeitraum wird Chloroform (Sigma, St. Louis, MO, USA) zugegeben, gerührt und 15 Minuten lang bei 10.000 U/min bei einer Temperatur von 4 °C zentrifugiert. Der wässrige Teil wird in ein anderes Röhrchen überführt, in das Isopropanol gegeben wird, geschüttelt, 20 Minuten lang bei einer Temperatur von -20 °C inkubiert und auf die gleiche Weise wie oben beschrieben zentrifugiert. Nach diesem Vorgang entsteht ein Pellet, das mit gekühltem 75 %igem Ethanol gewaschen und bei Raumtemperatur getrocknet wird. Die RNA-Proben werden in etwa 50 µl mit Diethylpyrocarbonat (DEPC) behandeltem Wasser resuspendiert und bei -70 °C gelagert. Die Konzentration der RNA wird mit einem Spektrophotometer bestimmt.

Es wird eine Behandlung mit DNAase durchgeführt und eine Echtzeit-PCR (RT-PCR) durchgeführt. Primer für GAPDH (Referenzgen), Transforming Growth Factor (TGF-β), Bone Sialoprotein (BSP) und Collagen Typ I (COL-I). ) wird mit Hilfe eines pGBRram entwickelt, der speziell für die Entwicklung von Primern für LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Deutschland) entwickelt wurde. Alle Primer werden auf Spezifität überprüft, indem die Schmelzkurve anhand von Positiv- und Negativkontrollen überprüft wird. Das Reaktionsprofil wird gemäß der vom Gerätehersteller vorgeschlagenen Formel bestimmt. Für jeden der „Läufe“ wird Wasser als Negativkontrolle verwendet und das Produkt der Reaktionen wird mit dem pGBRram des Herstellers (LightCycler Relative Quantification Software – Roche Diagnostics GmbH) quantifiziert. GAPDH wird als Referenzgen (Housekeeping) zur Normalisierung der Werte verwendet.

Immunenzymatische Analyse Ein Teil der zum Zeitpunkt der Implantatinsertion entnommenen Knochengewebeprobe wird in sterile Röhrchen mit 400 μl phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) mit 0,05 % Tween-20 gegeben. Alle Proben werden bei -20 °C gelagert. Anschließend wird das Gewebe gewogen, homogenisiert und in PBS auf eine Endkonzentration von 100 mg Gewebe/ml aufgelöst. Nach 10-minütigem Rühren im Vortex wird jede Probe 5 Minuten lang bei 370 g zentrifugiert, der Überstand wird gesammelt und bis zur Verwendung bei -70 °C gelagert. Um Proteaseaktivität zu vermeiden, wird der gesamte Eingriff bei 4 °C durchgeführt. Dickkopf (DKK1), Sklerostin (SOST), Tumornekrosefaktor (TNF-α), Osteoprotegerin (OPG), Osteocalcin (OC), Osteopontin (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), NF-κB-Bindungsaktivatorrezeptor (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), Osteonectin (OSN) und Tartratresistente saure Phosphatase ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) wird mithilfe der Luminex/MAGpix-Technologie bestimmt, die es ermöglicht, das Vorhandensein verschiedener Marker in derselben Probe zu bestimmen und deren Konzentration absolut zu quantifizieren.

Zu diesem Zweck werden die Analysen in 96-Well-Platten mit Hilfe der oben genannten hochempfindlichen Panels gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Die Proben werden im Duplikat ausgewertet und der Durchschnitt der erhaltenen Werte verwendet Berechnen Sie die Konzentrationen jedes Markers.

Tomographische Analyse-CT-Scans der Patienten werden unmittelbar nach der Extraktion und 3 Monate später (vor der Implantatinsertion) angefertigt. Tomographische Untersuchungen, die in den verschiedenen Zeiträumen durchgeführt wurden, werden mithilfe der Dental Slice-Software auf die Rate des Knochenverlusts nach Extraktion und Konservierung der Pfanne analysiert, sowohl vertikal als auch horizontal.