Påvirkning av PTFE-d-barriere med hensikt utsatt for bukalt miljø i veiledet beinregenerering til ryggbevaring

Studiedesign Denne klinisk-laboratoriske, parallelle, randomiserte, prospektive og kontrollerte studien vil bestemme virkningen av PTFE-d-barriere som med hensikt eksponeres for bukalt miljø i veiledet beinregenerering til ryggbevaring, ved bruk av mikrobiologiske, radiografiske, pasientsentrerte utfall, molekylært. mønster av beinrelaterte markører og implantatstabilisering.

Eksperimentelle grupper

Etter lokalbedøvelse ble det foretatt et intrasulkulært snitt rundt tannen som skulle trekkes ut og en mucoperiosteal klaff ble løsnet for tilstrekkelig eksponering av 3 mm av alveolarkammen ved siden av alveolen. Deretter ble prosedyrer for dislokasjon og tannfjerning utført på en minimalt invasiv måte, ved bruk av periotomer, spaker og ekstraktorer, om nødvendig. Deretter ble vanning med saltvann utført, og deretter, ved hjelp av spesifikk programvare, vil pasienter bli tilfeldig tildelt en av følgende behandlinger:

GBR Group: Etter ekstraksjon ble PTFE-d-membranen (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) tilpasset med saks og justert over sokkelen, over tre millimeter fra sine marginer. Deretter ble membranen satt inn subperiostalt under bukkale og palatale klaffer ved hjelp av Molt-løseren. Minimal klaffrefleksjon ble utført for å stabilisere membranen, som ble holdt med vilje eksponert for det orale miljøet. Før suturering ble den passive stabiliteten til membranen over alveolen bekreftet, samt fravær av folder eller rynker i membranen. Klaffene ble deretter nærmet i pre-ekstraksjonsposisjon og suturert med kryssede suturer, med sikte på å øke stabiliteten til membranen, med PTFE 4-0-tråd (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA).

Ikke-GBR gruppe: Etter ekstraksjon ble det ikke utført ytterligere behandling. Klaffene ble deretter reposisjonert og suturert med 5,0 nylontråd (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

Midlertidige selvklebende proteser tilpasset tilstøtende tenner ble installert og vedlikeholdt frem til øyeblikket av implantatplassering. Den supragingivale biofilmkontrollen ble utført med munnskyll med 0,12 % klorheksidin i en periode på 4 uker i alle forsøksgruppene. Pre-kirurgisk antiinflammatorisk behandling (deksametason 4 mg, enkeltdose, 1 time før prosedyren) og postoperative analgetika (natriumdipyron 500 mg, hver 4. time, i 3 dager) var indisert. Pasientene ble bedt om å ta smertestillende medisiner bare ved smerter i perioden beskrevet ovenfor, og ble bedt om å registrere mengden medisiner som ble inntatt. Profylaktisk systemisk antimikrobiell behandling ble utført 1 time før kirurgiske inngrep med 2 gram Amoxicillin og samme medisin vil bli foreskrevet i 7 dager i postoperativ periode, 500 mg hver 8. time.

Suturer ble fjernet etter 15 dager. I GBR-gruppen ble membranen fjernet etter 28-dagersperioden, under anestesi (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), og ble fjernet forsiktig med trekkbevegelsen ved hjelp av en pinsett.

Alle pasienter ble overvåket månedlig, gjennom hele studieperioden, for å observere periodontalt vedlikehold og forsterke hygieneinstruksjoner.

Plassering av implantater og proteser Tre måneder etter ekstraksjonen, uavhengig av forsøksgruppen, fikk pasientene tannimplantater. Derfor ble de støpt for rehabiliteringsplanlegging og kirurgiske guider ble laget for å brukes i implantatplasseringsoperasjonen. I den kirurgiske prosedyren ble pasientene underkastet lokalbedøvelse og mucoperiosteal klaffer ble laget for tilgang og tilstrekkelig eksponering av alveolarbenet. Deretter ble det boret for å sette inn implantatene. I begge gruppene ble det utført ett-trinns implantater, med umiddelbar plassering av provisoriske proteser på implantater. Alle operasjoner ble utført av samme operatør (EKM).

Etter den eksperimentelle fasen av studien ble de definitive protesene installert. Suturene til de kirurgiske prosedyrene ble utført med 5,0 nylontråd (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) og den ble fjernet etter 7 dager. Den supragingivale biofilmkontrollen ble utført med munnvann med 0,12 % klorheksidin i en periode på 7 dager etter operasjonen. Pre-kirurgisk antiinflammatorisk behandling (deksametason 4 mg, enkeltdose, 1 time før prosedyren) og postoperative analgetika (natriumdipyron 500 mg, hver 4. time, i 2 dager) var indisert.

Klinisk undersøkelse Samme undersøker (SB) utførte alle kliniske målinger. For å utføre intra-eksaminator-kalibreringen ble 15 ikke-studerte personer som presenterte tannimplantater valgt. Undersøkeren målte peri-implantatets sonderingsdybde for alle individer to ganger i løpet av en 24-timers periode. Intraklassekorrelasjonen ble beregnet som 95 % reproduserbarhet.

Ved å bruke en North Carolina/Colorvue-sonde (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA), ble følgende parametere målt på fire steder av tannimplantatene inkludert i studien ved baseline (før ekstraksjon og GBR) og ved 3-måneders oppfølging- opp: Probing Depth (PPD/mm), som var avstanden fra bunnen av periodontal sulcus/lomme til periodontal margin; Clinical Attachment Level (CAL/mm), som var avstanden fra sementemaljekrysset til bunnen av periodontallommen.

Mikrobiomavaluering Mikrobiologiske vurderinger av biofilmen på barrierene (GBR-gruppen) og i reparasjonsområdet (ikke-GBR-gruppen) ble gjort etter 3 dagers ekstraksjon og etter 28 dager (på tidspunktet for fjerning av barrieren i GBR-gruppen) ).

Den mikrobiologiske analysen vil bli gjort gjennom sekvenseringsteknikken til 16S-genet av Illumina HiSeq-plattformen, som gjør det mulig å bestemme mangfoldet og overfloden av den mikrobielle populasjonen i samme prøve. Denne evalueringen vil bli utført ved Centralized Multi-User Laboratory of Functional Genomics.

Evaluering av parametere rapportert av pasienten Vurderingen av pasientsentrerte parametere vedrørende symptomer relatert til sykelighet og livskvalitet i den postoperative perioden vil bli utført etter 3, 7, 14, 28, 35 og 42 dagers ekstraksjon ved bruk av spørreskjemaer. , basert på en horisontal linje på 100 mm (Visual Analog Scale; VAS).

Molekylær evaluering av markører relatert til osteoklast/blastogenese I den kirurgiske prosedyren for plassering av tannimplantater, under fresingen for å klargjøre sengen, vil benvev fjernes ved hjelp av en engangsbeinsamler tilpasset vakuumpumpen/kirurgisk aspirator. En del av benvevsprøven vil bli brukt til analyse av genuttrykk og en annen del til immunoenzymatisk analyse av ulike biomarkører relatert til osteoklast/blastogenese. Alle molekylære analyser relatert til osteoklast-/blastogenese-markører vil bli utført ved Dental Research Laboratory ved hovedkvarteret. Alle biopsier som samles inn vil bli lagret i en spesifikk løsning for å unngå nedbrytning av RNA (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Genekspresjonsanalyse RNA-ekstraksjon: Det fjernede vevene vil bli ordentlig pakket i en løsning for å unngå nedbrytning av RNA (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). Det totale RNA vil bli isolert ved hjelp av TRIZOL-reagensmetoden (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA). Først vil RNAlater-løsningen aspireres og den knuste prøven plasseres i TRIZOL-reagensen, ristes i 30 sekunder og inkuberes i 5 minutter ved romtemperatur. Etter denne perioden vil kloroform (Sigma, St. Louis, MO, USA) tilsettes, omrøres og sentrifugeres ved 10 000 rpm i 15 minutter ved en temperatur på 4oC. Den vandige delen overføres til et annet rør som tilsettes isopropanol, ristes, inkuberes i 20 minutter ved en temperatur på -20oC og sentrifugeres på samme måte som beskrevet ovenfor. Etter denne prosessen vil det dannes en pellet som vaskes med avkjølt 75 % etanol og tørkes ved romtemperatur. RNA-prøvene vil bli resuspendert i omtrent 50 µl vann behandlet med dietylpyrokarbonat (DEPC) og lagret ved -70oC. Konsentrasjonen av RNA vil bli bestemt ved hjelp av et spektrofotometer.

Behandling med DNAase vil bli utført og sanntids PCR (RT-PCR) vil bli utført. Primere for GAPDH (referansegen), Transforming growth factor (TGF-β), Bone sialoprotein (BSP) og Collagen type I (COL-I) ) vil bli designet ved hjelp av et pGBRram utviklet spesielt for å designe primere for LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Tyskland). Alle primere vil bli sjekket for spesifisitet ved å sjekke smeltekurven ved å bruke positive og negative kontroller. Reaksjonsprofilen vil bli bestemt i henhold til formelen foreslått av utstyrsprodusenten. For hver av "kjøringene" vil vann bli brukt som en negativ kontroll, og produktet av reaksjonene vil bli kvantifisert ved hjelp av produsentens eget pGBRram (LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH). GAPDH vil bli brukt som referansegen (housekeeping) for normalisering av verdier.

Immunoenzymatisk analyse En del av benvevsprøven samlet ved tidspunktet for implantatplassering vil bli plassert i sterile rør som inneholder 400 μL fosfatbufret saltvann (PBS) med 0,05 % Tween-20. Alle prøver vil bli lagret ved -20 ° C. Deretter vil vevet veies, homogeniseres og oppløses i PBS til en endelig konsentrasjon på 100 mg vev / ml. Etter omrøring i Vortex i 10 minutter, vil hver prøve bli sentrifugert ved 370g i 5 minutter, supernatanten vil bli samlet og lagret ved -70 °C frem til bruk. For å unngå proteaseaktivitet vil hele prosedyren utføres ved 4 °C. Dickkopf (DKK1), Sclerostin (SOST), Tumornekrosefaktor (TNF-α), Osteoprotegerin (OPG), Osteocalcin (OC), Osteopontin (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), NF-KB-bindende aktivatorreseptor (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), Osteonectin (OSN) og tartratresistent syrefosfatase ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), vil bli bestemt ved hjelp av Luminex / MAGpix-teknologi, som gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen og kvantifisere på en absolutt måte konsentrasjonen av forskjellige markører i samme prøve.

For dette formålet vil analysene bli utført i 96-brønns plater, ved hjelp av høysensitivitetspanelene nevnt ovenfor, i henhold til produsentens instruksjoner. Prøvene vil bli evaluert i duplikat og gjennomsnittet av de oppnådde verdiene vil bli brukt til å beregne konsentrasjonene til hver markør.

Tomografisk analyse CT-skanninger av pasientene vil bli tatt umiddelbart etter ekstraksjon og 3 måneder senere (før implantatplassering). Tomografiske undersøkelser utført i de ulike periodene vil bli analysert for graden av bentap etter ekstraksjon og konservering av socket, både vertikalt og horisontalt, gjennom Dental Slice-programvaren.